NDRG1 蛋白在口腔鳞癌中的表达及意义*

何欣蓉，王 琼，朱治键

(川北医学院病理教研室，四川 南充 637000)

口腔鳞癌(oral squamous cell carcinoma，OSCC)是头颈部最常见的恶性肿瘤之一，近年来发病率呈上升趋势，已证实其发生发展与多个基因的异常表达有关。分化相关基因NDRG1(N-myc downstream regulated gene-1，N-myc 下游调节基因-1)是1992 年Stantont 等［1］和Charron 等［2］在N-myc 敲除的小鼠胚胎组织中发现的，因受N-myc 的抑制而得名。NDRG1 定位于人染色体8q24.3，长约60kb，其mRNA 长3kb，编码一个相对分子量为43 kDa 的蛋白质。NDGR1 mRNA 在人体组织中广泛存在，包括消化系统、免疫系统、生殖系统和泌尿系统，但不同系统之间的转录水平有很大差异。NDRG1 蛋白大都在上皮组织表达［3］。NDRG1 在肿瘤组织中的作用有很大争议。在有些肿瘤中表现为促进作用［4，5］，而有些肿瘤中又表现为抑制作用［6］。NDRG1 在口腔鳞癌中的表达情况未见报道，因此，我们通过免疫组化方法研究NDRG1蛋白在口腔鳞癌中的表达，初步探讨NDRG1 与口腔鳞癌发生发展的关系。

1 材料与方法

1.1 材 料

选择2007 年1 月－2010 年12 月期间川北医学院附属医院病理科口腔鳞癌患者手术切除标本65例，所有病例术前均未经放疗、化疗。其中男性39例、女性26 例，男女比例为1.5 ∶1，年龄区间为(43 －70)岁，平均52 岁，＜60 岁28 例，≥60 岁37例，所有病例均证实为鳞状细胞癌，其中高分化30例，中分化26 例，低分化9 例。根据国际TNM 分期，Ⅰ－Ⅱ期42 例、Ⅲ－Ⅳ期23 例。有淋巴结转移22 例，无淋巴结转移43 例。收集20 例正常口腔黏膜组织作为对照。

1.2 方 法

1.2.1 试剂:羊抗人多克隆NDRG1 抗体(N-19:sc-19464)，规格1.0ml，工作浓度1 ∶100，购于美国SANTA CRUZ 公司。SP 免疫组化染色试剂盒，二氨基联苯胺四盐酸(Diaminobenzidine，DAB)均购于福州迈新生物技术开发公司。

1.2.2 免疫组化染色方法:将原病理常规石蜡包埋的蜡块作4μm 切片，每例作连续切片2 张，分别作HE 染色、NDRG1 免疫组织化学SP 法染色。各组织切片常规脱蜡及水化后，依次按说明书完成免疫组化染色各步骤。所有切片均在同一实验室，由同一技术人员使用同一批号试剂完成免疫组织化学染色。用已知阳性对照片作阳性对照，用PBS 代替一抗作阴性对照。

1.2.3 结果判定:NDRG1 在胞膜或胞质中表达，每张切片检测20 个高倍视野，按切片中显色细胞的比例判定，免疫组化染色阳性细胞数＞10%，即记为阳性，否则为阴性。

1.2.4 统计学处理:应用SPSS11.5 软件进行统计学分析，采用χ2检验分析口腔鳞癌组织与正常口腔黏膜组织中NDRG1 的表达，及口腔鳞癌组织中NDRG1 蛋白表达与临床病理特征之间的关系，以p ＜0.05具有统计学意义。

2 结 果

2.1 NDRG1 在口腔鳞癌组织与正常口腔黏膜组织中的表达

免疫组化SP 法显示NDRG1 蛋白的阳性信号主要表达在细胞浆内，部分在细胞膜上，为黄-棕褐色颗粒。20 例正常口腔黏膜组织中只有5 例NDRG1 蛋白阳性表达(图1)，阳性表达率为25%(5/20)，65 例口腔鳞癌组织中48 例NDRG1 蛋白表达阳性(图2)，阳性表达率为72.3% (48/65)，NDRG1 蛋白在口腔鳞癌组织中的表达与正常口腔黏膜组织中的表达差异具有显著统计学意义(p ＜0.01)。

2.2 NDRG1 表达与口腔鳞癌临床病理特征的关系

从表1 中可以看出，NDRG1 蛋白的表达与口腔鳞癌发生部位、性别、年龄均无相关性(p ＞0.05);而与口腔鳞癌分化程度、浸润深度、分期及淋巴结转移情况均具相关性(p ＜0.05)，NDRG1 蛋白在分化低、浸润深、分期高及有淋巴结转移的口腔鳞癌中表达高。

