HPLC法测定常松八味沉香胶囊中红花黄色素

2011-07-14西安市新城区中医院西安710001

陕西中医 2011年7期

吴茵高海西安市新城区中医院(西安 710001)

常松八味沉香胶囊为民族药的复方中药制剂,由红花、沉香、广枣、檀香、降香、肉豆蔻、天竺黄、莱菔等药材组成。具有清心安神,行气降压。用于气血不调,胸闷气促,胸背疼痛,高血压,心血管疾病,用于冠心病、心律失常。临床用于治疗心肌缺血、心绞痛、心肌梗死、风湿性心脏病、动脉硬化、高血脂、更年期综合征等。为了有效控制其质量,对处方中红花的主要成分羟基红花黄色素 A进行含量测定的研究。现报道如下:

1 仪器与试剂

1.1 仪器高效液相色谱仪(日本日立公司)。N2010型色谱工作站,BS110S型分析天平(德国赛多利斯公司)。 UV7502-PC紫外分光光度仪(上海产)。

1.2 试药羟基红花黄色素 A对照品(批号111637-200301,供含量测定用),甲醇、乙腈为色谱纯,进口分装,其余所用试剂均为分析纯。常松八味沉香胶囊样品均为自制品(每粒 0.5g),批号分别为 090301、090302、 090303。

2 方法与结果

2.1 色谱条件用十八烷基键合硅胶为填充剂;甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液 (26∶2∶ 72)为流动相;检测波长 403nm;柱温 30℃;理论板数按羟基红花黄色素A峰计算应不低于 3000。

2.2 对照品与供试品溶液的制备取羟基红花黄色素 A对照品适量,精密称定,加甲醇制成每 1mL含 48.40 μ g的溶液,作为对照品溶液。取本品研细粉末1.0g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入 25%甲醇25mL,称定重量,超声处理 (功率 300W,频率 50kHz)20、 30、 40、 50、 60min,放冷 ,再称定重量 ,用 25% 甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,作为供试品溶液。取缺红花的阴性对照样品同法制成阴性对照溶液。

2.3 方法学考察

2.3.1 波长选择:取对照品,加 25%甲醇制成每1mL含 10 μ g的溶液,作为对照品溶液。照分光光度法(中国药典 2005年版一部附录 V A)试验,结果羟基红花黄色素 A对照品溶液的最大吸收波长为 403nm。

2.3.2 干扰性试验:取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照样品溶液各 10 μL,在上述色谱条件下进样,记录色谱图,结果在羟基红花黄色素 A对照品色谱峰的相应位置上,供试品有色谱峰被检出,而空白样品无色谱峰被检出。表明以 HPLC法进行测定,在上述色谱条件下,其余药材中的成分对羟基红花黄色素A的含量测定不会产生干扰。见图 1。

2.3.3 线性关系考察:取羟基红花黄色素 A对照品适量,精密称定,加 25%甲醇制成每 1mL含 48.40 μ g的溶液,作为对照品溶液。精密吸取对照品溶液4、8、12、 16、20 μL,进样测定 ,以羟基红花黄色素 A的进样量(μ g)作为横坐标(X),以羟基红花黄色素 A峰面积积分值作为纵坐标(Y),绘制标准曲线并进行回归分析,得回归方程为 Y= 0.000041 X+1.730318,相关系数 r=0.9996。说明羟基红花黄色素 A的进样量在 0.1936～0.9680 μ g之间有良好的线性关系。

2.3.4 精密度试验:取对照品溶液,在上述色谱条件下连续进样 5次,记录色谱图及峰面积积分值,以羟基红花黄色素 A峰面积积分值进行考察,结果 5次进样峰面积积分值的相对标准偏差 RSD为 0.11%。

2.3.5 重复性试验:取同一批号的样品,共 5份,照上述供试品制备项下的方法制备供试品溶液,分别取供试品及对照品溶液各 10 μL,在上述色谱条件下进样测定,结果 RSD为 1.17%。

2.3.6 稳定性试验:取供试品溶液,在上述色谱条件下每隔一定时间进样一次,记录峰面积积分值,经供试品溶液的稳定性试验结果表明,样品溶液在 12h内是稳定的,RSD为 1.13%。

2.3.7 加样回收率试验:精密称取已知含量的样品(共 9份),分别精密加入羟基红花黄色素 A对照品溶液适量(折算为羟基红花黄色素 A),照供试品溶液的制备的方法制备供试品溶液,在上述色谱条件下进样测定,记录色谱图及峰面积积分值,计算回收率,结果见附表。

2.3.8 含量测定:按拟定的色谱条件及供试品溶液的制备方法对本品进行了测定,结果批号为090301、090302、090303样品中含羟基红花黄色素 A分别为每粒 0.47、 0.36、0.38mg(n=3)。