甲状腺乳头状癌组织学变型中ERα亚型和VEGF的表达*

金东岭 席 丰 王 蕾 王广邑 时志民

雌激素对靶组织的调节是通过雌激素受体（es⁃trogen receptor，ER）的介导完成已得到业界共识。ER分为α受体（ERα）和β受体（ERβ），但ERα与甲状腺癌之间的关系尚未明确。有研究发现ERα和ERβ在多个器官的血管存在并对血管有广泛的影响[1]。血管内皮生长因子（VEGF）作为肿瘤血管生成中最重要的刺激因子,已被证实是肿瘤侵袭转移的关键因素。本研究旨在应用免疫组化SP法检测部分甲状腺乳头状腺癌（PTC）及甲状腺腺瘤标本中ERα和VEGF的表达情况及其关系。

1 资料与方法

1.1 资料 选取2004年1月—2009年12月河北工程大学医学院病理教研室资料完整的甲状腺肿瘤石蜡包埋标本115例。其中PTC组59例，伴淋巴结转移20例，无淋巴结转移39例，男13例，女46例，年龄24～69岁，平均（40.55±7.89）岁；甲状腺腺瘤组（腺瘤组）56例，男15例，女41例，年龄23～72岁，平均（39.64±6.46）岁。标本常规石蜡切片，HE染色，由两位高年资病理医师明确诊断并按照WHO甲状腺肿瘤组织学分类标准做组织病理分型[2]，患者主要有典型PTC、滤泡亚型、弥漫硬化型、高细胞型、透明细胞型、嗜酸细胞型、乳头状微癌及实性型。全部患者术前均无化疗、放疗及免疫治疗史。另取腺瘤旁经病理证实的正常甲状腺组织30例为对照组，男10例，女20例，年龄25～65岁，平均（37.24±5.52）岁。3组年龄（F=1.724）和性别（χ2=1.333）差异无统计学意义（P>0.05）。

1.2 方法 所有标本均经4%的中性甲醛固定，常规脱水，石蜡包埋，连续4 μm切片，分别做HE和链酶亲和素-过氧化物酶（streptavidin-peroxidase，SP）染色。兔源性ERα单克隆抗体购自Santa Cruz公司（浓度1∶100）。兔抗人VEGF单抗、SP检测试剂盒以及DAB显色试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。SP染色按试剂盒说明操作，以3%H2O2室温孵育5～10 min除去内源性过氧化物酶的活性，抗原热修复，常规免疫组化标记，DAB显色，苏木素衬染，中性树胶封片，显微镜观察。用已知ERα、VEGF阳性的人乳腺导管浸润癌标本作为阳性对照；用PBS代替一抗作阴性对照。

1.3 结果判断及评分标准 在细胞膜、细胞浆或细胞核有棕黄色颗粒分布即为ERβ阳性细胞。定性观察按细胞有无显色及染色强度记分（a）：细胞无显色为0分；浅黄色为1分；棕黄色为2分；棕褐色为3分。按显色细胞的比例记分(b):0分为显色细胞<10%；1分为10%～30%细胞显色；2分为31%～60%显色；3分为≥61%以上显色。每例积分=a×b。按积分高低判定：阴性积分为0分；阳性积分≥1分。由2名高年资病理医师逐一观察同一切片以减少人为因素造成的判断误差，以2人观察结果一致作为最终评定结果。

1.4 统计学处理 采用SPSS 10.0统计软件进行统计学分析。符合正态分布的计量资料以±s表示，组间比较用F检验，计数资料组间比较采用χ2检验，相关分析采用Spearman秩相关，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 ERα和VEGF的表达 ERα主要表达于部分正常甲状腺腺上皮细胞、甲状腺腺瘤和PTC的肿瘤细胞质和细胞核，VEGF阳性物质主要表达于甲状腺腺瘤和PTC的肿瘤细胞及其间质血管内皮细胞的细胞质和细胞核，正常甲状腺组织无VEGF表达，见图1～3。3组间ERα和VEGF阳性表达差异均有统计学意义（均P<0.01），组间两两比较差异亦有统计学意义（P<0.05或P<0.01），见表1。

2.2 ERα和VEGF在PTC各组织类型中的表达及其与淋巴结转移的关系 PTC中的弥漫硬化型、高细胞型ERα和VEGF的阳性表达较高，而淋巴结转移较低，乳头状微癌阳性表达较低，见表2。

表1 各组甲状腺组织中ERα和VEGF的表达 例（%）

2.3 甲状腺癌中ERα和VEGF表达的相关性 PTC组ERα和VEGF的表达呈正相关（rs=0.514，P=0.033）。

3 讨论

雌激素具有广泛的生物学效应，其功能是通过其受体介导特定的靶基因转录以促进蛋白质的合成和器官的发育。有研究表明，ERα和ERβ在雌激素敏感器官可以对恶性肿瘤细胞增殖发挥不同的影响[3-4]。虽然甲状腺并非雌激素经典的靶器官，但有研究表明ER与甲状腺细胞的增殖有关[5]。本研究结果显示，ERα表达主要定位于甲状腺腺上皮或腺上皮起源的肿瘤细胞，其在正常甲状腺、甲状腺腺瘤和PTC中的表达率逐渐增高,表明在甲状腺上皮细胞的增生乃至于癌变过程中，雌激素可能通过ERα的表达发挥着重要作用；转移率较高的弥漫硬化型和高细胞型PTC中ERα阳性表达率显著高于转移率相对较低的乳头状微癌，表明ERα的过度表达可能与甲状腺癌的演进和转移有密切关系，这与最近报道的人乳腺癌的研究相似[6]。

表2 ERα和VEGF在PTC组织类型的阳性表达及淋巴结转移情况 例（%）

有研究认为，雌激素有调节雌激素靶组织血管生成的作用[7]。Hyder等[8]研究表明ER与VEGF基因结合可激活其转录作用。虽然雌激素是否能够调节甲状腺组织的血管生成尚不能完全确定，但本研究表明PTC组VEGF高表达，其阳性表达率显著高于对照组和腺瘤组，而且其在高细胞型和弥漫硬化型中的阳性表达也较高，PTC中ERα的表达与VEGF的表达呈正相关，提示雌激素可能通过ERα调节VEGF基因转录，从而对良性和恶性甲状腺肿瘤的血管的生成发挥一定的促进作用。

综上所述，ERα的过度表达可促进甲状腺上皮细胞的增生和分化及其甲状腺肿瘤的血管生成，从而与甲状腺癌的发生发展以及转移有关。

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