经典恒温加速试验法预测芍甘胶囊的有效期

董文燊，瞿发林，徐 波

1解放军第102医院，常州 213003;2南京中医药大学，南京 210029

芍甘胶囊的处方出自《伤寒论》中的芍药甘草汤，由芍药、炙甘草（2︰1）两味药组成[1]；传统中医认为芍药甘草汤具有养血调经、益气复脉之功效。现代药理和临床研究表明，芍药甘草汤具有降低催乳素的作用[2]。近有报道[3]临床用于各种原因引起的高催乳素症的治疗取得满意疗效。为方便患者携带和服用，提高患者服药依从性，故将芍药甘草汤由汤剂制成胶囊剂，便于更好地应用于临床，更好地服务于患者。本文以芍药苷为指标成分，采用经典恒温加速实验法，HPLC法对其进行含量测定，预测制剂的有效期。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Waters系列高效液相色谱仪；Waters CapLC2487双λ吸光度检测器；Empower2数据处理系统 （美国Waters公司）；FA1004型万分之一电子天平 （上海精密科学仪器有限公司天平仪器厂）；AE240s十万分之一电子分析天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）。

1.2 药材与试剂

芍甘胶囊（0.35 g/粒，解放军102医院制剂中心生产，批号为20080130）；芍药苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号为0736-9913）；水为蒸馏水；磷酸为分析纯；乙腈、甲醇为色谱纯。

2 方法与结果

2.1 样品处理

取同一批号（20080130）的芍甘胶囊 20粒，共17份，将各份样品分别置于三角瓶中密封。除0号瓶外，其余16瓶分为4组，每组4瓶，各平放于65、75、85、95℃恒温烘箱中，按各设定时间取出，放入干燥器中冷却至室温，备用。

2.2 芍药苷的含量测定[4～5]

2.2.1 色谱条件SunfireTMC18(150mm×4.6mm，5μm)为色谱柱；乙腈-0.1%磷酸水溶液（14︰86）为流动相；柱温为25℃；流速为 1.0 mL·min-1；检测波长为230 nm；灵敏度为2.0AUFS。

2.2.2 标准曲线的制作精密称取在60℃下减压干燥4 h的芍药苷对照品10.00mg，用甲醇溶解定容于 100mL 量瓶中，分别吸取 2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mL，分别置10mL量瓶中，以甲醇稀释定容至刻度，摇匀，依次分别进样20 μL进行含量测定。以进样量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标，以最小二乘法进行直线回归，得回归方程为：Y=17938X+10728，r=0.9997。 进样量在 0.4 μg～2 μg 范围内，芍药苷峰面积与进样量呈良好的线性关系。

2.2.3 供试品溶液的制备取上述的三角瓶中芍甘胶囊10粒内容物，研细，约取0.2 g，精密称定,置50 mL量瓶中,加入适量甲醇,超声处理10 min，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45 μL微孔滤膜滤过，取续滤液1 mL定容至10 mL，即得供试品溶液。

2.2.4 相对含量计算每个时间点制备2份。精密称定实际重量W（W0表示零时的实际重量）；每份测2次，取其平均值为该份的测量值A（A0为零时的峰面积），积分后取平均值IgC，进行线性回归。由于在恒温加热试验时，样品失重，故每次试验前测定每个样品重量，以便计算失重率f。各时间点的相对含量（CR）公式：CR=（W×A）/〔(W0-W0×f)×A0〕×100%。

2.3 结果

2.3.1 芍药苷含量测定不同温度和不同时间条件下，芍药苷含量的测定结果见表1。

表1 不同温度和不同时间条件下，芍药苷含量的测定

2.3.2 计算K值将时间t与相对浓度的对数IgC进行直线回归，求得各温度下的直线方程，符合方程IgC=－K/2.303t+IgC0，可确定本制剂中芍药苷随温度、时间变化符合一级降解反应。根据直线方程的斜率可求得各试验温度下的反应速度常数K值。结果见表1。

2.3.3 求室温25℃下的有效期从表1的各温度下的K值，用lgK和1/T作图，得直线方程：lgK＝-4657.2/T+10.455，r=0.9956。外推可求得室温25℃（T=273+25）时的 K25℃值为 6.7114×10-6h，进一步求得在室温25℃下有效成分减少10%所需的时间，即有效期。 可按公式求出：t0.9＝0.1054/K25℃＝15704.7 h＝1.79 a（年）。

3 讨 论

由于芍甘胶囊在恒温加速试验时，内容物和胶囊壳中水份都会损失，为提高取样准确性，减少实验误差，以失重率校正取样误差。失重率(f)：

其中W1为试验前平均整粒胶囊平均重量；W2为试验前空胶囊平均重量；W3为加速试验后整粒胶囊平均重量；W4为加速试验后空胶囊平均重量。

芍甘胶囊中主要有效成分为芍药苷和甘草酸铵，预试验中比较芍药苷和甘草酸铵的稳定性，观察到甘草酸铵的降解比芍药苷少，表明甘草酸铵更加稳定，所以选择考察芍药苷的稳定性，来确定芍甘胶囊的有效期。

通过预试验确定芍药苷的试验温度和时间，并将试验温度定位 65℃、75℃、85℃、95℃， 恒温时间65℃时为 48 h，75℃时为 24 h，85℃时为 12 h，95℃时为6 h。试验中观察到，随着温度升高，时间延长，样品颜色加深，尤以95℃时现象最明显。芍甘胶囊内容物经95℃恒温加热后在溶解过程中出现不溶性黑渣，且颜色越深，芍药苷含量越低。经试验，在密闭条件下，芍甘胶囊预测有效期为1.79年。

[1] 王静蓉，马琮瑜，严永清，等.芍药甘草配伍化学变化研究[J]. 时珍国医国药，2000，11(2)：102-4.

[2] 袁海宁，王传跃，冯秀杰，等.芍药甘草汤治疗高催乳素血症对照研究[J].临床精神医学杂志，2005，15(6)：337-8.

[3] 袁海宁，周 方，罗小年.抗精神病药物所致高催乳素血症的治疗[J].临床精神医学杂志，2005，15(4)：245-6.

[4] 瞿发林，董文燊，谈丽娜，等.正交实验法优选芍甘胶囊提取工艺的研究[J]. 中国药师，2008，11（1）：60-2.

[5] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].一部，北京：化学工业出版社，2005：9～68.