核桃仁可水解丹宁成分研究（Ⅲ）

金哲雄， 曲中原

（哈尔滨商业大学药学院，黑龙江哈尔滨 150076）

核桃仁为胡桃科植物胡桃Juglans regiaL.的成熟种子。主产于我国河北、北京、山西、山东等地区。核桃仁性甘，温，具有补肾温肺，润肠通便之功效，用于腰膝酸软，阳萎遗精，虚寒喘嗽，大便秘结［1］。核桃仁中除了含有丰富的不饱和脂肪酸和优质蛋白质外，其单宁类物质含量达0.372% ～1.095%（以儿茶素为计量单位）［2］。作者对核桃仁可水解丹宁成分进行了系统研究，曾从核桃仁中分离鉴定了12种化合物［3-4］，现又从该植物的种子中分离鉴定了6种化合物，均尚未见从该植物种子中分得的相关文献报道。

1 材料

Bruker AM600型NMR测试仪;Shimadzu UV180型紫外测定仪;JEOL GE XHX100MS仪;自动流分收集仪（HL-2）恒流泵产于上海市沪西机器厂;AFQ旋转薄膜蒸发仪，产于天津玻璃仪器厂。核桃仁购于哈尔滨市中药材市场，由哈尔滨商业大学药学院中药鉴定教研室张德连教授鉴定为胡桃科Juglans regiaL胡桃的成熟种子，样品现存于哈尔滨商业大学中药标本室内。

2 提取分离

核桃仁10 kg，粉碎成细粉，用70%乙醇冷浸24 h，提取液于40℃真空浓缩后，用正己烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取。得到正己烷提取物120 g，乙酸乙酯提取物20 g，正丁醇提取物30 g，水提取物270 g。取正丁醇提取物20 g，用Toyopearl HW-40、MCI gel CHP-20柱色谱反复分离，以甲醇-水（3∶7→4∶6→6∶4→7∶3）梯度洗脱，根据HPLC检识，合并相同的部分，得化合物Ⅰ（14 mg），化合物Ⅳ（20 mg），化合物Ⅴ（30 mg）。取乙酸乙酯提取物20 g，用 Toyopearl HW-40（C）、sephadex LH-20柱色谱反复分离，以甲醇-水（3∶7→4∶6→6∶4→7∶3）梯度洗脱，根据HPLC检识，合并相同的部分，得化合物Ⅱ（34 mg）、化合物Ⅲ（28 mg）、化合物Ⅵ（20 mg）。正相HPLC采用Waters M4液相色谱仪，柱Zorbax SIL（4.6 mm（150 mm，5 μm），检测波长 280 nm，室温，体积流量:2.5 mL/min，流动相:环己烷-甲醇-四氢呋喃-甲酸（55∶33∶11∶1）-草酸450 mg/L。反相HPLC采用Shimadzu LC-6A液相色谱仪，柱 Lichirospher Rp-18（4 mm（250 mm，5 μm），检测波长:280 nm，温度:40℃，流动相:磷酸缓冲液-乙醇-乙酸乙酯（85 ∶10 ∶5），体积流量:1.1 mL/min。

3 结构鉴定

化合物1:浅棕色无定形粉末（丙酮），与三氯化铁试剂反应显蓝色，明胶试剂反应阳性。FAB-MSm/z:657［M+Na］+;1H-NMR（600 Mz，Me2CO-d6+D2O）:谱中低场区显示1个双氢单峰δ 7.15，说明1个没食子酰基（galloyl）存在，此外δ 6.70，6.55处显示2个单氢单峰，说明1个逆没食子酰基hexahydroxydiphenoyl（HHDP）存在。高场区出现5.71（1H，d，J=8.0 Hz，H-1），3.67（1H，dd，J=8.0，9.0 Hz，H-2），3.80（1H，dd，J=9.0，10.0 Hz，H-3），4.88（1H，t，J=10.0 Hz，H-4），4.08（1H，dd，J=6.5，10.0 Hz，H-5），5.30（1H，dd，J=6.5，13.5 Hz，H-6），3.75（1H，d，J=13.5 Hz，H-6）。13C-NMR（126 MHz，Me2CO-d6+D2O）δ:92.0（C-1），75.8（C-2），77.2（C-3），69.0（C-4），73.1（C-5），63.0（C-6），166.8，166.4，166.1，（ester carbonyl）。以上数据与文献［5-6］报道一致，故确定其为小木麻黄素（strictinin）。

化合物2:浅棕色无定形粉末（丙酮），与三氯化铁试剂反应显蓝色，明胶试剂反应阳性。FAB-MSm/z:809（M+Na）+;1H-NMR（600 Mz，Me2CO-d6+D2O）:谱中低场区显示2个双氢单峰δ 7.29，7.09，说明2个galloyl基存在，此外δ 6.68，6.50处显示2个单氢单峰，说明一个HHDP基存在。高场区出现 6.50（1H，d，J=4.0 Hz，H-1），4.19（1H，dd，J=4.0，10.0 Hz，H-2），5.60（1H，t，J=10.0 Hz，H-3），5.10（1H，t，J=10.0 Hz，H-4），4.60（1H，dd，J=7.0，10.0 Hz，H-5），5.24（1H，dd，J=7.0，14.0 Hz，H-6），3.77（1H，d，J=14.0 Hz，H-6），13C-NMR（126 MHz，Me2CO-d6+D2O）δ:93.2（C-1），71.3（C-2），73.9（C-3），71.1（C-4），70.9（C-5），62.9（C-6），167.4，166.2，168.7，169.3（ester carbonyl）。以上数据与文献［7-8］报道一致，故确定其为榛子素A（heterophylliin A）。

