源于健康人与乳腺癌患者CIK细胞的生物学特性及抗癌活性的研究

刘素杰 赵大伟 张 卓

（吉林省肿瘤医院，吉林 长春 130012）

CIK是将人外周血单个核细胞在体外多种细胞因子（如抗CD3McAb、IL-1a、IL-2、IFN-γ）刺激后获得的一群异质细胞[1]。乳腺癌是女性常见恶性肿瘤，发病率有逐年上升的趋势，乳腺癌的生物治疗是继手术、放化疗之外的又一项治疗手段。本实验通过对比研究健康人与乳腺癌患者两种不同来源的CIK增殖能力及活性，进一步探讨CIK细胞的抗肿瘤作用，为临床应用提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 研究对象

健康人外周血样本10例，年龄27～56岁，样本来自吉林省肿瘤医院体检中心。乳腺癌患者外周血样本10例，年龄39～58岁，样本来自吉林省肿瘤医院乳腺二科，全部病例均经病理证实。

1.2 主要试剂

CD3单克隆抗体（北京邦定公司）；IL-1a、IL-2、IFN-γ（Strthmann Biotech GmbH，Germany），MTT（美国Sigma公司）。

1.3 方法

1.3.1 CIK细胞制备及扩增

两种不同来源地外周末梢血血样，利用Isopaque离心法密度梯度分离外周血单个核细胞（PBMC），加入RPMI1640培养液，10%胎牛血清培养，加入100μg/mL，重组IFN-γ孵育24h后，再加入50μg/mLCD3McAb，100u/mL人重组IL-1a，300u/mLIL-2放置于37℃，5%CO2孵箱中培养，细胞每隔2d传代培养。

1.3.2 CIK细胞的增殖测定

动态观察细胞增殖，用血细胞计数板法计数细胞。

1.3.3 MTT法检测CIK细胞对肿瘤细胞株杀伤活性

培养14d的CIK细胞为效应细胞，分别与乳腺癌细胞株（MCF-7）、肝癌细胞株（SMMC-7721）、肺癌细胞株（SPC-A-1）3种靶细胞混合，按50∶1效靶比加入96孔板，每组3复孔。另设单独靶细胞和效应细胞组，置于37℃，5%CO2孵箱中培养48h，离心弃上清，每孔加二甲基亚砜150μL，振荡溶解10min后，用酶标仪570nm测OD值，计算CIK的杀瘤活性。杀伤活性（%）=[1-（实验组OD值-效应细胞OD值）/靶细胞OD值]×100%。

1.4 统计学处理

采用SPSS11.5统计软件包进行统计分析，健康人与乳腺癌患者CIK细胞对3种肿瘤细胞株的抑瘤比较，采用成组比较t检验。

2 结 果

2.1 CIK细胞在培养第3天开始出现增殖，至第21天增殖100余倍；乳腺癌患者来源的CIK细胞的增殖速度慢于健康人CIK细胞（P＜0.05），结果见表1。

表1 健康人与乳腺癌患者CIK细胞体外增殖力对比[（±s），n=10]

表1 健康人与乳腺癌患者CIK细胞体外增殖力对比[（±s），n=10]

注：*与健康人相比P＜0.05

组别 CIK细胞增殖能力1d 7d 14d 21d健康人 1.05±0.04 31.25±2.74 89.90±4.83 176.82±14.62乳腺癌患者 1.03±0.07 19.33±1.42* 55.09±7.85* 107.68±15.36*

2.2 健康人与乳腺癌患者CIK细胞对3种肿瘤细胞株的抑瘤比较

乳腺癌患者CIK细胞对3种肿瘤细胞杀伤活性明显低于健康人CIK细胞（P＜0.05），结果见表2。

表2 健康人与乳腺癌患者CIK细胞对肿瘤细胞杀伤活性（%）

3 讨 论

随着分子生物学、细胞生物学和免疫学等研究的进展，乳腺癌的治疗已经由传统的手术、放化疗治疗模式向包括内分泌治疗、生物免疫治疗和基因治疗在内的综合治疗模式转变[2]。CIK细胞生物治疗的手段之一。CIK细胞是由血液或骨髓单个核细胞在体外与多种细胞因子共同培养获得，由于多种细胞因子之间的协同作用，使其具备杀伤活性对多种肿瘤细胞均有抑制生长作用[3-5]。本研究将健康人和乳腺癌患者的PBMC在同等条件下诱导CIK细胞。研究发现，健康人来源的CIK细胞其增殖率及杀伤活性均高于乳腺癌患者来源的CIK细胞。健康人来源CIK细胞对3种肿瘤细胞株均有不同程度杀伤。这种差异可能是肿瘤微环境对肿瘤患者免疫效应细胞功能影响所致，肿瘤微环境常呈现酸性，可强烈抑制免疫效应细胞的增生作用，细胞毒作用和代谢活性[6,7]。在临床应用中可以根据CIK细胞来源的不同及患者具体情况，选择不同来源地CIK细胞进行治疗。

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