GC法同时测定粗壮女贞苦丁茶中4种挥发性成分

刘 莉， 李 清， 陈晓辉， 史 芳， 果德安， 毕开顺

(沈阳药科大学药学院，辽宁沈阳 110016)

粗壮女贞Ligustrum robustum(Roxb.)Blume为木犀科女贞属植物，是我国西南地区小叶苦丁茶的主流品种［1］，具有降压、消炎、镇痛、减肥、保肝与抗氧化等药理作用［2-6］。粗壮女贞苦丁茶中含有较多挥发油，其组成主要为单萜烯、倍半萜烯类及其含氧衍生物、萜类化合物、脂肪族类化合物等［7-9］，其中芳樟醇质量分数达到41.82%。芳樟醇具有抗菌、抗病毒和镇静等作用［10-11］。目前尚无关于粗壮女贞苦丁茶挥发油类成分定量测定的文献报道。对粗壮女贞中主要挥发油成分进行定量分析，有利于系统全面地评价粗壮女贞苦丁茶的质量。因此本实验建立了同时测定粗壮女贞中芳樟醇、α-松油醇、β-月桂烯和D-柠檬烯的气相色谱法。所建立的方法简便、准确，为粗壮女贞苦丁茶的进一步开发利用提供了信息。

1 仪器与试剂

1.1 仪器 Agilent 7890A气相色谱仪(Agilent公司);电子调温电热套(天津市泰斯特仪器有限公司);电子天平(天津市天马仪器厂);AGBP210S电子天平(德国Satorius公司);挥发油提取器。

1.2 试剂 β-月桂烯和D-柠檬烯对照品购自上海友思生物科技有限公司(纯度均大于98%);芳樟醇(批号:1503-200001)购自中国药品生物制品检定所(纯度大于99%);α-松油醇由湖南正清药业提供(纯度大于99%);正庚醛(纯度大于98%)，购于常州新华活性材料研究所。正己烷(色谱纯)，购自山东禹王实业有限公司化工分公司;无水硫酸钠(分析纯)，购自天津大茂化学试剂厂。

14批粗壮女贞苦丁茶分别购自云南，四川，沈阳等地中药材或茶叶市场，经沈阳药科大学生药学教研室路金才教授鉴定为木犀科粗壮女贞Ligustrum robustum(Roxb.)Blume。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 DB-17毛细管色谱柱(30 m ×0.25mm，0.25 μm);程序升温，柱温初始 60 ℃，以3℃/min升温至75℃(保留5 min)，再以5℃/min升至85℃(保留3 min)，以8℃/min升温至117℃(保留5 min)，最后以50℃/min升温至240℃;进样口温度:250℃;FID检测器，检测器温度300℃;分流比:4 ∶1;进样量:1 μL。

2.2 溶液的配制

2.2.1 混合对照品溶液 取 β-月桂烯、D-柠檬烯、芳樟醇和α-松油醇适量，精密称定，置于同一25 mL量瓶中，加正己烷配成 β-月桂烯0.106 8 mg/mL，D-柠檬烯 0.161 0 mg/mL，芳樟醇 7.250 mg/mL，α-松油醇3.374 mg/mL的混合对照品溶液，4℃冰箱中保存，备用。

2.2.2 内标溶液 取正庚醛约100 mg，精密称定，加正己烷配制成10.08 mg/mL的贮备液，4℃冰箱中保存，备用。

2.2.3 供试品溶液 取本品粉末约7.5 g，精密称定，置圆底烧瓶中，加10倍量蒸馏水，连接挥发油测定器。自测定器上端加水充满刻度部分，加正己烷1 mL，加热至沸，保持微沸5 h，停止加热，冷却至室温，分取正己烷层，加无水 Na2SO4约0.4 g，除去水分，取上层溶液至10 mL量瓶，精密加入0.25 mL内标溶液，加正己烷定容，得供试品溶液。

2.3 方法学验证

2.3.1 专属性考察 分别取空白溶剂、对照品溶液和供试品溶液，在2.1项色谱条件下测得正庚醛，β-月桂烯、D-柠檬烯、芳樟醇和α-松油醇的保留时间分别为 6.10 min，7.55 min，9.33 min，14.52 min 和19.77 min，结果显示在对照品和内标保留时间处无杂质峰干扰，供试品溶液中其他成分对测量无干扰，表明方法专属性良好。典型色谱图见图1。

