益气活血解毒法对溃疡性结肠炎血浆血小板活化的临床及实验研究*

安贺军，王新月，于 玫，沈 静

（1.解放军第306医院中医科，北京 100101；2.北京中医药大学东直门医院消化科，北京 100700；3.北京中医药大学，北京 100029）

益气活血解毒法对溃疡性结肠炎血浆血小板活化的临床及实验研究*

安贺军1，王新月2，于 玫3，沈 静3

（1.解放军第306医院中医科，北京 100101；2.北京中医药大学东直门医院消化科，北京 100700；3.北京中医药大学，北京 100029）

[目的]探讨益气活血解毒法对溃疡性结肠炎（UC）血浆血小板活化的影响。[方法]分临床研究及动物实验两部分；临床研究以90例溃疡性结肠炎复发患者按随机数字表法随机分为2组，中药治疗组45例，西药对照组45例。治疗3个月后对完全缓解及有效病例（其中治疗组39例，对照组32例）进行为期6个月的随访。治疗组给予益气活血解毒立法的中药汤剂，对照组给予柳氮磺胺吡啶治疗，并各与20例作正常对照。动物实验用三硝基苯磺酸（TNBS）复制实验性大鼠UC模型，将其随机分为模型组、西药对照组、中药治疗组，并设正常对照组。进行反映血小板活化程度的特异性标志物P-选择素的检测。[结果]临床研究中，治疗前UC患者血浆P-选择素水平明显高于正常健康人（P＜0.01）；治疗组治疗后及随访时含量明显低于西药对照组（P＜0.05 或 P＜0.01）。动物实验中，在治疗 10 d 时，两治疗组皆可降低血浆P-选择素水平，西药组水平明显低于中药组（P＜0.05）；治疗30 d时中药组与西药组相比无显著差异（P＞0.05）；停药 10 d 时，中药组明显低于西药组（P＜0.05）。[结论]以益气活血解毒立法的中药溃结复发方与西药比较，可有效降低血浆P-选择素水平，从而阻抑血小板活化，可能是抗溃结复发作用机制之一。

结肠炎；溃疡性；抗复发；益气活血解毒；P-选择素；血小板活化

溃疡性结肠炎（UC）是一种以慢性炎症和溃疡形成为主要病理特点的消化道疾病。由于其患病率逐渐增加、高复发率和结肠直肠癌发生关系密切而成为目前研究热点；本研究以导师在临床长期使用行之有效的益气活血解毒立法的溃结复发方为干预手段，探讨其对血浆血小板活化的影响，报告如下。

1 临床研究

1.1 资料与方法

1.1.1 临床资料 采用西医诊断标准[1]及参照1994年颁布的《慢性非特异性溃疡性结肠炎中西医结合诊断、辨证和疗效标准（试行方案）》[2]自拟的中医证候标准，于2006年3月—2007年1月选择临床类型属于慢性复发型活动期和慢性持续型溃疡性结肠炎患者共90例，病例来自于北京中医药大学东直门医院、解放军第301医院、306医院门诊和病房；按随机数字表法随机分为中药治疗组45例，西药对照组45例。治疗过程中脱落5例，1个疗程后对完全缓解及有效病例（其中治疗组39例，对照组32例，最后有效病例71例）进行为期6个月的随访。排除有严重并发症以及患有严重心、脑、肝、肾等疾病者。

1.1.2 治疗方法 治疗组给予益气活血解毒立法的溃结复发方中药汤剂，基本方如下：生黄芪30 g，炒白术10 g，当归10 g，炒五灵脂10 g，生蒲黄（包）10 g，赤芍、白芍各 10 g，焦槟榔 10 g，煨木香 10 g，黄连10 g，黄柏10 g，连翘20 g。临床并随证加减。用法：每日1剂，水煎，取300mL，分早晚2次各150mL服用。对照组柳氮磺胺吡啶每日4～6 g，分4次口服。观察疗程为3个月，观察完毕后，减少药量巩固治疗，疗程结束后随访6个月，观察患者的复发情况。

