HPLC法测定木薯叶中芦丁的含量Δ

2011-05-23何翠薇覃洁萍黄俏妮广西中医学院南宁市530001

中国药房 2011年23期

何翠薇，覃洁萍，黄俏妮（广西中医学院，南宁市 530001）

木薯（Manihot esculenta Crantz）又叫做树薯、木番薯，地下部结薯，属于大戟科木薯属植物[1]。木薯是中国主要的热带作物之一，在广西各地区都有栽培，人们种植木薯主要是为了获取其块根部分，而其同时产生的大量茎杆和叶等农副产品没有得到充分利用。据研究发现，在秘鲁与巴西一带的亚马逊丛林中，土著印第安人千百年来均有食用木薯叶的习惯，这一带居民的抗病能力明显高于其他地区，且没有人患癌症及糖尿病、高血压等疾病[2]。可见木薯除其块根部分外，其他没有充分利用的部分有可能含有有效药用成分。文献研究发现，木薯叶中有黄酮类化合物存在[3，4]，但至今未见其化学成分含量测定的文献报道。笔者采用高效液相色谱（HPLC）法测定木薯叶提取物中芦丁的含量，以为进一步开发利用木薯叶提供参考。

1 仪器与试药

Agilent 1100型HPLC仪，包括四元泵、真空脱气机、自动进样器、VWD可变波长检测器，Agilent 1100色谱工作站（美国Agilent公司）；AE100型电子分析天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司）；SB3200T超声提取器（必能信超声（上海）有限公司）。

芦丁对照品（中国药品生物制品检定所，批号：100080-200707，供含量测定用）；甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为超纯水（过0.45 μm微孔滤膜后使用）；木薯叶在不同月份采自广西桂北地区，经广西中医学院刘寿养副教授鉴定为真品，经50℃干燥48 h后粉碎，备用。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse XDB C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-0.1%磷酸（12∶88）；流速：1 mL·min-1；检测波长：354 nm；柱温：30 ℃；进样量：10 μL。理论板数按芦丁峰计算应不低于4000。在此色谱条件下，样品分离良好。色谱见图1。

图1 高效液相色谱图A.对照品；B.供试品；1.芦丁Fig 1 HPLC chromatogramsA.substance control；B.sample；1.rutin

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品贮备液精密称取经五氧化二磷减压干燥24 h的芦丁对照品适量，加乙醇制成每1 mL含0.6 mg的溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液取木薯叶粗粉0.3 g，精密称定，精密加入60%乙醇50 mL，浸泡后超声45 min，放冷，以60%乙醇补重，滤过，取续滤液1 mL，置于微型离心管中，以10000 r·min-1离心10 min，取上清液，即得。

2.3 线性关系考察

取上述芦丁对照品贮备液适量，以乙醇稀释成浓度分别为0.006、0.018、0.030、0.042、0.054、0.060 mg·mL-1的溶液，按上述色谱条件分别精密吸取10 μL进样测定。以峰面积积分值（Y）为纵坐标，对照品溶液的浓度（X）为横坐标，进行线性回归，得回归方程为Y＝22143X+0.3589（r＝0.9999）。结果表明，芦丁检测浓度在0.006～0.060 mg·mL-1范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。