2.3.2 标准曲线与线性范围 分别精密量取混合对照品溶液 0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、9.0 mL 置10 mL量瓶中，精密加入0.25 mL内标溶液正己烷定容至刻度，即得系列混合对照品溶液，在2.1项色谱条件下测定。以对照品与内标峰面积比 (Y)为纵坐标，以各对照品浓度为横坐标(X:mg/mL)，得回归方程。见表1。结果表明，β-月桂烯、D-柠檬烯、芳樟醇和 α-松油醇分别在 2.700 ～ 95.4 μg/mL，4.000 ～144.0 μg/mL，181.2 ～6 525 μg/mL 和84.4～3 036 μg/mL范围内线性关系良好。

表1 粗壮女贞苦丁茶中4种成分的回归方程和相关系数Tab.1 Regression equation of four components in Ligustrum robustum(Roxb.)Bl.

2.3.3 精密度试验 精密吸取混合对照品溶液，按2.1项下色谱条件测定，连续进样6次，测得β-月桂烯、D-柠檬烯、芳樟醇和α-松油醇的峰面积与内标峰面积比值的RSD分别为1.7%，1.5%，1.1%和1.3%，结果表明仪器精密度良好。

2.3.4 重复性试验 分别取6份同一批号样品，每份约7.5 g，精密称定，按2.2.3项下方法制备供试品溶液，在2.1项色谱条件下测定，测得β-月桂烯、D-柠檬烯、芳樟醇和 α-松油醇 RSD分别为2.0%，1.3%，1.5%和1.9%，结果表明方法重复性好。

2.3.5 稳定性试验 取同一供试品溶液，室温下放置，分别于 0、2、4、8、12、24、48 h 在 2.1 项色谱条件下测定，测得 β-月桂烯、D-柠檬烯、芳樟醇和 α-松油醇与内标峰面积比的RSD分别为1.9%，1.4%，2.0% 和1.4%，表明供试品溶液在48 h内稳定。2.3.6 回收率试验 分别取已知量的同一批次粗壮女贞共9份，每份约3.8 g，精密称定，以低、中、高浓度分别精密加入对照品溶液，每一浓度3份，按

2.2.3项下方法制备供试品溶液并在2.1项色谱条件下进样分析，计算回收率，结果见表2。

表2 粗壮女贞苦丁茶中4种成分回收率实验结果(n=9)Tab.2 Results of recoveries of four components in Ligustrum robustum(Roxb.)Bl.(n=9)

2.4 样品测定 分别取14批粗壮女贞药材，每份约7.5 g，精密称定，按 2.2.3 项下方法制备供试品溶液，在2.1项色谱条件下测定，以内标对比法计算样品质量分数，结果见表3。

3 讨论

3.1 本实验分别考察了HP-5，DB-1，DB-17毛细管色谱柱，结果表明DB-17色谱柱对待分离组分分离效果最好，因此选用DB-17中等极性毛细管色谱柱。

3.2 分别考察了提取用水量，萃取溶剂和提取时间对提取效率的影响，其中提取时间对提取效率影响较大。分别考察了提取时间为3、4、5、6 h时挥发油的提取量，结果表明提取5 h提取效率较高，继续提取挥发油量无明显变化。因此选择5 h作为提取时间。最终确定以10倍量水提取5 h，并用正己烷萃取作为挥发油提取条件。

3.3 实验结果表明，四川粗壮女贞老叶中挥发油各成分质量分数均明显高于其嫩芽叶中挥发油各成分量，可能与干燥方法、干燥程度和储存方法有关;而云南产和四川产粗壮女贞的嫩芽叶比较，挥发油的量差异不明显，川产粗壮女贞挥发油量略高。市场上粗壮女贞苦丁茶作为茶叶和袋泡茶饮用的商品主要来源于其嫩芽叶，而老叶则主要用以开发具有降脂、减肥、解酒、保肝等作用［12-13］的保健品。从定量测定的结果可以得知，芳樟醇在各批次粗壮女贞中质量分数均较大，表明芳樟醇与粗壮女贞苦丁茶挥发油的药理活性可能有着密切的关系。

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