炮制对北五味子木脂素类成分的影响

2011-05-26逄世峰郑培和许世泉孙成贺王英平

中成药 2011年2期

逄世峰，郑培和，许世泉，孙成贺，王英平

(中国农业科学院特产研究所，吉林吉林 132109)

北五味子为木兰科植物五味子Schisandra chinensis(Turcz)Baill的干燥成熟果实，具有收敛固涩，益气生津，补肾宁心之功效［1］。中药化学成分是其药效发挥的物质基础，联苯环辛烯型木脂素是五味子中主要生理活性成分［2］，其中包括五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素和五味子乙素等［3］。中药饮片是在中医药理论的指导下，对“中药材”进行特殊加工炮制的制成品，以醋五味子、酒五味子、

蜜五味子为临床常用［4］。炮制对饮片理化性质的影响是必然存在的，本实验采用高效液相色谱法对炮制前后五味子中木脂素类成分及其溶出率进行了研究，并以五味子种子进行同步比较，试图从化学成分角度探讨北五味子不同炮制品木脂素类成分的变化与药效发挥之间的关系，为中药炮制现代化奠定一定理论基础。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent 1200高效液相色谱仪;超声波清洗器(上海科导超声仪器有限公司);电子分析天平(梅特勒TOLEDO型)。

1.2 对照品五味子醇甲、五味子醇乙对照品购自四川维克奇生物科技有限公司，五味子甲素(批号:0764-200107)、五味子乙素(批号:110765-200205)对照品购于中国药品生物制品检定所，供含量测定用。

1.3 试剂甲醇为色谱纯，水为超纯水;其他试剂均为分析纯。

1.4 药材北五味子:购自吉林省通化县，经中国农业科学院特产研究所特作园艺研究室艾军研究员鉴定为木兰科植物五味子Schisandra chinensis(Turcz)Baill的干燥成熟果实。

2 方法

2.1 五味子炮制品的制备［5］

2.1.1 生五味子取原药材，除去杂质及果柄，洗净，干燥，均匀分成4等份，装入自封袋保存，以防吸潮影响试验结果。取出其中1份，另外3份用于五味子炮制品制备。

2.1.2 醋五味子取净五味子，用米醋拌匀，置保鲜盒内，密闭，隔水加热至黑色，取出干燥，称重。醋的用量为每100 g药材加20 g米醋。

2.1.3 酒五味子取净五味子，用黄酒拌匀，置适宜的容器内，密闭，隔水加热至表面呈紫黑色或黑褐色，取出干燥，称重。黄酒的用量为每100 g药材加20 g黄酒。

2.1.4 蜜炒五味子取炼蜜加适量开水稀释后，加入净五味子中，拌匀，润透，置炒制容器内，用文火加热，炒至不黏手为度，取出放凉。每100 g五味子，用炼蜜10 g。

2.1.5 生五味子种子取原药材种子，除去杂质，干燥，均匀分成4等份，装入自封袋保存，以防吸潮影响试验结果。取出其中1份，另外3份用于五味子种子炮制品制备。

2.1.6 醋五味子种子取五味子种子，用米醋拌匀，置保鲜盒内，密闭，隔水加热1.5 h，取出干燥，称重。醋的用量为每100 g药材加20 g米醋。

2.1.7 酒五味子种子取五味子种子，加入黄酒，拌匀，置适宜的容器内，密闭，隔水加热1.5 h，取出干燥，称重。黄酒的用量为每100 g药材加20 g黄酒。

2.1.8 蜜炒五味子种子取炼蜜加适量开水稀释后，加入净五味子种子中，拌匀，润透，置炒制容器内，用文火加热，炒至不黏手为度，取出放凉。每100 g五味子种子，用炼蜜10 g。

2.2 供试品溶液制备取生品及各炮制品若干，粉碎，过10目筛，精密称取样品粉末1 g，置于50 mL量瓶中，加甲醇40 mL，静止过夜，超声提取20 min 2次，定容至刻度，摇匀，0.45 μm滤膜过滤，即得供试品溶液。

2.3 色谱条件色谱柱:hypersil ODS2色谱柱(4.6 mm ×250 mm，5 μm);流动相:(A)乙腈-(B)水;检测波长:225 nm;流速:1 mL/min，柱温:25℃;进样量:20 μL。

表1 梯度洗脱条件Table 1 Gradient elution conditions

2.4 标准曲线的绘制精密称取1.0 mg五味子醇甲、醇乙、甲素、乙素对照品，用甲醇定容至10 mL量瓶中。进样 2.5、5、7.5、10、15、20 μL，以对照品进样量 (Y，μg)为纵坐标，相应的色谱峰面积(X)为横坐标进行回归，得五味子木脂素醇甲、醇乙、甲素、乙素的回归方程分别为:Y=0.004 374X+0.037 075，r:1;Y=0.004 755X－ 0.053 86，r:0.999 9;Y=0.003 922X+0.024 132，r:0.999 9;Y=0.004 725X+0.028 153，r:1。

2.5 样品含量测定分别精密吸取供试品溶液各20 μL，注入高效液相色谱仪，得相应色谱峰面积，代入回归方程，计算相应木脂素含量。

2.6 炮制对五味子木脂素溶出率的影响［6］取各炮制方法制备五味子及生品12.5 g，加水250 mL，浸泡1 h，煎煮保持微沸1 h，取出残渣，50℃烘干，称重。按照上述方法测定残渣中五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素含量。

3 结果与讨论

4种木脂素对照品、北五味子果和种子生品及其炮制品的HPLC谱图见图1，主要木脂素类成分的含量和溶出率测定结果见表2。

表2 不同炮制品木脂素类成分含量及溶出率Table 2 The contents and solubility of lignan compounds in different processed products

图1 北五味子不同炮制品高效液相色谱图1.五味子醇甲 2.五味子醇乙 3.五味子甲素 4.五味子乙素Fig.1 The HPLC chromatograms of different processed products of Schisandra chinensis1.schizandrin 2.schisandrol B 3.deoxyschizandrin 4.γ-schizandrin

北五味子经不同方法炮制后，并没有新成分产生，只是木脂素类成分含量和溶出率有不同程度的变化:

各五味子种子炮制品木脂素类成分含量及溶出率均较生品中低。由此推论五味子在炮制过程中木质素类成分有小量蒸出，后在蒸制水中检测到相应木质素类成分证明这一点;此外，炮制不利于五味子种子中木脂素类成分溶出，与前人推测“五味子经炮制后种皮变脆或破裂，易于五味子木脂素溶出”［7］不相一致。

蜜五味子和酒五味子木脂素类成分及溶出率有不同程度的提高，可能由于辅料的加入破坏了五味子果中易升华或易挥发成分组成，从而减少了木质素蒸出动力，也可能五味子果中某类成分或其他木质素类成分在蜜和酒的作用下向试验测定木脂素转化，其变化机制来源于加热过程中辅料与果肉的作用，使传统炮制理论“入补药熟用”有了一定科学依据。

在醋五味子中，除五味子乙素含量稍有增加，其他木脂素类成分含量及溶出率均有减小，而不同炮制品中以醋五味子的抗脂质过氧化及提高免疫作用最为明显［8］，可能其功效体现在本试验未测定木脂素类成分的变化［9］。