奥曲肽对兔小梁切除术后瘢痕增殖的影响

刘丽霞，卫玉彩*，杨 涛

（1.河北医科大学第二医院眼科，河北石家庄 050000；2.河北省玉田县医院眼科，河北玉田 064100）

奥曲肽对兔小梁切除术后瘢痕增殖的影响

刘丽霞1，卫玉彩1*，杨 涛2

（1.河北医科大学第二医院眼科，河北石家庄 050000；2.河北省玉田县医院眼科，河北玉田 064100）

目的观察兔小梁切除术中巩膜瓣下应用奥曲肽（octreotide，OCT）和（或）术前3d点眼对术后滤过道瘢痕增殖的影响，并与丝裂霉素C（mitomycine-C，MMC）作对比。比较2种用药方式作为青光眼滤过抗瘢痕增殖药物的安全性及有效性。方法新西兰大白兔40只随机分成A、B、C、D、E 5组。各组均行双眼标准小梁切除术。A组作为空白对照组，仅行标准小梁切除术。B组作为标准对照组，术中切小梁前用蘸有0.2g/LMMC的棉片巩膜瓣下作用5min。C组，术中切小梁前用蘸有0.1g/LOCT的棉片巩膜瓣下作用5m in。D组，在行C组处理的同时联合术前3d 0.1g/LOCT点眼，4次/d。E组，单纯术前3d 0.1g/LOCT点眼，4次/d。术后3、7、14、28d时分别观察眼前节及眼底情况，并每组随机处死2只兔，取手术区全层眼球壁做组织病理学观察。结果与A组相比，C、D、E各组均未出现对角膜、结膜以及对视神经和视网膜功能的明显不良反应。HE染色，术后除第3天，各组增殖均不明显外，其余各时间点B、C、D、E 4组术后瘢痕的增殖均较A组减轻。滤过泡和滤过道也更明显。滤过道内增殖程度术后7d时，A＞E＞C＞D＞B组。术后14d时，A＞B＞E＞C＞D组。术后28d时，A＞E＞C=B＞D组。Masson三色染色，各组的增殖程度与HE染色结果一致。PCNA染色，细胞的标记指数，术后7、14d时，C、D、E 3组均低于A组，差异有统计学意义（P＜0.05），术后14d时C、D、E 3组均低于B组，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论OCT巩膜瓣下应用或术前3d局部点眼，能有效抑制手术区域瘢痕的增殖。OCT巩膜瓣下应用抗瘢痕增殖，远期效果优于术前3d局部用药点眼。巩膜瓣下应用联合术前3d局部点眼抗增殖作用明显增强。浓度为0.1g/LOCT与浓度为0.2g/L MMC抗增殖效果相近。OCT局部点眼及巩膜瓣下应用无明显不良作用。

奥曲肽；小梁切除术；瘢痕

小梁切除术是目前最常见的青光眼手术方式之一，术后滤过泡的瘢痕化滤过道闭锁是手术失败的最主要原因。丝裂霉素C（mitomycine-C，MMC）可以选择性的干扰DNA的复制，抑制有丝分裂和蛋白的合成，因MMC可明显提高难治性青光眼小梁切除术的成功率，目前将MMC作为金标准。但是MMC在发挥抗瘢痕作用的同时也产生诸多不良作用。本实验通过在兔小梁切除中局部应用奥曲肽（octreotide，OCT），以及联合或单纯术前点眼并与MMC做对比，从而探讨OCT在小梁切除术中的安全性和有效性。

1 材料与方法

1.1 OCT注射液：由北京四环制药有限公司提供，规格0.1g/L。

1.2 实验动物与分组：3.5～4.0个月龄的健康新西兰大白兔（购自河北省鹿泉市获鹿镇六街养殖场）40只，体质量约2.5kg，雌雄不拘，检查除外眼部疾病，测定术前各指标后，随机分为A、B、C、D、E 5组，均行双眼标准小梁切除术。

A组为空白对照组，单纯行小梁切除术；B组为标准对照组，术中小梁组织切除前先用蘸有0.2g/L MMC的棉片放置于巩膜瓣及结膜瓣下5min，然后用生理盐水100mL充分冲洗；C组术中小梁组织切除前先用蘸有0.1g/L OCT的棉片放置于巩膜瓣及结膜瓣下5min，然后用生理盐水100mL充分冲洗；D组术前3d用OCT点眼，0.025mL，4次/d，并联合应用C组的给药方式；E组单纯术前3d用OCT点眼，0.025mL，4次/d。

