24个产地龙葵中澳洲茄碱的含量测定

单会娇， 张建逵， 许 亮， 韩荣春， 徐保利， 王 冰

(辽宁中医药大学药学院，辽宁大连 116600)

龙葵是茄科植物龙葵Solanum nigrumL.的干燥地上部分，曾被1977年版《中国药典》收载。龙葵性寒、味苦、微甘、有小毒，有清热解毒、消肿散结、消炎利尿等功效［1］。龙葵不仅在传统医学上有着广泛应用，在现代临床医学上也有很多新用途［2-5］。龙葵具有很好的抗肿瘤活性，其中的药理活性物质是甾体生物碱类成分，主要包括澳洲茄碱(solasonine)、澳洲茄边碱(solamargine)等，研究表明澳洲茄碱在体外抗肿瘤实验中表现出很好的抗肿瘤活性［6］。但目前对于澳洲茄碱含量测定方面的文献较少［7-8］。本实验旨在对来自10个省市、24个产地不同生境、生长周期的龙葵中的澳洲茄碱进行分析，以便更好的控制龙葵药材的来源及最佳采收期，为龙葵药材的质量控制提供依据。

1 材料与试药

1.1 仪器

Agilent1100高效液相色谱仪(美国Agilent公司)，包括四元泵，柱温箱，紫外检测器及chem station色谱工作站，KQ3200B型超声波清洗仪(昆山超声仪器有限公司)，Sartorrius BP211D型电子分析天平。

1.2 材料

龙葵采自10个省市、24个产地，由辽宁中医药大学药用植物教研室王冰教授鉴定为茄科茄属龙葵Solanum nigrumL.。粉碎，过60目筛，具体见表1。

表1龙葵药材来源一览表

2 方法与结果

2.1 色谱条件

Agilent TC-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm);流动相:乙腈(A)，0.5%磷酸溶液(B)，梯度洗脱条件为:0～7 min，A:22%，B:78%;7～20 min;A:22% ～25%，B:78% ～75%;体积流量:0.9 mL/min;柱温:30℃;进样量为:20 μL;检测波长:203 nm。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取澳洲茄碱对照品10.46 mg，置于10 mL量瓶中，用色谱甲醇溶解至刻度，摇匀，制成1.046 mg/mL的对照品溶液作为贮备液。

2.3 供试品溶液的制备

精密称取龙葵药材粉末2.0 g置于50 mL具塞锥形瓶中，加入10倍体积的60%乙醇溶液，60℃下超声提取2次，每次30 min，滤过，合并滤液，滤液水浴加热，浓缩至近干，用60%乙醇溶解并转移至25 mL量瓶中，稀释至刻度，摇匀，0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品液。

2.4 系统适用性试验

精密吸取供试品溶液20 μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，以澳洲茄碱计算，理论塔板数不低于5 000。如图1。

图1 澳洲茄碱HPLC图

2.5 线性关系考察

精密吸取对照品贮备液5 mL，置于10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，得浓度为0.523 mg/mL的对照品溶液，分别吸取浓度为0.523 mg/mL的对照品 0.5、1、2、4、6、8、10、15、20 μL，以及对照品贮备液15 μL，注入高效液相色谱仪，记录峰面积，以含量(μg)为坐标(X)，以峰面积为坐标(Y)，进行线性回归，得回归方程:Y=263.81X－14.82，r=0.999 6，表明澳洲茄碱在0.261 5～10.46 μg范围内线性关系良好。

