寻常型银屑病患者外周血CD4+CD25+及CD8+CD25+细胞的检测

张艳杰，张士发，王莉丽，王良民

银屑病目前发病机制尚不明确，其外周血及皮损中CD4+CD25+调节性T细胞的抑制能力降低，导致效应T细胞活性增强，是银屑病免疫功能紊乱的特点之一[1]。目前有关CD4+CD25+调节性T细胞与银屑病的关系的研究结果不甚一致，而对于CD8+CD25+调节性T细胞与银屑病关系的研究更少。本文对进行期寻常型银屑病患者外周血CD4+CD25+和CD8+CD25+调节性T细胞进行研究，以探讨这两类调节性细胞亚群的变化及作用机制。

1 资料与方法

1.1 研究对象

随机选择进展期的寻常型银屑病患者21例，其中男 13例、女 8例，年龄（35±8）岁，病程（6.2±3.8）年，近2月未接受系统治疗和外用药治疗，不伴有系统性疾病。正常对照组21名，其中男13名、女8名，年龄（37±9）岁，均为志愿者，无银屑病、急慢性疾病史及家族史。

1.2 试剂和仪器

抗 CD4-PE、 抗 CD8-PE、 抗 CD25-FITC、IgG1-FITC和IgG1-PE荧光抗体均为Immunotech公司产品，FACScan流式细胞仪（Becton Dickinson公司）。

1.3 外周血淋巴细胞的提取和流式细胞术检测

常规分离单一核细胞，每管分装3×105～5×105个细胞。对照管分别加入10μL的IgG1-FITC和IgG1-PE，实验管分别加入10μL的CD4-PE+CD25-FITC和CD8-PE+CD25-FITC，混匀，37℃避光30min后洗涤3次，再加入PBS至总体积约0.5mL。进入流式细胞仪Machintosh操作系统进行检测，数据经Cellquest软件获取和分析，每个样本检测约104个细胞。

1.4 统计学方法

2 结果

进展期寻常型银屑病外周血CD4+CD25+T细胞及CD8++CD25+调节性T细胞数量与正常对照组相比，均显著降低，CD4+CD25+/CD8+CD25+比值则无明显差异（表1）。流式图见图1-4。

表1 进展期寻常型银屑病患者与健康人外周血CD4+CD25+及CD8+ CD25+ 调节性T细胞的检测（ ±s）

表1 进展期寻常型银屑病患者与健康人外周血CD4+CD25+及CD8+ CD25+ 调节性T细胞的检测（ ±s）

例数 CD4+CD25+ CD8+CD25+ CD4+CD25+/CD8+CD25+患者组 21 19.82±4.86 15.60±2.53 1.14±0.12对照组 21 27.25±4.92 23.73±3.06 1.31±0.16 t 2.29 3.15 0.83 P<0.05 <0.005 >0.05

3 讨论

既往研究发现寻常型银屑病外周血CD4+CD25+调节性T细胞数量明显升高，但与病情严重程度无明显相关[2]，也有报道其数量无明显变化，而仅仅表现为功能上的缺欠[1]。至于这些现象是由于反馈性的升高，还是银屑病仅与其功能缺欠有关，尚无统一意见。而近年来更多的研究报道发现CD4+CD25+调节性T细胞明显降低[3,4]，与本研究的结果一致。

在银屑病患者的外周血中，作为调节性T细胞，CD4+CD25+调节性T细胞数量降低可导致其抑制能力降低，或者其功能存在缺陷，导致Th1细胞失去抑制而过度活化，从而释放IFN和IL-2等细胞因子，通过K17-自身反应性T细胞，IFN环路等途径引起或加速银屑病的免疫病理损伤[5]。临床研究发现，应用他克莫司等治疗寻常型银屑病，治疗前CD4+CD25+调节性T细胞明显降低，治疗后随着病情的缓解，CD4+CD25+调节性T细胞明显升高[5]，也支持本文观点。

近年来CD8+CD25+调节性T细胞的作用引起人们的重视。CD8+CD25+调节性T细胞与CD4+CD25+调节性T细胞一样，具有抑制免疫反应和诱导免疫耐受作用，但其影响显著超过了CD4+CD25+调节性T细胞的调节作用[6]。有报道寻常型银屑病患者外周血CD8+CD25+调节性T细胞显著升高，与病情严重程度相关，认为CD8+CD25+调节性T细胞的激活是银屑病皮损发生和加重的重要炎症细胞[7]，但从近年来对CD8+CD25+调节性T细胞的作用机理认识和银屑病的免疫病理学特点来看，二者存在矛盾之处，而且难以作出合理解释。

本研究发现，进展期寻常型银屑病患者外周血CD8+CD25+调节性T细胞显著降低，由此可能导致其失去对CD4自身反应性T细胞的增殖、分泌IFN-γ和IL-17等功能的抑制，使STAT3和细胞毒T细胞抗原-4（CTLA-4）依赖性机制诱导的免疫耐受途径受阻，从而引起银屑病的病理改变，其作用显著超过了CD4+调节性T细胞的作用[7]。因此本文的结果可以更为合理地解释银屑病的免疫学发病机理。

图1 寻常型银屑病患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞流式图

图2 正常人外周血CD4+CD25+调节性 T细胞流式图

图3 寻常型银屑病患者外周血CD8+CD25+调节性T细胞流式图

图4 正常人外周血CD8+CD25+调节性 T细胞流式图

既往许多研究发现寻常型银屑病外周血CD4+/CD8+调节性T细胞比例失调，与银屑病的发病及加重有密切相关，而本研究发现，虽然银屑病患者外周血CD4+CD25+和CD8+CD25+调节性T细胞的数量均低于正常对照组，但两组CD4+CD25+/CD8+CD25+比值并未出现显著性差异。提示寻常型银屑病患者外周血CD4+CD25+与CD8+CD25+调节性T细胞分别通过不同的机制促进银屑病的发生和发展，二者是否有内在联系和详细机制有待进一步探讨。

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[5]Shen Z, Chen L, Wang G, et a1. Reply: Keratin 17/interferongamma autoimmune loop as a vicious circle driving psoriasis pathogenesis [J]. J Am Acad Dermatol, 2007, 56(1):162-164.

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