1.3 手术方法及术后处理：耳缘静脉缓慢注射3%戊巴比妥钠1mL/kg麻醉。爱尔卡因滴眼表面麻醉，15%磺胺醋酰钠反复冲洗结膜囊，消毒铺巾，开睑器开睑，作以穹窿部为基底的结膜瓣，瓣高约6mm。作以角膜缘为基底4mm×4mm的约2/3巩膜厚度的巩膜瓣，前端分离至透明角膜内1mm。在巩膜瓣下切除约1.5mm×3.0mm角巩膜缘组织，作虹膜根部切除。用9-0尼龙线缝合巩膜瓣2针，球结膜切口两端各缝合1针。

术毕各组均用红霉素眼膏涂双眼。用15%磺胺醋酰钠滴眼液点眼4次/d，连续点3d。

1.4 观察指标

1.4.1 裂隙灯观察：各组分别于术后3、7、14、28d行裂隙灯检查角膜有无混浊、水肿、后弹力层皱褶等。前房情况，观察前房深浅及有无前房出血、渗出等炎症反应。观察有无晶状体混浊发生。

1.4.2 眼底镜检查：观察有无视网膜出血，渗出，有无视乳头水肿及脉络膜脱离等。

1.4.3 组织病理学检查：经耳缘静脉行空气栓塞随机处死兔2只。摘取眼球，取手术区域全层眼球壁，置于4%多聚甲醛固定液中固定，按常规进行脱水，透明，石蜡包埋，切片。做HE染色观察滤过道内、滤过泡下、巩膜表面组织的炎性反应、增殖情况，以及滤过道开放情况。做Masson三色染色，观察滤过道新生胶原纤维的增殖情况。免疫组织化学方法显示细胞增殖相关的增殖核抗原（pro1iferative ce11 nuc1eus antigen，PCNA），PCNA阳性者细胞核呈棕黄色，计算滤过道内标记细胞与细胞总数的百分比，即标记指数，从而评价滤过道内细胞的增殖程度。

1.5 统计学方法：应用SPSS13.0软件进行分析，计数资料以百分率表示，比较采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 裂隙灯检查：术后3～7d时，各组手术区结膜均轻度局限充血，14d后充血症状均消失。各组在各个时间段均未出现切口感染，亦无结膜切口渗漏。角膜荧光素染色，术后各组角膜都有不均匀着色点出现，与A组相比无显著加重，考虑与兔子瞬目少有关。各组在各个时间段均未出现角膜水肿、混浊、浅前房，未见浮游物、出血及渗出，无晶状体混浊出现。

2.2 眼底镜检查：各个时间段均未见出血和渗出及视网膜或脉络膜脱离。

2.3 组织病理学观察（HE染色，图1～6）：术后除第3天各组增殖均不明显外，其余各时间点B、C、D、E 4组术后滤过道内瘢痕的增殖均较A组减轻。滤过泡和滤过道也更明显。

术后7d时A组滤过泡腔隙消失，巩膜表面及滤过道区域均可见大量增生的纤维组织，其内可见中量成纤维细胞和炎性细胞及大量成纤维细胞和少量炎性细胞。其余各组滤过泡腔隙存在，滤过道开放，巩膜表面及滤过道区域B组无明显细胞增生。C组内可见大量成纤维细胞和少量炎性细胞。滤过道内可见少量炎性细胞和成纤维细胞。D组巩膜表面可见少量增生的纤维组织，内含中量炎性细胞和成纤维细胞，滤过道区域可见中量增生的纤维组织，内可见中量成纤维细胞和少量炎性细胞。E组结膜下可见大量增生的纤维组织，内含中量炎性细胞和中量成纤维细胞，巩膜表面增殖较少。滤过道区域可见大量增生的纤维组织，内可见中量成纤维细胞和少量炎性细胞。滤过道内增殖程度，A＞E＞C＞D＞B组。

