瘦素基因nt+19A→G多态性与阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征的关系

高春艳，刘运秋，刘晓宇，李宏芬

(河北联合大学附属开滦医院，河北唐山063000)

临床及流行病学资料证实，肥胖是导致阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)的重要危险因子，遗传因素在肥胖发生中起重要作用;OSAHS存在明显的家族聚集现象及种族差异［1］，提示遗传因素参与OSAHS发病。人类瘦素基因位于染色体7q31．3，近年研究发现该基因区域与人类极度肥胖相关［2］。目前，有关瘦素基因与OSAHS的相关研究较少，我们对瘦素基因外显子5’非翻译区第19位核苷酸nt+19A→G的变异进行了研究，旨在探讨其基因多态性与中国北方成人OSAHS易感性之间的关系。

1 资料与方法

1．1 临床资料 选择2010年1月～2011年6月在我院住院的OSAHS患者180例(OSAHS组)，男141例、女39例，年龄(46．7 ±10．3)岁，BMI(26．18 ±3．22)kg/m2;均符合《阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征诊断及治疗专家共识(2007年草案)》中的诊断标准。另选同期查体健康者180例作为对照组，其性别、年龄、BMI与 OSAHS组有可比性。根据BMI分别将两组又分为体质量正常组(BMI＜25 kg/m2)及肥胖组(BMI≥25 kg/m2)。排除年龄＜18周岁，严重颌面畸形，患影响血氧饱和度的疾病，正在服用影响睡眠的药物，己接受针对OSAHS的治疗，多导睡眠仪监测睡眠时间少于6 h，合并高血压、心脑肾肝疾病、糖尿病及精神疾病者。两组均为我国北方汉族居民，无血缘关系。

1．2 方法 两组均于夜间在SRM-9601多导睡眠监测(PSG)系统下进行至少6 h的睡眠监测，并进行颈围、腰围、腹围、上气道检查等。

1．2．1 基因型检测 抽取晨起空腹肘静脉血5 ml，采用EDTA抗凝，低渗法分离白细胞，氯仿/异戊醇法提取DNA，PCR-RFLP法检测nt+19A→G基因型。DNA扩增总体系25 μl，上游引物:5'-CCCGCGAGGTGC ACACTG-3'，下 游 引 物:5'-A GGAGGAAGGAGCGCGCC-3'，引物链由上海生工生物公司提供。反应条件:94℃预变性5 min，94℃变性30 s，65℃退火30 s，进行30个循环，扩增产物221 bp。经2．5%琼脂糖电泳确认扩增结果后，在20 μl酶切反应体系中，加入 MspA1I内切酶0．5 μl(NEB 公司)，混匀后置37℃水浴中过夜，酶切产物置入2．5%琼脂糖凝胶(EB染色)电泳，与Marker对照，在紫外灯下观察结果。AA纯合子无酶切位点，为221 bp;GG纯合子为183、38 bp;GA 杂合子为 183、221、38 bp，因 38 bp 太小，在电泳过程中丢失。

1．2．1 统计学方法 采用SPSS13．0统计软件，计量资料用±s表示，组间比较用独立样本t检验或方差分析，计数资料比较用χ2检验;遗传平衡检验采用Hardy-Weinberg平衡定律。P≤0．05为差异有统计学意义。

2 结果

2．1 两组基线资料比较 见表1。

表1 两组基线资料比较(±s)

表1 两组基线资料比较(±s)

基线资料 OSAHS组(n=180) 对照组(n=180)P颈围(cm)41．57 ±2．36 39．42 ±2．53 ＜0．01腹围(cm) 93．01 ±9．58 89．34 ±8．99 ＜0．01腰臀比 0．930 ±0．051 0．902 ±0．046 ＜0．01体脂含量(%)26．00 ±4．03 25．12 ±3．56 ＜0．05

2．2 两组nt+19A→G基因型与基因频率比较见表 2、3。

表2 两组nt+19A→G位点不同基因型频率的比较［例(%)］

表3 两组nt+19A→G等位基因频率的比较［例(%)］

2．3 不同基因型OSAHS患者的临床指标比较OSAHS患者中，nt+19A→G各基因型个体比较，BMI、颈围、腹围、腰臀比均无统计学差异(P均＞0．05)

