明目十六味丸中阿魏酸含量测定的方法学考察
2011-06-09张小谦刘冀华
张小谦 刘冀华
（1 内蒙古包头医学院第二附属医院药剂科，内蒙古 包头 014000；2 内蒙古呼和浩特市卫生学校，内蒙古 呼和浩特 010000）
1 仪器与试药
1.1 仪器
Spectra SYSTEM P1000 HPLC泵；Spectra SYSTEM UV 1000 型检测器；CHROMITEK 色谱工作站；C3860A型超声处理器；PhenomenC18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）。
试剂与试药：甲醇为色谱纯，冰醋酸为分析纯，水为高纯水。阿魏酸对照品（批号：0773-9708，供含量测定用）：中国药品生物制品检定所。其他试剂为分析纯。
明目十六味丸批号：20090110 ；20101210；20101212；20101214
2 方法学考察[1,2]
2.1 色谱条件
ODS柱（250mm×4.6mm，10μm），流动相为甲醇－0.7%冰醋酸水（30∶70），流速为1.0mL/min，柱温为30℃，检测波长为320nm，进样量为20μL。灵敏度为1.0AUFS。
2.2 溶液的制备
①对照品溶液的制备：精密称取阿魏酸对照品1mg，置5mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取50μL，置2mL量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，即得（每1mL中含阿魏酸5μg）。②供试品溶液的制备：取本品，研细，取约3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇25mL，称重，超声30min，称重，用乙醇补足减失的重量，滤过，取滤液1mL置2mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，滤过，即得。
2.3 线性关系考察：
精密称取阿魏酸对照品2.41mg，置10mL量瓶中，加甲醇溶解，并用甲醇稀释至刻度，摇匀。精密吸取1mL至10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为标准溶液。用标准溶液制备阿魏酸系列浓度：1.5、3.0、6.0、12.1、24.1μg/mL。分别精密吸取20μL，注入液相色谱仪，以峰面积对进样量（μg）进行回归分析，试验结果表明，阿魏酸在30～482ng范围内呈良好的线性关系。回归方程为 Y=—156359.2+330887.1X ，r=0.9992，标准曲线见图1。
图1 阿魏酸测定的标准曲线
2.4 精密度试验
取同一供试品溶液（批号20090110），连续进样5次，测定阿魏酸峰面积积分值。测定结果见表1。
2.5 稳定性试验
表1 精密度试验结果
取同一供试品溶液（批号20090110），避光放置，分别于0h、4h、8h、12h进样测定，在12h内的积分值基本稳定。结果见表2。
表2 稳定性试验结果
2.6 重现性试验
取同一批号（20090110）明目十六味丸供试品5份，每份取样量约3g，精密称定，分别按【含量测定】项下方法操作并测定每份的含量，结果见表3。
表3 重现性试验结果
2.7 加样回收试验
取已知阿魏酸含量的明目十六味丸（批号为20090110）6份，每份约1.5g，精密称定，分别精密加入阿魏酸对照品溶液（32μg/mL）4、5、6mL，按质量标准【含量测定】项下方法操作并测定每份的含量，计算回收率，结果平均回收率为 98.93 %，RSD为 1.08%，结果见表4。
表4 加样回收试验结果
2.8 样品含量测定
取本品按质量标准【含量测定】项下的方法操作并测定，样品的测定结果见表5。
2.9 超声萃取时间的选择
称取同一供试品（批号20090110）6份，每份取样量约3g，精密称定，超声萃取不同的时间，分别按【含量测定】项下方法操作并测定每份的含量，结果见表6。
结果表明，超声30min时提取效果最好。低于30min时，成分没有完全提取出来，高于30min时，可能由于超声时间过长造成了阿魏酸的破坏，使测得含量降低。
2.10 阴性对照试验
取按处方量并以相同工艺制备的阴性对照品（缺当归），按质量标准【含量测定】项下方法操作，进样量20μL。测得结果为：阴性对照品色谱图中在与阿魏酸对照品色谱图相对应的保留时间处无色谱峰出现，表明其他组分对阿魏酸的测定无干扰。
表5 样品中阿魏酸的含量测定结果
表6 超声萃取时间的选择
2.11 药材提取率的测定
取生产使用的当归药材测定阿魏酸的含量，测定结果如下：阿魏酸mg/g当归=1.67mg/g
本品（批号为20090110）中阿魏酸的测定结果为0.107mg/g
说明：实际测定本品含当归药材以阿魏酸计每g为0.105mg到0.109mg；考虑药材来源不同，按90%转移率计算，本品含阿魏酸为0.0945mg/g到0.0981mg/g，因此，本品含阿魏酸的限度暂定为：0.09mg/g。
[1] 欧明,林励.简明中药成分手册[M].北京:中国医药科技出版社,2003:251-338.
[2] 国家药典委员会.中国药典.2005版一部[S].北京:化学工业出版社,2005:598.