1.1.3 血浆标本 治疗前、治疗3个月后及6个月随访时，抽取患者静脉血各1次，清晨空腹静脉采血，2%乙二胺四乙酸二钠盐及0.7%氯化钠（2%EDTA-Na2-0.7%NaCl）抗凝，立即分离血浆，放-70 ℃冰箱保存待检。其中同时检测正常人血浆20例作为血浆P-选择素正常对照。血浆P-选择素测定采用酶联免疫吸附（ELISA）法，试剂盒由美国RB公司进口分装，购自北京百事创新科技有限公司；严格按照试剂盒说明操作。

1.1.4 统计方法 采用统计软件SPSS 13.0进行统计处理，计量资料用均数±标准差（±s）表示，正态分布计量资料两组间的比较采用t检验，多组间的比较采用单因素方差分析，偏态分布计量资料的比较采用秩和检验，P<0.05为差异有统计学意义。

1.2 结果 治疗前UC组（71例）与正常组（20例）、治疗后复发组（16例）、未复发组（55例）血浆P-选择素含量比较分别为（46.43±12.78）、（23.06±12.55）、（35.52±6.77）、（25.42±8.24）μg/L。经 t检验，治疗前，UC组血浆P-选择素含量明显高于正常健康人（P＜0.01）。复发组血浆P-选择素含量明显高于未复发组（P＜0.01）。可以认为病情复发与血浆P-选择素含量变化有关。

治疗后及随访时两组血浆P-选择素含量的变化比较 见表1。

表1 治疗后及随访时血浆P-选择素含量的变化比较（±s）Tab.1 Com parison of p lasma P-selectin expression after treatmentand during follow-up visi（t±s） μg/L

表1 治疗后及随访时血浆P-选择素含量的变化比较（±s）Tab.1 Com parison of p lasma P-selectin expression after treatmentand during follow-up visi（t±s） μg/L

注：与西药对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

组别 例数 治疗后 随访时中药治疗组 39 27.02±3.48* 29.09± 8.32**西药对照组 32 30.64±4.46* 36.58±10.42**

治疗组治疗后及随访时血浆P-选择素含量明显低于西药对照组（P＜0.05或P＜0.01）。西药对照组随访时与治疗后比较，差异有统计学意义（P＜0.01）。

2 动物实验

2.1 材料与方法

2.1.1 实验动物 清洁级健康雄性SD大鼠，体质量（160～200）g，由中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK（京）2006-0006。

2.1.2 主要试剂与仪器 2，4，6—三硝基苯磺酸（TNBS），为 Sigma公司产品，批号：074K007；水合氯醛购自恒业中远化工有限公司；ELISA法试剂盒由美国RB公司进口分装，购自北京百事创新科技有限公司；离心机：型号：LDZ5－2，北京医用离心机厂生产。

2.1.3 药物 溃结复发方主要药物组成同上，购自北京中医药大学东直门医院，由北京中医药大学东直门医院制剂室煎制，之后浓煎为生药量5 g/mL灌胃用，每只每日1mL；灌胃剂量为60 kg体质量成年人药量的8倍。奥沙拉秦钠胶囊剂（畅美）由天津力生制药有限公司生产，每粒0.25 g，蒸馏水配成混悬液，配成0.67 g/L溶液，每只每日1mL；灌胃剂量为60 kg体质量成年人药量的8倍。

2.1.4 动物模型制备[3-4]将大鼠正常饲养1周后，禁食24 h（不禁水），称体质量，100mg/L水合氯醛（3.8mL/kg）腹腔麻醉，将一直径2mm、长约12 cm的橡胶管由大鼠肛门轻缓插入，约深8～10 cm，然后以0.85mL TNBS/乙醇液（120mg/kg TNBS+体积分数50%乙醇0.25mL），约5秒灌注完毕；将造模鼠倒置8min后（尽量减少造模试剂流出）放回笼内。