2.6 精密度试验

取浓度为0.523 mg/mL的对照品溶液，连续进样6次，每次10 μL，记录峰面积，RSD为1.94%，结果表明仪器精密度良好。

2.7 重复性试验

精密称取编号为1的药材粉末2.0 g，按供试品制备方法，平行制备6份，进行测定，计算各澳洲茄碱含量，算得RSD为1.96%，结果表明该方法重复性良好。

2.8 稳定性试验

取编号为1的供试品制备液，分别于0、2、4、8、16、24、48 h后进行测定，记录峰面积，算得RSD为1.43%，结果表明该样品在48 h内稳定。

2.9 回收率试验

精密称取已知含量的的药材粉末(编号为1)6份，每份1.0 g，置于50 mL具塞锥形瓶中，再精密加入澳洲茄碱对照品溶液(0.523 mg/mL)1 mL，按供试品制备方法，平行制备，测定含量，平均加样回收率为100.14%，RSD为1.38%。

2.10 测定结果

精密称取不同产地、生境及不同生长周期的龙葵药材粉末(过60目筛)2.0 g，按供试品制备项下的方法制备，进样20 μL，测定色谱峰面积，按外标两点法计算龙葵中澳洲茄碱的含量。具体见表2。

3 讨论与结论

本实验对来自10个省市、24个产地不同生境及不同生长周期的龙葵中澳洲茄碱的含量进行测定，结果表明龙葵药材中澳洲茄碱含量因产地、生境及生长周期不同差异很大。

3.1 产地比较 辽西地区所产龙葵中的澳洲茄碱含量较高，可能是因为当地比较干旱引起的［9］。

3.2 生境比较 在不同生境下的龙葵药材中，以田间的龙葵，澳洲茄碱含量较高，可能是由于农田中常常施加氮肥，有利于澳洲茄碱的合成。另外，马铃薯地中的龙葵，澳洲茄碱含量最高，可能由于马铃薯也为茄科植物，对于龙葵中的某些成分的积累有一定的协同作用，但仍有待进一步研究。

3.3 生长周期比较 苗期、花期、成熟后期以及摘除龙葵果实的龙葵地上部分澳洲茄碱的含量极低，甚至未检出，而以盛果期及始熟期的龙葵地上部分澳洲茄碱含量较高，其次为成熟期，由此推断出，澳洲茄碱主要存在于龙葵果实中，与文献报道［8，10-11］相符，同时与1977年版《中国药典》规定的“带果者为佳”一致。

表2 龙葵药材中澳洲茄碱含量(n=3)

［1］中国药典［S］.一部，1977:154.

［2］郑虎占，董泽宏，佘 靖主编.中药现代研究与应用［M］.北京:学苑出版社，1997:1388-1392.

［3］向大斌.土家药龙葵外敷治疗眼睑带状疱疹［J］.中国民族医药杂志，2004，2:42.

［4］顾锦华，张 伟，李 锋，等.复方龙葵胶囊抗肿瘤作用及其对肿瘤细胞周期分布的影响［J］.时珍国医国药，2006，17(12):2463-2464.

［5］王 蔚，陆道培.龙葵总提取物对多发性骨髓瘤U 266细胞株的作用［J］.北京大学学报:医学版，2005，37(3):2402-2441.

［6］罗文娟，王光辉，周新兰，等.螺甾皂苷类化合物的体外抗人肝细胞增殖作用［J］.现代肿瘤医学，2007，15(3):307-308.

［7］袁海建，安益强，陈 彦，等.高效液相色谱法测定龙葵中澳洲茄碱的含量［J］.中华中医药杂志，2009，24(1):96-97.

［8］李明慧，丁 冈，孟兆青，等.龙葵药材中澳洲茄碱、澳洲茄边碱的含量测定［J］.中国天然药物，2007，5(5):360-362.

［9］黄璐奇，郭兰萍.环境胁迫下次生代谢产物的积累及道地药材的形成［J］.中国中药杂志，2007，32(4):277-280.

［10］袁海建，贾晓斌，陈 彦，等.不同产地龙葵中澳洲茄碱的分析研究［J］.中草药，2008，39(5):772-774.

［11］杨 辉，陈晓青，赵 宇，等.龙葵甾体类生物碱的表征、及其在该植物体内的形成、变化［J］.精细化工，2006，23(4):358-361.