术后14d时各组增生的纤维组织变得较致密，A组滤过泡腔隙部分闭锁，巩膜表面可见中量增生的纤维组织，内有大量成纤维细胞和中量炎性细胞。滤过道接近愈合，纤维组织大部分转化为胶原组织。B组滤过泡腔隙存在，结膜下与巩膜之间可见一增生的纤维组织窄带，其内可见中量成纤维细胞和炎性细胞。巩膜表面无增生的纤维组织。滤过道残留阶段性腔隙，其余被增生的纤维组织代替，其内可见大量成纤维细胞和少量炎性细胞。C组滤过泡腔隙存在，结膜下与巩膜之间可见一增生的纤维组织带，比B组略窄，其内可见大量成纤维细胞和少量炎性细胞。巩膜表面无增生的纤维组织。可见滤过道的残留窄腔，其余少量增生的纤维组织被胶原组织替代，其内有中量成纤维细胞。D组滤过泡腔隙存在，巩膜表面可见少量增生的纤维组织，内含少量炎性细胞和成纤维细胞。可见滤过道阶段性被增生纤维组织代替，其内被少量炎性细胞和成纤维细胞填满。E组滤过泡腔隙存在，巩膜表面可见一增生的纤维组织窄带，比B组窄，但比C组略宽，其内可见大量成纤维细胞和炎性细胞。可见滤过道中心留有一个窄腔，周围大部分被增生的纤维组织代替，内可见少量成纤维细胞和炎性细胞。滤过道内增殖程度，A＞B＞E＞C＞D组。

术后28d时A组滤过泡及滤过道均已闭锁。其余各组滤过泡腔隙存在，滤过道残留多个小腔隙。滤过道内增殖程度，A＞E＞C=B＞D组。

2.4 Masson三色染色（图7，8）：术后3d时各组胶原纤维增生均不明显。7d时除B组外各组胶原纤维增生均较明显，均较为纤细、疏松。成纤维细胞较多，按增生多少依次是A、E、D、C组。14d时B、E组有中量的胶原纤维生成，其余各组滤过道区域均为粗大的胶原纤维，与滤过道周围原有胶原纤维融合。28d时各组滤过道区域均为粗大的胶原纤维，与滤过道周围原有胶原纤维融合。各组滤过道内增殖程度与HE染色结果一致。

2.5 PCNA染色（图9，10）：术后各个时间点滤过道内细胞的标记指数见表1，因术后3d时各组滤过道内增殖均不明显，未予统计。各组总体上在术后7d和14d时差异有统计学意义（P＜0.05），术后7d时A组高于B、C、D、E 4组，差异有统计学意义（P＜0.05），B、C、D、E 4组之间差异无统计学意义（P＞0.05）。术后14d时，A、B 2组高于C、D、E 3组，差异有统计学意义（P＜0.05），A、B 2组之间以及C、D、E 3组之间差异无统计学意义（P＞0.05）。术后28d时，A、B、C、D、E 5组之间差异无统计学意义（P＞0.05）。

表1 术后各个时间点细胞的标记指数Tab le1 The cell label index in all the post operative tim e points（%）

术后观察各组兔子行双眼手术未对其进食及二便造成影响。

3 讨 论

OCT是一种人工合成的长效生长抑素类似物，可与广泛存在于人体的生长抑素受体结合产生生物学效应，对人类激素分泌的抑制强度是人类天然的生长抑素的1.3～45倍，研究表明［1］在接受生长激素受体拮抗剂培维索孟治疗的肢端肥大症患者联合OCT治疗能明显降低血浆中生长激素的水平。OCT对其他肿瘤［2-3］的治疗研究也不断进行，OCT能明显减轻“淋巴水肿-双行睫综合征”患儿水肿症状，且无明显不良作用。近些年OCT的抗增殖作用研究逐步扩展到眼科领域，如治疗糖尿病性视网膜病变、增殖性和非增殖性视网膜病变、Graves'眼病［4］、角膜新生血管、视网膜新生血管［5］等。国外已有实验证实术后OCT 10μg皮下注射或局部点眼，3次/ d，共14d，能减少手术区和结膜下成纤维细胞和巨噬细胞的数目。

组织病理学观察，HE染色显示，术后各阶段B、C、D、E滤过道均较A组明显，滤过道内组织细胞的增殖程度亦较A组减轻。B组术后14d、28d增殖程度与C组相近，Masson染色的结果与HE染色一致。PCNA染色显示C、D、E 3组的细胞标记指数在术后7、14d均小于A组，术后7d时与B组差异无统计学意义，术后14d时小于B组，差异有统计学意义（P＜0.05）。术后28d各组之间差异无统计学意义。说明OCT无论是术中巩膜瓣下应用还是术前3d点眼对滤过道瘢痕的增殖均有抑制作用。OCT联合应用比单纯术中应用在术后各时间点均显示出优势。

