酸枣仁总黄酮抗抑郁作用的实验研究*

赵启铎，舒乐新，王 颖，牟佳佳，宋志国，李金梅

（1.天津中医药大学中药学院，天津300193；2.吉林敖东集团大连药业股份有限公司，大连 116043）

酸枣仁总黄酮抗抑郁作用的实验研究*

赵启铎1，舒乐新1，王 颖1，牟佳佳1，宋志国2，李金梅2

（1.天津中医药大学中药学院，天津300193；2.吉林敖东集团大连药业股份有限公司，大连 116043）

[目的]研究酸枣仁总黄酮对行为绝望小鼠抑郁模型的影响。[方法]采用小鼠强迫游泳实验和悬尾实验等抑郁模型，小鼠行为绝望的不动时间作为指标，考察酸枣仁总黄酮抗抑郁活性。[结果]酸枣仁总黄酮低、中、高剂量组均能减少小鼠强迫游泳和悬尾不动时间，与空白组比较差异有统计学意义（P<0.05）；与阳性药组比较差异有统计学意义（P<0.05）。[结论]酸枣仁总黄酮具有显著的抗小鼠实验性抑郁作用。

酸枣仁；总黄酮；抗抑郁；行为绝望

酸枣仁（Semen Ziziphi Spinosas)为鼠李科植物酸枣[ZiziphusjujubaMill.var.Spinosa(Bunge)HUexH.F.Chow]的干燥成熟种子，具有补肝、敛汗、宁心、生津的功能，用于虚烦不眠、体虚多汗、惊悸多梦、津伤口渴等证，《本草纲目》将其列为上品。酸枣仁是一种疗效确切，不良反应小的中药材，临床用于治疗多种类型失眠症和神经衰弱[1]。目前中医治疗抑郁症以疏肝健脾、养心安神复方为主，临床研究表明：抑郁症患者在情绪低落的同时，常表现出心烦意乱，甚至焦虑、躁狂等特征。有80%的患者还可出现严重的失眠，因此采用安神开窍中药治疗实属必要[2]。近年来的研究表明酸枣仁具有抗抑郁的药理活性[3-5]。本研究采用国际通用的行为绝望小鼠抑郁模型进行实验，从行为学角度观察酸枣仁总黄酮的抗抑郁作用。

1 材料与方法

1.1 一般材料

1.1.1 实验动物 雄性昆明种小鼠（20±2）g，SPF级，购自天津市山川红实验动物科技有限公司，合格证号：SCXK（津）2009-0001，在饲养环境下适应1周后使用。

1.1.2 药品及试剂 炒酸枣仁购自天津中新药业集团有限公司，经天津中医药大学药学院中药鉴定教研室张丽娟教授鉴定；盐酸氯米帕明片，北京诺华制药有限公司产品，批号X0026，规格25mg/片，用前用2%吐温-80水溶液配制成1 g/L，备用。

1.1.3 仪器及装置 XZC-4小鼠自主活动测定仪，黑龙江省牡丹江市中华电器厂产品，实验材料悬尾装置自制，木棒上用木板隔离成4个分区，用胶带固定鼠尾。强迫游泳所需的2 000mL烧杯7个。BP211D 1/105分析天平，上海君达仪器厂；秒表，瑞士霍耶尔-奥利达斯厂。

1.2 方法

1.2.1 酸枣仁总黄酮的制备 酸枣仁药材，粉碎过20目筛，4倍量乙醇超声提取3次，每次40min，合并提取液，回收溶剂至浸膏，浸膏分散于水，分别用石油醚、氯仿、正丁醇萃取，取正丁醇萃取部分，溶于水经D101型大孔树脂纯化，15%乙醇、35%乙醇、65%乙醇洗脱，取35%乙醇洗脱液回收，真空干燥，得总黄酮粉末。经含量测定[6]，提取物中总黄酮的含量为60.86%。总黄酮粉末用2%吐温-80溶液分别配制成一定浓度，备用。

1.2.2 动物分组及处理 取小鼠60只，按照随机数字表法随机分为5组，每组12只，分别为空白对照组、盐酸氯米帕明组、酸枣仁总黄酮低、中、高剂量组。盐酸氯米帕明剂量为25mg/kg；酸枣仁总黄酮低、中、高剂量分别为 50、100、200mg/kg；空白对照组灌服同体积的2%吐温-80水溶液，连续灌胃7 d，每天1次。于末次给药后1 h，进行小鼠行为学测试实验。