2．4 不同基因型OSAHS患者的各睡眠指标比较见表4。

3 讨论

OSAHS是具有潜在风险的临床综合征，许多研究显示，肥胖是其重要的危险因子，遗传参与肥胖及OSAHS的发病。Palmer［3］通过对 OSAHS及肥胖患者的基因组扫描认为，OSAHS及肥胖的易患性可能通过一些共同的基因起作用，而且参与影响AHI、BMI的染色体定位十分相近，提示肥胖与OSAHS可能通过共同的基因调控导致内分泌异常。瘦素基因是近年发现的与肥胖相关的最主要基因。Hager等［4］等研究认为，nt+19A→G基因变异与白种人肥胖者的血清瘦素水平相关。Rossana等［5］研究发现，在意大利严重肥胖患者的nt+19A→G基因中，A、G等位基因的分布频率在肥胖组与对照组间无统计学差异，其基因多态性与瘦素水平无关，与胆固醇、甘油三酯、BMI、脂肪含量等均无相关性，唯一有差异的是GG基因型肥胖女性的腰臀比明显小于AA或GA基因型者;该学者认为，虽然Hager发现G等位基因携带者的瘦素较低，但其未考虑腰臀比的影响，故不能排除其结果因脂肪分布不同所致。张蓉等［6］认为，瘦素基因nt+19A→G变异可影响中国人2型糖尿病的局部体脂(主要是腹部皮下脂肪)分布。

表4 不同基因型OSAHS患者的各睡眠指标比较(±s)

表4 不同基因型OSAHS患者的各睡眠指标比较(±s)

注:PSO2:夜间平均氧饱和度;LSO2:最低氧饱和度;AHI:呼吸暂停低通气指数;(AT+HT)/TST:(总呼吸暂停时间+总低通气时间)/总睡眠时间;MAT:最长呼吸暂停时间;△心率:夜间最高心率－夜间最低心率;HR:夜间平均心率。不同基因型OSAHS患者的各睡眠指标比较，P均 ＞0．05

基因型频率 n PSO2(%) LSO2(%)(AT+HT)/TST(%)MAT(s) AHI(次/h) △心率(次/min)HR(次/min)GG 80 85．74 ±6．38 69．00 ±15．71 26．52 ±20．47 60．09 ±20．86 35．54 ±21．83 58．59 ±12．89 70．18 ±10．36 GA 67 84．90 ±7．98 65．40 ±17．55 24．49 ±20．87 59．46 ±19．66 36．76 ±26．06 56．03 ±15．46 69．27 ± 9．91 AA 33 86．30 ±4．04 68．88 ±14．79 21．31 ±20．17 60．19 ±20．49 29．86 ±20．71 56．70 ±12．80 69．69 ±10．11

瘦素基因nt+19A→G变异存在三种基因型，本研究显示，OSAHS组 GG型占45．0%，GA型占36．7%，AA型占18．3%，其 G、A 的等位基因频率分别为63．3%、36．7%;对照组的 GG、GA、AA 基因型频率分别为37．8%、46．7%、15．5%，其 G、A 等位基因频率分别为61．1%、38．9%。两组基因型分布及等位基因频率分布均无统计学差异。OSAHS组中的GG、GA、AA基因型频率个体比较，其颈围、腹围、腰臀比、BMI等均无统计学差异，提示其变异对局部体脂分布无明显影响，结果与Rossana等［5］报道一致，但与张蓉等［6］结果不同，可能与相关疾病的选择、样本量大小等有关。三种基因型个体PSG各项指标比较均无明显统计学差异，考虑其单一基因变异在OSAHS发病中可能无重要作用，其原因可能为肥胖及OSAHS发生有多基因参与，且受生活方式、饮食习惯等因素影响;其发病有遗传异质性，不同个体发病有不同的基因参与，同一个体可能有多致病基因，单一基因可能仅以不同的风险率参与疾病的发生。由于瘦素基因结构复杂，存在多种变异，故对其与肥胖、OSAHS的关系有待于深入研究。

综上所述，本研究认为瘦素基因nt+19A→G单一基因变异在我国北方汉族居民OSAHS发生中可能无明显作用。

［1］Taheri S，Miqnot E．The genetics of sleep disorders［J］．Lancet Neurol，2002，1(4):242-250．

［2］Clement K，Garner C，Hager J，et al．Indication for linkage of the human OB gene region with extreme obesity［J］．Diabetes，1996，45(5):687-690．

［3］Palmer LJ．Genomic approaches to understanding obstructive sleep apnea［J］．RespirPhysiol Neurobiol，2003，135(2-3):187-205．

［4］Hager J，Clement K，Francke S，et al．A polymorphism in the 5’untranslated region of the human ob gene is associated with low leptin levels［J］．Int J Obes，1998，22(3):200-205．

［5］Rossana L，Emanuela P，Maria EB，et al．The A19G polymorphism in the 5＇untranslated region of the human obese gene does not affect leptin levels in severely obese patients［J］．J Clin Endocrinol Metab，2000，85(10):3589-3591．

［6］张蓉，郑以漫，项坤三，等．瘦素基因nt+19A→G变异与中国人2型糖尿病脂代谢、体脂含量及分布的关系［J］．中华内分泌代谢杂志，2000，16(1):6-9．