HPLC法测定蒙药敖乐木斯－5中羟基红花黄色素A的含量

姚 冰

内蒙古呼伦贝尔市药品检验所，内蒙古 呼伦贝尔 021008

敖乐木斯－5由熊胆粉、人工牛黄、红花、黄连、木香等五味药组成的丸剂。其中红花具通经散瘀，消肿止痛的功能。选择红花的主要成分羟基红花黄色素A作为该药品的含量控制指标是可行的。本实验采用高效液相色谱法，参照《中国药典》2005年版一部中“红花”项下的含量测定方法，对处方中红花所含的羟基红花黄色素A进行测定。通过试验分析，结果表明该方法重现性好，专属性强，方中其它组分对羟基红花黄色素A的测定无干扰，本方法可作为该药品的质控方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器 岛津LC－2010A HT高效液相色谱仪 SCL－10ATvp型控制器，SPD－10Avp型检测器，LCsolution色谱工作站。UA－1700型紫外－可见分光光度计。Sartorius Bp121S(0.1mg)Bp211D(0.01mg)电子天平。

1.2 试剂与试药 羟基红花黄色素A对照品 (批号:111637－200503，供含量测定用):由中国药品生物制品检定所提供;样品:敖乐木斯－5由呼伦贝尔市新巴尔虎左旗蒙医院提供。甲醇为色谱纯，乙腈为色谱纯，水为高纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 十八烷基建和硅胶为填充剂;流动相:甲醇－乙腈－0.7%磷酸 (26:2:72) (用三乙胺调pH至6.0±0.1);柱温:30℃;检测波长:403nm;进样量:10μl。

2.2 提取条件的选择 参照中国药典2005版一部“红花”项下对羟基红花黄色素A的提取方法，以25%甲醇作为提取溶剂进行超声提取，为保证被测成分的完全提取，实验中考察了超声20分钟、30分钟、40分钟、50分钟不同提取时间对提取效率的影响，含量测定结果见表1。

表1 羟基红花黄色素A提取效率考察结果

从表中数据可见，超声40分钟后供试品中羟基红花黄色素A的含量基本稳定不变，故将提取时间定为超声40分钟。

2.3 试验溶液的制备

对照品溶液的制备 取羟基红花黄色素A对照品适量，精密称定，加25%甲醇制成每 1ml含67.2μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备 取本品约0.8g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入25%甲醇50ml，称定重量，超声40分钟，放冷，再称定重量，用25%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

阴性对照品溶液的制备 精密称取按处方比例并以相同工艺制备的缺红花的样品0.8g按供试品溶液制备法制得阴性对照溶液。在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液、阴性对照溶液、供试品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，测得结果为:阴性对照色谱图中在与羟基红花黄色素A对照品以及供试品色谱图相应的保留时间处无色谱峰出现，表明其他组分对羟基红花黄色素A的测定无干扰。

羟基红花黄色素A、阴性对照溶液、供试品溶液色谱图见图1

图1 检测结果色谱图

2.4 线性关系试验 取羟基红花黄色素A对照品 (批号110715－200413)约8.4mg，精密称定，置25ml量瓶中，加25%甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀 (0.0336mg/ml)，精密吸取 1、2、3、4、5、6ml，分别置10ml量瓶中，加25%甲醇稀释至刻度，摇匀，各取10μl进样，按上述色谱条件测定，以峰面积对对照品进入的量进行回归分析，结果羟基红花黄色素A在0.0336μg～0.2016μg范围内呈良好的线性关系。回归方程为y=836940x+8785.9，r=0.9999。标准曲线数值见表2。

表2 标准曲线测定结果

2.5 稳定性试验

取样品含量测定项下制备的供试品溶液1份，分别于0h、2h、4h、6h、8h、12h进样测定峰面积值，结果见表3。

从表中数据可以看出，羟基红花黄色素A在12小时内的峰面积基本稳定。

2.6 精密度试验 取同一批号 (20090802)供试品6份，各约0.8g，精密称定，分别按样品含量测定项下方法操作，测定每份供试品的含量，结果平均值为2.844mg/g，RSD%为0.16%。结果见表4。

表3 不同时间测定样品中羟基红花黄色素A的峰面积积分值

表4 精密度试验结果

2.7 加样回收试验

取已知羟基红花黄色素A含量 (含量为2.844mg/g)供试品6份，每份约0.4g，精密称定，分别置6个具塞锥形瓶中，精密加入用25%甲醇配制的羟基红花黄色素A对照品溶液 (羟基红花黄色素A浓度1.122mg/ml)1ml，再精密加入49ml25%甲醇制成供试品溶液，按样品含量测定项下的方法操作，测定每份的含量，计算回收率，结果平均回收率为98.20%，RSD%为0.59%结果见表5。

表5 加样回收试验结果

2.8 样品的含量测定 取本品3个批号共6份，各约0.8g，按供试品溶液的制备方法处理，分别精密吸取供试品溶液与对照溶液各10μl注入液相色谱仪，按外标法计算含量。三批样品的测定结果见表7。

表7 样品中羟基红花黄色素A的含量测定结果

3 讨论

3.1 检测波长的选择 精密称取羟基红花黄色素A对照品适量，用25%的甲醇制成每1ml含15μg的溶液，于紫外－可见分光光度仪上，在190nm～600nm波长范围扫描，结果羟基红花黄色素A在波长403nm、223nm处有最大吸收。参照中国药典2005版一部“红花”含量测定项下羟基红花黄色素A的测定方法，选择403nm作为检测波长。

3.2 本实验精密度及回收率试验结果表明，该方法具有较好的准确度和重现性，可作为该制剂的含量测定方法。

［1］国家药典委员会编.中华人民共和国药典［S］.北京;化学工业出版社，2005.