1.2.3 小鼠自主活动实验 于给药前和末次给药后1 h，分别测小鼠的自主活动。方法采用XZC-4小鼠自主活动测定仪，将小鼠放入测定仪适应5min后开始测定，以10min内小鼠于给药前后的活动次数之差为指标，比较各组小鼠自主活动强度。

1.2.4 小鼠强迫游泳实验 参照文献[7]。将单个小鼠放入水深10 cm烧杯（直径13 cm，高19.5 cm）中，水温（25±2）℃。观察 6min，记录后 4min小鼠游泳的不动时间（指小鼠在水中停止挣扎，或显漂浮状态，仅有微小的肢体运动以保持头部浮在水面）。实验结束将小鼠放在取暖设备下烘干，放回笼内。

1.2.5 小鼠悬尾实验 参照文献[8]。强迫游泳实验小鼠饲养3 d，每天灌胃给药1次，末次给药后1 h，将单个小鼠尾端（在距尾2 cm处）用胶布粘在木棒上部，使其成倒挂状态，头部离台面15 cm，中间以挡板隔离小鼠视线。小鼠为了克服不正常体位而挣扎活动，但活动一段时间出现间断性不动，显示失望状态。观察6min，记录后4min内小鼠不动时间为失望时间。

1.2.6 统计学处理 用SPSS11.5统计软件处理数据，计量资料用均数±标准差（±s）表示，正态分布计量资料的比较采用单因素方差分析，偏态分布计量资料的比较采用秩和检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 酸枣仁总黄酮对小鼠自主活动的影响 结果见表1。由表1可以看出，与空白对照组比较，盐酸氯米帕明组小鼠自主活动次数无显著减少和增加，无统计学意义（P>0.05），酸枣仁总黄酮高、中、低剂量组小鼠自主活动次数明显减少，有统计学意义（P<0.05）。

表1 酸枣仁总黄酮对小鼠自主活动的影响（±s）Tab.1 Effectof total flavonoids from Semen Ziziphi Spinosae on autonom icmovement test（±s）

表1 酸枣仁总黄酮对小鼠自主活动的影响（±s）Tab.1 Effectof total flavonoids from Semen Ziziphi Spinosae on autonom icmovement test（±s）

注：与空白对照组比较，*P<0.05。

组别 n 剂量（mg/kg） 自主活动（次数）空白对照组 12 — 24±71*盐酸氯米帕明组 12 25 34±69*总黄酮低剂量组 12 50 94±71*总黄酮中剂量组 12 100 121±90*总黄酮高剂量组 12 200 124±99*

2.2 酸枣仁总黄酮对小鼠强迫游泳不动时间的影响 结果见表2。由表2可以看出，与空白对照组比较，盐酸氯米帕明组小鼠后4min的不动时间缩短，有统计学意义（P<0.05），酸枣仁总黄酮高、中、低剂量组小鼠后4min的不动时间明显缩短，有统计学意义（P<0.05，P<0.01）；与盐酸氯米帕明组比较，酸枣仁总黄酮高、中、低剂量组对缩短小鼠后4min的不动时间，有统计学意义（P<0.05，P<0.01）；从小鼠不动减少时间趋势上看，和给药剂量呈一定相关性。

表2 酸枣仁总黄酮对小鼠强迫游泳实验不动时间的影响（±s）Tab.2 Effectof total flavonoids from Semen Ziziphi Spinosae on the forced sw imm ing test（±s）

表2 酸枣仁总黄酮对小鼠强迫游泳实验不动时间的影响（±s）Tab.2 Effectof total flavonoids from Semen Ziziphi Spinosae on the forced sw imm ing test（±s）

注：与空白对照组比较，*P<0.05，**P<0.01；与阳性药组比较，ΔP<0.05，ΔΔP<0.01。

不动减少时间（%）空白对照组 12 — 152.10±29.31 —盐酸氯米帕明组 12 25 114.00±19.00* 25.05总黄酮低剂量组 12 50 75.00±30.89**Δ 50.69总黄酮中剂量组 12 100 68.90±13.88**ΔΔ 54.70总黄酮高剂量组 12 200 65.30±23.88**ΔΔ 57.07组别 n 剂量（mg/kg）不动时间（s）

