RP-HPLC法测定银屑颗粒中落新妇苷

2011-05-26李启艳朱日然徐丽华

中成药 2011年6期

李启艳，朱日然，徐丽华

(1.山东省药品检验所，山东济南 250010;2.山东中医药大学附属医院，山东济南 250012)

银屑颗粒由土茯苓、菝葜两味药组成，具有祛风解毒的功效，临床用于治疗银屑病。研究表明，土茯苓和菝葜均含有落新妇苷，为了确保药品的安全有效，我们采用高效液相色谱法对落新妇苷进行定量测定［1-4］。

1 仪器与试药

岛津UV-2550紫外分光光度计，Mettler AE240电子天平，Agilent1200高效液相色谱仪。落新妇苷对照品，烟台大学提供，供定量测定用。银屑颗粒，山东鲁泰环中制药有限公司生产(批号:100401、100402、100403);甲醇、乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法

2.1 色谱条件［5-6］色谱柱 Kromasil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm);流动相甲醇-0.1%磷酸(25 ∶75)，体积流量1 mL/min;柱温35℃;检测波长291 nm。理论板数按落新妇苷峰计算应不低于3 000。采用此色谱条件，供试品及对照品色谱分离度良好，见图1、2。

图1 落新妇苷对照品HPLC色谱图

2.2 方法与结果

2.2.1 线性关系的考察精密称取落新妇苷对照品9.47 mg，加60%甲醇溶解并稀释至100 mL，摇匀，作为对照品溶液(落新妇苷质量浓度为0.094 7 mg/mL)。

图2 供试品HPLC色谱图

分别精密吸取上述对照品溶液各 2、4、8、12、16、20 μL，注入液相色谱仪，分别测定峰面积积分值。以落新妇苷对照品的进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，进行线性回归，得回归方程Y=2 276.444 0X+21.119 5，相关系数r=1.000 0。表明落新妇苷进样量在 0.189 4 ～1.894 0 μg之间与峰面积积分值呈良好的线性关系。

2.2.2 精密度实验精密吸取上述对照液10 μL，注入液相色谱仪，连续进样6次，按上述测定方法进行测定，结果落新妇苷峰面积积分值的RSD为0.43%，表明仪器精密度良好。

2.2.3 稳定性试验取装量差异项下的本品内容物(山东鲁泰环中制药有限公司生产，批号:100401)，研细，取约1.0 g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入60%甲醇25 mL，称定质量，加热回流1 h，放冷，再称定质量，用60%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

精密吸取上述供试品溶液10 μL，每隔2 h进样一次，测定落新妇苷的峰面积积分值，共考察8 h，以观察样品溶液在检测过程中待测成分的稳定性，结果RSD为0.08%，表明供试品溶液在8 h内稳定性良好，能够满足测定需要。

2.2.4 重复性试验取装量差异项下的本品内容物(山东鲁泰环中制药有限公司生产，批号:100401)，研细，取约1.0 g，共取5份，按样品测定项下的供试品溶液的制备方法，分别制得供试品溶液。按上述测定方法进行测定，计算落新妇苷的量，结果平均含落新妇苷为14.2 mg/袋，RSD为1.11%，表明本品测定方法的重复性良好。

2.2.5 回收率试验对照品贮备液的制备精密称取落新妇苷对照品13.45 mg，置100 mL量瓶中，加60%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(落新妇苷质量浓度为0.134 5 mg/mL)。

取已测定的装量差异项下本品内容物(山东鲁泰环中制药有限公司生产，批号:100401，平均装量:5.958 6 g，含落新妇苷为14.2 mg/袋)，研细，取约 0.5 g，精密称定，共取 5份，置圆底烧瓶中，精密加入落新妇苷对照品贮备液(落新妇苷对照品质量浓度为0.134 5 mg/mL)10 mL，再精密加入60%甲醇15 mL，按样品测定项下的供试品溶液的制备方法，制得供试品溶液。照上述测定方法进行测定，计算回收率，结果见表1。结果表明，本方法的回收率良好。