高效液相色谱法测定小儿清化丸中的绿原酸和芍药苷的含量*

2011-06-21薛士荣李玉仿孙燕燕

天津药学 2011年5期

薛士荣，李玉仿，孙燕燕

(1.天津市大港区药品检验所，天津 300270； 2.天津市儿童医院，天津 300070)

小儿清降丸是天津市儿童医院传统成方制剂，是由生地黄、青黛、金银花、薄荷、赤芍等14味中药组成的传统蜜丸，具有清热解毒、养阴利咽的功效，用于急性咽炎，喉炎，急性扁桃体炎，内热外感发烧，伴有大便秘结者。绿原酸和芍药苷分别为该制剂中主要药物金银花和赤芍的有效成分，本实验采用高效液相色谱法测定绿原酸和芍药苷的含量，为该制剂的质量控制提供了可行的方法。

1 仪器和试药

岛津高效液相色谱仪 LC-2010C，岛津高效液相色谱仪工作站LC-Solution(日本岛津公司)。对照品均来自中国药品生物制品检定所，绿原酸批号为110753-200413，芍药苷批号为110736-200934(含量95.7%)。甲醇、磷酸均为色谱纯，水为纯化水。小儿清降丸(天津市儿童医院，批号为20101102、20110301、20110302)。

2 方法与结果

2.1色谱条件色谱柱：Diamond C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)；柱温：35 ℃；流动相：乙腈-0.4%磷酸液(15∶85)；流速：1.0 ml/min；检测波长：绿原酸327 nm，芍药苷230 nm；进样量：绿原酸10 μl,芍药苷20 μl。

2.2绿原酸含量测定

2.2.1溶液制备

2.2.1.1对照品溶液的制备取绿原酸对照品置五氧化二磷减压干燥器中干燥12 h后，精密称取4.95 mg置250 ml量瓶中，加50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每1 ml含0.019 8 mg/ml绿原酸对照品溶液。

2.2.1.2供试品溶液的制备取“重量差异”项下的本品，剪碎，混匀，取约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50 ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率40 kHz)30 min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液即得。

2.2.1.3阴性对照溶液的制备按处方比例及制法，制备不含金银花的阴性样品，取相当于供试品的量，按照供试品溶液制备项下的方法制备阴性样品溶液。分别吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液，按上述色谱条件测定，结果阴性样品溶液在绿原酸峰的位置上没有干扰，见图1。

2.2.2线性关系考查分别精密吸取含有0.019 8 mg/ ml绿原酸对照品溶液2、5、10、15、20、25和30 μl，按“2.1”项下的色谱条件，注入高效液相色谱仪，记录峰面积。以进样量(μg)为横坐标，峰面积为纵坐标，求得绿原酸回归方程为：Y=3 286 358.7X-317.9(r=0.999 9)。结果表明：绿原酸在0.039 6～0.594 0 μg范围内线性关系良好。

1.绿原酸

2.2.3精密度试验取“2.2.1.1”项下对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件分析，连续进样6次，测得峰面积值的RSD为0.05%。

2.2.4重复性试验取同一批样品(批号20101102)6份，按“2.2.1.2”项下配制，采用“2.1”项下色谱条件测定绿原酸的含量，结果测得绿原酸的平均含量为1.647 7 mg/g ,RSD为0.96%。

2.2.5稳定性试验取样品(批号20101102)，按“2.2.1.2”项下配制，每隔4 h进样1次，共5次，结果样品在16 h内无明显变化，RSD中0.10%。

2.2.6回收率试验精密称取已知含量同一批样品(批号20101102)约0.25 g，共6份，分别精密加入含有0.007 92 mg/ml绿原酸对照品溶液50 ml，按“2.2.1.2”项下配制，按“2.1”项下色谱条件测定绿原酸的含量，绿原酸的平均回收率为99.50% ，RSD为0.68%。结果见表1。

2.2.7样品测定取小儿清降丸3批，按“2.2.1.2”项下供试品溶液制备方法制成供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定绿原酸的含量，测定结果见表2。

2.3芍药苷含量测定

2.3.1溶液制备

表1 绿原酸加样回收试验结果

表2 绿原酸含量测定结果

2.3.1.1对照品溶液的制备精密称取芍药苷对照品4.30 mg，置50 ml量瓶中，加稀乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每1 ml含0.082 3 mg芍药苷对照品溶液。

2.3.1.2供试品溶液的制备取“重量差异”项下的本品，剪碎，混匀，取约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25 ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率40 kHz)30 min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液即得。

2.3.1．3阴性对照溶液的制备按处方比例及制法，制备不含赤芍与丹皮酚的阴性样品，取相当于供试品的量，按照供试品溶液制备项下的方法制备阴性样品溶液。

分别吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液，按上述色谱条件测定，结果阴性样品溶液在芍药苷峰的位置上没有干扰，见图2。

2.3.2线性关系考查分别精密吸取含有0.082 3 mg/ml芍药苷对照品溶液2、5、10、15、20和30 μl，按“2.1”项下的色谱条件，注入高效液相色谱仪，记录峰面积。以进样量(μg)为横坐标，峰面积为纵坐标，求得芍药苷回归方程为：Y=659 305.6X-4 815.5(r=0.999 9)。结果表明：芍药苷在0.164 6～2.469 0 μg范围内线性关系良好。

2.3.3精密度试验取“2.3.1.1”项下的溶液，按“2.1”项下色谱条件分析，连续进样6次，测得峰面积RSD为1.09%。

2.3.4重复性试验取同一批样品(批号20101102)6份，按“2.3.1.2”项下方法配制，采用“2.1”项下色谱条件测定芍药苷的含量，结果测得芍药苷的平均含量为1.906 8 mg/g，RSD为1.13%。

1. 芍药苷

2.3.5稳定性试验取样品(批号20101102)，按“2.3.1.2”项下配制，每隔4 h进样一次，共5次，结果样品在16 h内无明显变化，结果RSD为1.11%。

2.3.6回收率试验精密称取已知含量同一批样品(批号20101102)约0.5 g，共6份，分别精密加入含有0.041 34 mg/ml芍药苷对照品溶液25 ml，按“2.3.1.2”项下配制，按“2.1”项下色谱条件测定芍药苷的含量，芍药苷的平均回收率为99.32%，RSD为0.72%。结果见表3。