浸润性乳腺癌组织ADAM-17蛋白表达的临床意义

杨星飞，张雪鹏*，赵光明，孙 影，韩 旭

(1河北联合大学附属医院，河北唐山063000;2河北联合大学基础医学部病理教研室)

乳腺癌是妇女最常见恶性肿瘤，近年来其患病率有升高趋势。以往判断乳腺癌患者预后的指标有肿瘤大小、临床分期、组织学分类与分级及淋巴结转移等。近年研究发现，表皮生长因子受体(EGFR)参与乳腺癌的发生，发展。解聚素—金属蛋白酶17(ADAM-17)是新近发现的ADAM蛋白家族成员，是EGFR 的配体［1～3］。为探讨 ADAM-17 在浸润性乳腺癌组织中的表达及其与临床病理的关系，我们进行了相关研究。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 收集2008年10月～2010年1月在河北联合大学附属医院行乳腺癌切除手术的108例女性患者的癌组织标本，患者年龄22～77岁、中位年龄45岁，术前均未进行放、化疗及免疫治疗。依据2003年WHO制定的乳腺癌组织学分类，诊断为非特殊型浸润性导管癌82例，非特殊型浸润性小叶癌13例，特殊型浸润性乳腺癌13例;82例导管癌的组织学分级为Ⅰ级32例、Ⅱ级36例，Ⅲ级14例。有淋巴转移52例。根据国际抗癌协会制定的TNM分期，临床分期为Ⅰ期36例、Ⅱ期49例、Ⅲ期23例。患者行病灶切除手术后，切取其肿瘤组织20 g左右，迅速冻存于－80℃冰箱中。

1.2 检测方法 应用免疫印迹方法检测癌组织中的ADAM-17蛋白表达，分别取冻存乳腺癌组织65 mg，称重、粉碎，低温下 1 2000 r/min、4 ℃ 离心 20 min，取上清液。实验设标准管、样品管、空白管，在波长650 nm条件下测定总蛋白的OD值后计算出其浓度。取50 μl蛋白样品，7.5%聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，150 V、1.5 h。转膜至聚偏氟乙烯膜上，用TBS液洗膜，5%脱脂奶粉封闭1 h。Tween20三羟甲基氨基甲烷溶液洗涤3次，5 min/次，分别加入兔抗人ADAM-17多克隆一抗、羊抗兔IgG二抗，室温孵育，加入碱性磷酸酶底物，显色液显色，用扫描仪扫描成像。ADAM-17蛋白在100 kD(活性蛋白)和120 kD(前体蛋白)处显示特异性条带;设分子量为42 kD的β-actin为内参。实验所得Western blot条带由Photoshop软件处理，在Bandscan分析软件中测得100 kD的灰度值，进行定量比较分析，且采用自身β-actin灰度值校正。

1.3 统计学方法 采用SPSS15.0统计软件，数据以±s表示。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

乳腺癌组织中ADAM-17蛋白表达及其与临床病理特征的关系见表1。

表1 乳腺癌组织中ADAM-17蛋白表达及其与临床病理特征的关系(±s)

表1 乳腺癌组织中ADAM-17蛋白表达及其与临床病理特征的关系(±s)

临床病理特征 n ADAM-17P组织学分型108非特殊型浸润性导管癌 82 0.383±0.026非特殊型浸润性小叶癌 13 0.382±0.021 ＞0.05特殊型浸润性乳腺癌 13 0.387 ±0.025组织学分级 82Ⅰ级 32 0.382 ±0.016Ⅱ级 36 0.384 ±0.019 ＜0.05Ⅲ级 14 0.387 ±0.029临床分期 108Ⅰ期 36 0.372 ±0.015Ⅱ期 49 0.385 ±0.016 ＜0.01Ⅲ期 23 0.398 ±0.029淋巴结转移 108无56 0.377 ±0.016 ＜0.01有52 0.393 ±0.029

3 讨论

ADAM-17是ADAMs家族成员，因其参与TNF-α、转化生长因子-α(TGF-α)、解聚素、肝素—表皮生长因子、双调蛋白等生物配体释放，且这些生物配体的形成、脱落在肿瘤发生、发展、转移方面发挥重要作用，故ADAM-17是ADAMs家族成员中研究最广泛的因子。Suganuma等研究证明，在致癌因素暴露下，缺乏TNF-α的大鼠易患皮肤癌。EGFR在癌细胞转移、分化和血管生成起重要作用，目前，临床上已经有以EGFR为靶点的抗癌治疗药物。Gschwind等［4］发现，ADAM-17 可脱落像 TGF-α、肝素—表皮生长因子一样的因子，故认为ADAM-17是表皮生长因子家族受体，尤其是EGFR转化激活剂。ADAM-17可介导释放特异性EGFR配体，配体与表皮生长因子结合后激活EGFR，导致组织上皮过度增生紊乱，进而发展成癌症［5］。体外实验证明，激活的EGFR可促进肿瘤细胞分化增殖和不同细胞株转移［6］。现已证实［7］，ADAM-17蛋白在肝癌、卵巢癌、大肠癌等恶性肿瘤组织中过度激活及表达。

目前，对ADAM-17蛋白在乳腺肿瘤组织中的表达研究较少。本研究显示，乳腺癌组织ADAM-17蛋白表达与其组织学分级、临床分期和有无淋巴结转移相关，与组织学类型无关。提示ADAM-17蛋白表达上调可能对促进乳腺细胞异常增殖、恶性转化起重要作用，ADAM-17蛋白持续表达可能参与乳腺癌的恶性发展过程，成为反映乳腺癌恶性程度的参考指标之一。

综上所述，本研究认为ADAM-17蛋白可能促进浸润性乳腺癌的发生、发展，检测其表达水平可作为乳腺癌转移、复发的预测指标之一，对肿瘤的预防、早期诊断、治疗和预后评定均有重要意义。

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