银柴颗粒中总皂苷含量的测定

吴楚棠 刘斌 索志荣

银柴颗粒是由柴胡、忍冬藤、枇杷叶、薄荷、芦根五味中药制备而成的中成药[1]。具有清热、解表、止咳的功效。主要用于风热感冒，发热咳嗽。其质量标准收载于《卫生部药品标准中药成方制剂》第十三册中[2]。现行的银柴颗粒质量标准体系只有对银柴颗粒中的有效成分薄荷的含量进行测定的规定，文献主要采用薄层层析、气相色谱等检测方法[3-6]，但是对银柴中的皂苷类成分的含量缺乏必要的控制，这为其应用的安全性和有效性带来了极大的不便。本文以银柴颗粒为研究对象，采用简便、快捷、准确的检测方法对其中柴胡总皂苷类成分的含量进行测定，为进一步完善的该制剂质量标准及其合理使用提供参考。

1 材料与方法

1.1 试药

柴胡皂苷a对照品：由中国药品生物制品检定所提供，纯度均大于99.5%；水为超纯水，对二甲氨基苯甲醛(Fisher)、甲醇、无水乙醇、浓氨水、磷酸均为分析纯。

1.2 仪器

UNIC7200型可见分光光度计(龙尼柯仪器有限公司)；UV-2102C 型紫外可见分光光度计(龙尼柯仪器有限公司)；FA1104电子天平(上海上天仪器有限公司，最小称量0.0001 g)；优普超纯水制造系统(上海优普实业有限公司)；KQ5200型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；HH-S4型数显恒温水浴锅(金坛市医疗仪器厂)；SENCO R-201旋转蒸发器(上海申顺生物科技有限公司)。

1.3 样品

三个不同厂家的银柴感冒颗粒购自医药超市，规格为每袋装12 g，厂家及批次分别为：太极重庆制药二厂(100326)、太极南充制药厂(091230)、四川彩虹制药厂(091221)。

1.4 溶液制备

1.4.1 供试品溶液 将银柴颗粒研细，取本品粉末1 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加入含5%浓氨试液的60 % (V/V)甲醇溶液10 ml，密塞，浸泡30分钟，30℃水温超声处理(功率200 W，频率40 kHz) 30分钟，滤过，用甲醇20 ml分2次洗涤容器及药渣，洗液与滤液合并，回收溶剂至干。残渣加甲醇溶解，转移至10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取其续滤液，即得[7]。

1.4.2 对照品溶液 准确称取对照品柴胡皂苷a 3.8 mg，置于10 ml容量瓶中，用甲醇溶液定溶，摇匀，得对照品溶液，作为储备液，其他不同浓度的对照品溶液由储备液经甲醇溶液稀释得到。

1.5 测定方法

以甲醇溶液5 ml作为空白溶液，供试品溶液与对照品溶液各精密吸取0.2 ml，分别加入0.1%对二甲氨基苯甲醛乙醇液0.1 ml，70℃温热10分钟，取出放冷，加入磷酸4.0 ml，70℃反应30分钟，放冷，在波长545 nm处分别测定供试品溶液与对品溶液的吸光度(A)，计算，即得[8]。

2 方法学考察与样品测定结果

2.1 标准曲线的制备

精密吸取对照品溶液适量，置10 ml具塞比色管中，加甲醇至1 ml，配制成浓度分别为：0.038、0.076、0.114、0.152、0.190、0.228、0.266、0.304、0.342、0.380 mg·ml-1的对照品溶液。分别精密移取 0.2 ml置10 ml具塞比色管中，精密加入0.1%对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液0.1 ml摇匀，于70℃反应10分钟，取出，放冷，加入磷酸4.0 ml，70℃反应30分钟，取出，放冷，于545 nm处测定吸收度。回归方程为: Y=0.4458 C+0.0068,r=0.9997。其中Y为吸光度，C为柴胡皂苷a对照品的浓度(mg·ml-1)。表明柴胡皂苷在0.038～0.380 mg·ml-1范围内呈良好的线性关系。