2.1.5 动物分组及给药 将120只大鼠按照随机数字表法随机分为4组，其中模型组、西药组、中药组每组各30只，均予造模；正常组30只，不予造模，但与其余3组同步禁食、麻醉，同步饲养观察。于造模后第2天起：正常组、模型组以蒸馏水灌胃，每次每只1 mL；西药对照组以畅美混悬液按0.266 g/（kg·d）剂量给药；中药治疗组以溃结复发方按20 g/（kg·d）剂量给药，均每天1次，共40 d。统计方法同上。

2.1.6 取材 分别于给药后10 d、30 d和停药后10 d，各组随机取10只大鼠，以100mg/L水合氯醛（3.8mL/kg）腹腔麻醉，腹主动脉取血，2%EDTANa2-0.7%NaCl抗凝，立即分离血浆，放-70℃冰箱保存待检。血浆P-选择素含量测定采用ELISA法，按试剂盒说明书操作。

2.2 各组血浆P-选择素含量测定结果 见表2。

表2 各组UC模型大鼠血浆P-选择素含量的比较（±s）Tab.2 Com parison of plasma P-selectin expression of rats with ulcerative colitis in differentgroups（±s）ng/L

表2 各组UC模型大鼠血浆P-选择素含量的比较（±s）Tab.2 Com parison of plasma P-selectin expression of rats with ulcerative colitis in differentgroups（±s）ng/L

注：与正常组比较，*P<0.05，**P<0.01；与模型组比较，▲P<0.05，▲▲P<0.01；与西药组比较，#P<0.05。

组别 n 治疗10 d 治疗30 d 停药后10 d正常组 30 0.281 0±0.099 7 0.273 4±0.099 7 0.261 3±0.099 7模型组 30 1.142 2±0.410 8**0.485 8±0.279 6* 0.430 8±0.246 7*中药组 30 0.382 3±0.174 9▲▲ 0.258 2±0.054 9▲ 0.198 2±0.022 5#西药组 30 0.238 0±0.089 4▲▲ 0.317 9±0.167 2▲ 0.379 8±0.056 8

结果显示：模型组造模10 d时，P-选择素含量明显高于正常组（P<0.01）。中药组治疗10 d明显低于模型组（P＜0.01）；停药 10 d 时，低于西药组（P<0.05）。

3 讨论

溃疡性结肠炎慢性复发型、慢性持续型与中医之“休息痢”、“久痢”相类似；本病多是在脾胃虚弱基础上，在感受外邪、饮食不节或忧思恼怒等诸多诱发因素作用下，脾虚失于健运，运化无权，水谷不归正化，肠道传导失司，湿热瘀毒等病邪壅滞肠中，脂膜血络受伤，腐败化为脓血；湿热瘀毒等病邪未能及时清除，肠道正常功能不能恢复，以使病情反复发作，缠绵难愈。

笔者检测了临床慢性复发型活动期、慢性持续型UC患者经治疗完全缓解及有效病例71例的血浆P-选择素水平，结果显示活动期UC患者血浆P-选择素水平明显高于正常组，提示血小板活化直接参与了UC的病理过程。复发组与未复发组血浆P-选择素水平比较，结果显示复发组显著高于未复发组，提示血小板活化可能是UC复发的病理机制之一。为了探讨益气活血解毒法是否对血小板活化具有阻抑作用，检测了治疗后及随访时血浆P-选择素水平，结果显示治疗后、随访时中药治疗组明显低于西药对照组。

本动物实验在造模第10天时模型组血浆P-选择素水平均显著高于正常组，之后逐渐下降，造模第40天时仍明显高于正常组，提示造模10 d时是模型炎症的急性期，血小板和内皮细胞活化，介导炎性细胞黏附、聚集，参与急性炎症反应；随着病程进入中期（造模30 d）和缓解期（造模第40天），模型组血浆P-选择素水平逐渐下降但并未恢复正常，说明在中期和缓解期仍存在血小板活化。以益气活血解毒立法的中药溃结复发方与西药比较，可有效降低血浆P-选择素水平，从而抑制血小板及内皮细胞活化。

本研究以益气活血解毒立法为主组成的中药溃结复发方，补脾益气，祛瘀行滞，清热燥湿，能行肠胃滞气，清化瘀毒，恢复肠道正常的通降功能，从而减少本病的复发。

[1]中华医学会消化病学分会.对炎症性肠病诊断治疗规范的建议[J].中华消化杂志，2001，21（4）：236－239.