2.3 酸枣仁总黄酮对小鼠悬尾不动时间的影响结果见表3。由表3可以看出，与空白对照组比较，盐酸氯米帕明组小鼠后4min的不动时间缩短，有统计学意义（P<0.05），酸枣仁总黄酮高、中、低剂量组小鼠后4min的不动时间明显缩短，有统计学意义（P<0.05，P<0.01）；与盐酸氯米帕明组比较，酸枣仁总黄酮高、中、低剂量组对缩短小鼠后4min的不动时间无显著差异；从小鼠不动减少时间趋势上看，和给药剂量呈一定相关性。

表3 酸枣仁总黄酮对小鼠悬尾实验不动时间的影响（±s）Tab.3 Effectof total flavonoids from Semen Ziziphi Spinosae on the tailsuspension test（±s）

表3 酸枣仁总黄酮对小鼠悬尾实验不动时间的影响（±s）Tab.3 Effectof total flavonoids from Semen Ziziphi Spinosae on the tailsuspension test（±s）

注：与空白对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。

组别 n 剂量（mg/kg）不动时间（s）不动减少时间（%）空白对照组 12 — 115.60±26.72 —盐酸氯米帕明组 12 25 70.00±26.49* 39.45总黄酮低剂量组 12 50 69.20±33.41* 40.14总黄酮中剂量组 12 100 66.50±25.44* 42.47总黄酮高剂量组 12 200 64.40±24.02** 44.29

3 讨论

酸枣仁盛产于中国北方地区，中医常作为养心安神药用于镇静催眠，临床上则多以复方形式用于虚烦不眠，惊悸多梦等症。目前中医治疗抑郁症以疏肝健脾、养心安神复方为主，临床研究表明：抑郁症患者在情绪低落的同时，常表现出心烦意乱，甚至焦虑、躁狂等特征，这与传统中药酸枣仁的功效主治相符。通过对抗抑郁方剂进行统计分析，结果显示42首方剂中安神药出现频率最高。而单味药中，使用最多的是酸枣仁、远志[9]。已有研究表明，酸枣仁总提取物具有显著的抗抑郁作用，但有关酸枣仁抗抑郁有效部位的研究报道仅有关于总生物碱的研究[3-5]。酸枣仁中的脂肪油类、黄酮类、皂苷类，是酸枣仁药材含有的主要成分，有必要对其抗抑郁作用进行研究。

本实验采用小鼠强迫游泳和小鼠悬尾实验、研究酸枣仁总黄酮的抗抑郁作用。小鼠强迫游泳实验（FST）和悬尾实验（TST）是用于筛选和观察抗抑郁药物常用的实验方法[10-11]。动物在强迫这一应激条件下，经挣扎后出现绝望表现即不动状态，而抗抑郁剂可以减少动物的不动时间，提高对应激的耐受性。本实验研究结表明：酸枣仁总黄酮能明显减少小鼠自主活动次数，具有镇静作用；酸枣仁总黄酮能明显缩短强迫游泳小鼠和悬尾绝望小鼠后4min内的不动时间，从小鼠不动减少时间趋势上看，和给药剂量呈一定相关性。说明酸枣仁总黄酮能够增强实验动物的应激耐受性，减少绝望动物的不动时间，具有明显的抗小鼠实验性抑郁作用。关于酸枣仁总黄酮中具体发挥作用成分及作用机制有待进一步深入研究[12-13]。

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Study on the antidepressanteffectof total flavonoids from Semen ZiziphiSpinosae

ZHAOQi-duo,SHU Le-xin,WANGYing,etal
（Schoolof TraditionalChineseMateriaMedica,Tianjin University of TraditionalChineseMedicine,Tianjin 300193,China）

[Objective]To observe the antidepressanteffectof total flavonoids from Semen ZiziphiSpinosae inmice.[Methods]To investigate the antidepressantactivity of total Flavonoids from Semen ZiziphiSpinosae by the forced swimming testand the tailsuspension test,with behavioraldespairmice in the immobility time asan indicator.[Results]Differentdose groupsof total flavonoids from Semen Ziziphi Spinosae could significantly reduce the immobility time ofmice during the forced swimming testand the tail Suspension test,compared with thatof the controlgroup(P<0.05);comparedwith thatof the positivegroup(P<0.05).[Conclusion]The total flavonoids from Semen ZiziphiSpinosae possesshad significantantidepressanteffects.

Semen ZiziphiSpinosae;total flavonoids;antidepressanteffect;behavioraldespair

R285.5

A

1672-1519(2011)04-0335-03

天津市高等学校发展项目基金（20070305）。

赵启铎（1976-），男，硕士，讲师，主要研究方向为中药化学成分及活性研究。

2011-03-30）