表1 NDRG1 的表达与口腔鳞癌患者临床病理特征的关系

3 讨 论

NDRG1 定位于人染色体8q24.3，长约60kb，其mRNA 长3kb，编码一个相对分子量为43 kDa 的蛋白质。NDGR1 mRNA 在人体组织中广泛存在。NDRG1 蛋白大都在上皮组织表达。现有文献已经证实NDRG1 与细胞分化、器官成熟、组织缺氧、雌激素作用、抑癌基因p53 和PTEN 等有关［7－9］，并能被多种分化调节剂诱导表达［10］。目前对NDGR1 基因的功能认识还不完全清楚，其在肿瘤组织中的表达也存在很大争议。在报道的文献中，关于NDGR1与肿瘤的发生、发展、转移和预后都有很多的研究。目前较多文献报道，NDRG1 在很多肿瘤组织中表达上调，表现为促进作用，Wang 等［4］在结直肠肿瘤中发现，NDRG1 在结直肠肿瘤的发生、发展和转移过程中可能起促进作用。而也有文献报道，NDRG1 在肿瘤组织中表达下调，表现为抑制作用，Maruyama Y 等［5］发现NDRG1 蛋白高表达的NDRG1 cDNA 转染胰腺癌细胞株侵袭能力显著减少，表明NDRG1可能是一个肿瘤转移抑制基因。

本研究采用免疫组织化学方法检测了65 例口腔鳞癌组织和20 例正常口腔黏膜组织中NDRG1蛋白表达情况，发现NDRG1 蛋白在口腔鳞癌组织中高表达(阳性率为72.3%)，而正常口腔黏膜组织中低表达(阳性率为25%)，差异有显著统计学意义(p ＜0.01)。同时，我们通过对65 例口腔鳞癌组织临床病理特征与NDRG1 蛋白表达的相关性研究发现，NDRG1 基因的表达与癌组织分化程度、肿瘤浸润深度、临床分期及有无淋巴结转移密切相关。分化程度低、浸润深、分期高及有淋巴结转移的患者，NDRG1 蛋白表达高，差异均具有统计学意义(p ＜0.05)，而与患者的发病部位、年龄、性别无明显关系。这说明NDRG1 蛋白的表达可能参与了口腔鳞癌的发生、发展及浸润转移，但作用机制不清，还有待我们进一步去研究。同时，研究如何抑制NDRG1 基因表达及抑制其表达产物的功能有可能成为将来治疗肿瘤的新方法。

［1］ Stanton BR，Perkins AS，Tessarollo，et al.Loss of N-myc function results in embryonic lethality and failure of the epithelial component of the embryo to develop［J］.Genes Dev，1992，6(12A):2235 －2247

［2］ Charron J，Malvnn BA，Fisher P，et al.Embryonic lethality in mice homozygous for a targeted disruption of the N-myc gene［J］.Genes Dev，1992，6(12A):2248 －22457

［3］ Lachat P，Shaw P，Gebhard S，et al.Expression of NDRG1，a differentiation-related gene，in human tissues［J］.Histochem Cell Biol，2002，118(5):399 －408

［4］ Wang Z，Wang F，Wang WQ，et al.Correlation of N-myc downstream-regulated gene 1 overexpression with progressive growth of colorectal neoplasm［J］.World J Gastroenterol，2004，(10):550－554

［5］ Akiba J，Ogasawara S，Kawhara A，et al.N-myc downstream regulated gene 1(NDRG1)/Cap43 enhances portal vein invasion and intrahepatic metastasis in human hepatocellular carcimonal［J］.Oncol Rep，2008，20(6):1329 －1335

［6］ Maruyama Y，Ono M，Kawahara A，et al.Tumor growth suppression in pancreatic cancer by a putative metastasis suppressor gene Cap43/NDRG1/Drg-1 through modulation of angiogenesis［J］.Cancer Res，2006，66(12):6233 －6242

［7］ Van Belzen N，Dinjens WN，Diesveld MP，et al.A novel gene which is up-regulated during colon epithelial cell differentiation and down-regulated in colorectal neoplasms［J］.Lab Invest，1997，77(1):85 －92

［8］ Stein S，Thomas EK，Herzog B，et al.NDRG1 is necessary for p53-dependent apoptosis.J Biol Chem［J］.2004，279 (47):48930 －48940

［9］ Bandyopadhyay S，Pai SK，Hirota S，et al.PTEN up-regulates the tumor metastasis suppressor gene Drg-1 in prostate and breast cancer［J］.Cancer Res，2004，64(21):7655 －7660

［10］ Piquemal D，Joulia D，Balagure P，et al.Differential expression of the RTP/Drg1/Ndr1 gene product in proliferating and growth arrested cell［J］.Biochim Biophys Acta，1999，1450(3):364 －373