[2]郑家驹.炎症性肠病基础与临床[M].北京：科学出版社，2000：25.

[3]张 涛,谢建群.大鼠溃疡性结肠炎模型的实验研究[J].中国中西医结合消化杂志，2006，14（4）：240.

[4]宫健伟,苑述刚,阮时宝.对免疫方法制作溃疡性结肠炎动物模型的探讨[J].中国实验方剂学杂志，2005，11（2）：70.

Clinicalstudy and animalexperimenton benefiting vitalQi,activating blood flow and detoxication on plasma plateletactivation during ulcerative colitis

ANHe-jun1,WANGXin-yue2,YUMei3,etal
（1.Departmentof TCM,The306Hospitalof the PLA,Beijing100101,China;2.DepartmentofDigestion,Dongzhimen Hospitalof Beijing University of TCM,Beijing 100700,China;3.Beijing University of TCM,Beijing 100029,China）

[Objective]ToinvestigatetheinfluenceofbenefitingvitalQI,activatingblood flowand detoxicationonplasmaplateletactivation during ulcerative colitis(UC).[Methods]The study included clinical study and animalexperiment.In clinical study,90 caseswith recurrentUCwere randomlydivided into the treatmentgroup(n=45)and thecontrolgroup(n=45)according to the random table.Threemonths after treatment,the casesofcomplete remission and effective caseswere followed-up for6months(39 cases in treatmentgroup,32 in control group).The patients of treatmentgroup

medicinal decoction of TCM consisting of herbswith benefiting vital Qi,activating blood flow and detoxication;the controlgroup was treated with salazosulfapyridine.In animalexperiment,UCwas induced with TNBS in rats and then random ly divided intomodel control group,westernmedicine group,the traditional Chinesemedicine group,and normal control group.P-selectin,a specificmarker reflecting the activation level of plateletwas determined.[Results]In clinical study,before treatment the plasma P-selectin level in patientswith UCwas significantly higher than normolhealthy persons(P<0.01);the levelof P-selectin in recurrentgroup wassignificantly higher than those patientswithout recurrence(P<0.01);After treatmentand during the follow-up period the levelofplasma P-selectin in treatmentgroup wasmarkedly lower than those in controlgroup with westernmedicine(P<0.05 or P<0.01).In animalexperiment,plasma P-selectin levelofwesternmedicine group weremarkedly lower than thatof the traditional Chinesemedicinegroup 10 daysafter treatment(P<0.05).30 daysafter treatment,therewasnosignificantdifferencebetween TCM group and westernmedicine group(P>0.05）.Afterwithdrawing medicine for10 days the P-selectin level in traditional Chinesemedicine group was markedly lower than thatinwesternmedicine group(P<0.05).[Conclusion]The study shows that the Kuijiefufafang(prescription preventing recurrence of UC,PPRUC)consisting ofmedicinewith benefiting vital Qi,activating blood flow and detoxication can effectively decrease the P-selectin level compared with westernmedicine.Accordingly the activation of platelet is inhibited.Thatprobably is one of the therapeuticmechanism of PPRUC.

ulcerative colitis;against-relapse;benefiting vitalQi,activatingblood flow and detoxication;P-selectin;plateletactivation

R574.1

A

1672-1519(2011)04-0281-03

国家自然科学基金资助项目（NO.30572390）。

安贺军（1969-），女，博士，主治医师，中医内科学专业。

王新月。

2011-02-26）