化合物3:浅棕色无定形粉末（丙酮），与三氯化铁试剂反应显蓝色，明胶试剂反应阳性。FAB-MSm/z:959（M+Na）+;1H-NMR（600 Mz，Me2CO-d6+D2O）:谱中低场区显示1个双氢单峰 δ 7.07，说明1个 galloyl基存在，此外 δ 6.81，6.52，6.48处显示3个单氢单峰，说明2个HHDP基存在 。高场区出现 5.57（1H，d，J=5.1 Hz，H-1），4.61（1H，dd，J=2.1，5.1 Hz，H-2），5.41（1H，t，J=2.1 Hz，H-3），5.42（1H，dd，J=2.1，9.0 Hz，H-4），5.29（1H，dd，J=3.0，9.0 Hz，H-5），4.83（1H，dd，J=3.0，12.6 Hz，H-6），4.02（1H，d，J=12.6 Hz，H-6），13C-NMR（126 MHz，Me2CO-d6+D2O）δ:67.6（C-1），76.7（C-2），69.8（C-3），74.2（C-4），71.52（C-5），64.6（C-6），162.8，165.0，166.0，168.0，168.6（ester carbonyl）。以上数据与文献［9-10］报道一致，故确定其为没食子酰基木麻黄素（casuarinin）。

化合物4:浅棕色无定形粉末（丙酮），与三氯化铁试剂反应显蓝色，明胶试剂反应阳性。FAB-MSm/z:811［M+Na］+;1H-NMR（600 Mz，Me2CO-d6+D2O）:谱中低场区显示4个双氢单峰 δ 6.98，7.05，7.06，7.13，说明 4 个 galloyl基存在。高场区出现 6.15（1H，d，J=8.0 Hz，H-1），5.46（1H，d，J=8.0，10.0 Hz，H-2），5.67（1H，t，J=10.0 Hz，H-3），4.08（1H，t，J=10.0 Hz，H-4），4.14（m，H-5），4.63（1H，dd，J=2.0，12.5 Hz，H-6），4.52（1H，dd，J=5，12.5 Hz，H-6）。13C-NMR（126 MHz，Me2CO-d6+D2O）δ:93.5（C-1），71.9（C-2），76.0（C-3），69.5（C-4），76.1（C-5），63.7（C-6），169.1，168.8，168.5，168.0（ester carbonyl）。以上数据与文献［11］报道一致，故确定其为 1，2，3，4-四-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖（1，2，3，4-tetra-O-galloyl-β-D-glucose）。

化合物5:浅棕色无定形粉末（丙酮），与三氯化铁试剂反应显蓝色，明胶试剂反应阳性。FAB-MSm/z:659［M+Na］+;1H-NMR（600 Mz，Me2CO-d6+D2O）:谱中低场区显示3个双氢单峰 δ 7.16，7.12，7.06，说明 3个galloyl基存在。高场区出现 5.50（1H，d，J=3.5 Hz，H-1），5.02（1H，dd，J=3.5，10.0 Hz，H-2），4.26（1H，t，J=10 Hz，H-3），3.83（1H，t，J=10.0 Hz，H-4），4.16（m，H-5），4.52（1H，dd，J=2.0，12.0 Hz，H-6），4.12（1H，dd，J=4.0，12.0 Hz，H-6）。13C-NMR（126 MHz，Me2CO-d6+D2O）δ:93.5（C-1），69.2（C-2），70.07（C-3），62.5（C-4），76.0（C-5），64.8（C-6），169.1，168.8，168.5，（ester carbonyl）。以上数据与文献［12］报道一致，故确定其为 1，2，6-三-O-没食子酰基-α-D-葡萄糖（1，2，6-tri-O-galloyl-α-D-glucose）。

化合物6:浅棕色无定形粉末（丙酮），与三氯化铁试剂反应显蓝色，明胶试剂反应阳性。FAB-MSm/z:1 588［M+NH4］+;1H-NMR（600 Mz，Me2CO-d6+D2O）:谱中低场区显示3个双氢单峰δ 7.15，6.99，6.94，说明3个galloyl基存在，此外 δ 7.09，6.70，6.61，6.46，6.12 处显示 5 个单氢单峰，说明1个HHDP基和橡碗酰基（valoneoyl）存在 。高场区出现 5.76（1H，d，J=8.5 Hz，H-1），3.66（1H，dd，J=8.5，10.0 Hz，H-2），3.84（1H，t，J=10.0 Hz，H-3），4.91（1H，t，J=10.0 Hz，H-4），4.11（1H，dd，J=10.0，6.0 Hz，H-5），5.22（1H，dd，J=6.0，13.0 Hz，H-6），3.79（1H，d，J=13.0 Hz，H-6），6.10（1H，d，J=8.5 Hz，H-1′），5.58（1H，dd，J=8.5，10.0 Hz，H-2′），5.83（1H，t，J=10.0 Hz，H-3′），5.20（1H，t，J=10.0 Hz，H-4′），4.45（1H，dd，J=6.5，10.0 Hz，H-5′），5.36（1H，dd，J=6.5，13.5 Hz，H-6′），3.87（1H，d，J=13.5 Hz，H-6′）。13C-NMR（126 MHz，Me2CO-d6+D2O）δ:95.5（C-1），74.7（C-2），75.6（C-3），72.8（C-4），73.4（C-5），63.8（C-6），93.8（C-1′），71.8（C-2′），73.3（C-3′），70.8（C-4′），73.1（C-5′），63.1，（C-6′）168.36，168.25，168.20，167.73，166.58 ，166.811，165.71，162.48（ester carbonyl）。以上数据与文献［13］报道一致，故确定其为榛子素F（heterophylliin F）。

化合物1～6的结构图见图1～2。

图1 化合物1～2化学结构

图1 化合物3～6化学结构

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