肠杆菌科细菌生化鉴定系统的研制及评价分析

王丽娟

（湖南省邵阳市中西医结合医院 湖南邵阳 422000）

肠杆菌科细菌包括一大群生物性状相似的革兰阴性无芽胞杆菌,其中部分为致病菌,如:沙门菌属、志贺菌属等。肠杆菌科的分类主要根据生化反应和抗原构造,按照Bergery分类法,分为5个族、12个属。临床上常采用抗生素浓度梯度法(E-test法)结合K-B法药敏试验,根据美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)文件标准进行抗生素敏感性判断[1]。我院以伯杰细菌鉴定手册[2]为参考,以肠杆菌科细菌生化反应阳性概率为依据并结合编码技术[3],准确、快速、方便地鉴定肠杆菌科细菌,下面就此系统分析报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

菌种以临床标本中分离的肠杆菌科细菌120株,以聚苯乙烯塑料板孔容量0.4mL)、胰蛋白胨、蛋白月示、酵母粉为材料及原料。

1.2 方法

1.2.1 生化反应项目组合 大部分由生物碱、苷和糖组成,为苯丙氨酸(PD)、V—P、吲哚(IND)、精氨酸(ADH)、赖氨酸(IDC)、鸟氨酸(ODC)、尿素(uRE)、丙二酸盐(MAI)、七叶苷(ESC)、甘露醇(MAN)、山梨醇(SOR)、肌醇(IN0)、侧金盏花醇(AD0)、鼠李糖(RHA)、蔗糖(SAC)等20项组成。

1.2.2 生化基质配方 结合经典配方及原料来源、反应速度、稳定性、颜色对比度等因素,采用正交试验的矩阵方法研制,部分生化基质配方如下:V－P:酵母粉1g、丙酮酸钠0.5g、葡萄糖10g、肌酸0.5g、氯化锰25mg、pH6.0、PD酵母粉0.5g,I－苯丙氨酸1g,pH8.4。

1.2.3 制备鉴定条 上述20种生化基质配制后进行115℃15min灭菌,分别加入聚苯乙烯板中,葡萄糖和硝酸盐为复合配方合用一孔,置于50℃干燥箱中脱水制干,封口4℃贮存。

1.3 性能检测

采用双盲法,用本系统和API同时鉴定120株临床菌株,以检测本系统鉴定结果的准确性。用已知典型生化反应的肠杆菌、肺炎克雷伯菌、宋内志贺菌,每株重复鉴定30次,验证其重复性及标本间差异。

1.4 统计学方法

采用卡方进行检验,且以P<0.05为有统计学意义。

2 结果(表1）

由表1得出:本系统与API两种方法鉴定至属水平的符合率为95%,经检验两者间无显著性差异(P>0.05)（表2）。

表1 2种方法鉴定120株临床菌株结果

表2 11株标准菌株在不同时间检测结果的符合率

由表2得出:将11株标准菌株接种于本系统,8～24h的观察结果符合率为92.4%～98.6%。

3 讨论

肠杆菌科细菌为革兰阴性杆菌,两端钝圆,无芽胞。为需氧和兼性厌氧菌,营养要求不高,在普通培养基上生长良好。不同菌属的生化反应甚不一致,可作为肠杆菌科细菌鉴定的依据之一。

细菌鉴定的准确是临床治疗的依据。以往的方法多操作复杂、时间长。我院自制的本生化鉴定系统,充分考虑到材料来源、鉴定价值、基质稳定性这几项因素,并结合反应速度、稳定性、颜色对比度等内容。本组数据中,11株标准菌株接种于本系统,8～24h的观察结果符合率为92.4%～98.6%。本系统鉴定至属水平符合率为95%。

实践得出,该方法操作简便、反应速度快、容易判定。本技术关键在于鉴定条制备,将生化基质置聚苯乙烯条中低温脱水制干,使用时只需加入菌液,操作方便。为了生化反应的稳定性,在精氨酸、赖氨酸、尿液基质配方中加入了少量葡萄糖防止其它原因使基质分解而产生假阳性。

综上,新研制系统鉴定肠杆菌科细菌快速、简单,能很好的为临床提供准确实验依据。

[1]National Committee for Clinical Laboratory Standards.Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testin[S].Wayne PA:National Committee for Clinical Laboratory Standards,2001,M100～S11.

[2]赵贵明,陈彦长,李瑾.肠杆菌科细菌微量快速生化鉴定系统的研制[J].中国卫生检验杂志,2004,14(2):142～144.

[3]王礼文,张莉,张立.革兰阴性细菌编码系统(GN-27)对肠杆菌科细菌的鉴定评价[J].中国卫生检验杂志,2005,15(6):679～681.