2.2 精密度考察

取供试品溶液(批号：100326)，连续进样6次，进行测定，结果吸光值的RSD=2.4%,表明仪器精密度符合要求。

2.3 重现性试验

准确称量同一批号的样品6份(批号：100326)，按“1.4”项的操作制备供试品溶液，进行测定，总皂苷含量的RSD为3.0%，表明该方法的重现性较好。

2.4 稳定性试验

取适量供试品溶液(批号：100326)在室温下放置，按上述条件每隔2小时测定1次，在8小时内共测定5次，记录柴胡总皂苷的吸光值，计算相对标准偏差RSD=2.9%，表明样品在8小时内稳定。

2.5 加样回收率试验

精确称取已测得含量的银柴颗粒样品(批号：100326)粉末约0.5 g，共6份，每份分别准确加入柴胡皂苷a对照品储备液30 μl，按“2.1”项方法制备所需溶液后，按上述测定方法测得其中柴胡皂苷a的含量,并计算平均加样回收率为97.63%, RSD为1.8% (n=6)。

2.6 样品的测定

分别取不同厂家的银柴颗粒各1 g，按“1.4”项下操作制备供试品溶液，按上述测定方法进行测定，记录A，计算含量，结果见表1。

表1 样品含量测定结果(mg·g-1)

3 讨论

根据文献报道和实际测定，在柴胡中柴胡皂苷a的含量最大，且较为稳定，柴胡皂苷b含量少且稳定性差，所以采用柴胡皂苷a作为对照品。

取适量对照品和供试品溶液，分别按“1.5”项显色处理并在340～600 nm波长之间扫描，结果，对照品和供试品溶液均在545 nm有最大吸收，故可选用545 nm为测定波长。同时，采用阴性对照测定，结果显示，提取剂对测定结果无任何影响，可直接用甲醇作为空白对照。

精密称取供试品10份，分别用20%、40%、60%、80%、100%的甲醇溶液和含5%浓氨试液的以上5个浓度甲醇溶液，超声提取30分钟。分别按“1.5”项显色方法测定其吸光度，计算总皂苷的含量。结果显示，含5%浓氨试液的60%甲醇浓度超声提取效果最好。查找文献可知，溶液加氨水后呈碱性，减少了皂苷的转化和损失。故选用60%浓度的氨水甲醇溶液进行提取。

文献检索显示，关于银柴颗粒中柴胡总皂苷含量测定的方法尚未报道。本文以银柴颗粒为研究对象，对其中总柴胡皂苷类成分的含量测定方法进行研究，建立一种检测银柴颗粒中总皂苷含量的方法，该法简单、快捷，重现性好，为进一步完善该制剂质量标准及其合理使用提供参考。

[1] 徐国均,何宏贤,徐珞珊,等.中国药材学[M].北京:中国医药科技出版社, 1996: 1535-1538.

[2] 国家药典委员会. 中华人民共和国卫生部药品标准(中药成方制剂第十三册) [S].北京：人民卫生出版社, 1993: 187.

[3] 董林,李毅，邓晓鸿.银柴颗粒质量标准研究[J].中成药,2004,26(1):29-32.

[4] 周思敏. 银柴颗粒中薄荷脑鉴别方法的改进[J].中国药品标准，2006,7(3):15-16.

[5] 黄士芙,王益平.关于银柴颗粒质量标准的商榷[J].中成药,1999,21(8):438.

[6] 孔卫东,罗敏. 气相色谱法测定银柴颗粒中薄荷脑的含量[J].中成药,2007,29(11):1711-1712.

[7] 陈发奎,王玉珍,王维彬,等.常用中草药有效成分含量测定[M].北京:人民卫生出版社,1997.

[8] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(—部)[S].北京：中国医药科技出版社, 2005: 338.