A组HE染色术后7d时出现明显增殖术后14d时滤过道闭锁，术后28d时滤过泡闭锁。PCNA染色与增殖相对应术后7d时细胞标记指数最高，术后14d时开始下降，到术后28d时最低。B组术后增殖较少，在术后14d和28d时出现明显增殖，由此推断MMC抗增殖作用持续时间大约为2周。C、D、E 3组PCNA染色在术后14d细胞标记指数小于B组，差异有统计学意义，说明OCT的抑制增殖作用持续时间较MMC长。A、B 2组差异无统计学意义，考虑与A组因滤过道愈合细胞增殖出现接触性抑制，而B组MMC作用开始减弱有关。

Akyo1等［6］用蘸有0.4g/LMMC和0.1g/LOCT等不同药液的海绵放于兔眼巩膜瓣下作用2min和5min，术后第14d在手术部位取标本做组织病理学检查，结果OCT组仅有轻度的非色素上皮细胞内空泡变性和色素上皮细胞的色素脱失，而MMC组非常明显。有报道［7］OCT治疗13例色素膜炎性黄斑水肿20mg臀部肌内注射，1次/月，平均随访12.4个月，9眼中有7眼黄斑水肿明显改善或者痊愈，所有眼的视力得到改善，无有害事件发生，不良反应是胃肠道不适和胆结石。本实验中裂隙灯和眼底镜检查，与A组相比C、D、E各组术后各个时间段均未出现对角膜、结膜以及视神经和视网膜功能的明显不良反应。

由此可见OCT巩膜瓣下应用或术前3d局部点眼，均能有效抑制手术区域瘢痕的增殖。前者抗瘢痕增殖远期效果优于后者，并且联合应用抗瘢痕增殖效果优于二者单独用药。浓度为0.1g/L的OCT与浓度为0.2g/L的MMC抗增殖效果相近。OCT局部点眼及巩膜瓣下应用不良反应轻微。可见OCT作为滤过手术的一种抗增殖药物，安全有效。至于当OCT浓度加倍或延长点眼时间时作用效果是否加强，以及不良反应是否出现都还有待于进一步研究。（本文图见封三）

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［2］CEROVAC V，MONTESERIN-GARCIA J，RUBINFELD H，et a1.The somatostatin ana1ogue octreotide confers sensitivity to rapamycin treatment on pituitary tumor ce11s［J］.Cancer Res，2010，70（2）：666-674.

［3］JOHNSON DR，KIMMELDW，BURCH PA，eta1.Phase IIstudy of subcutaneous octreotide in adu1ts with recurrent or progressive meningioma and meningea1 hemangiopericytoma［J］.Neuro Onco1ogy，2011，13（5）：530-535.

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（本文编辑：赵丽洁）

EFFECTS OF OCTREOTIDE ON THE SCARRING AFTER TRABECULECTOMY IN RABBITS

LIU Lixia1，WEIYucai1*，YANG Tao2
（1.Departmentof Ophthalmology，the Second Hospital of HebeiMedicial University，Shijiazhuang 050000，China；2.Department of Ophthalmology，the Hospital of Yutian County，Hebei Province，Yutian 064100，China）

ObjectiveTo determine the effectand safety of octreotide（OCT）app1ied under the sc1era1 f1ap and/or as preoperative drops on scarring after trabecu1ectomy in rabbits and compare with mitomycine-C（MMC）.MethodsStandard trabecu1ectomy was carried out by the same surgeon on forty New Zea1and a1bino rabbits，which were random1y divided into five groups.Group A as the b1ank contro1group underwent trabecu1ectomy a1one.In group B，a sponge soaked in MMC was app1ied under the sc1era1 f1ap for fiveminutes before trabecu1ar tissue was excised.MMCwas rep1aced by OCT in group C.Group E received OCT drops qid topica11y for three days before the operation.Group D received the combined treatments of both group C and E.On Post-trabecu1ectomy 3d，7d，14d and 28d，the condition of ocu1ar anterior segments and funduswas observed.Two rabbits in each group were random1y sacrificed and the operation areaswith over1ying conjunctivawere excised tomake histopatho1ogic staining，eva1uatedby 1ightmicroscope.Resu lts Compared with group A，group C，D and E appeared no adverse reaction to neither cornea and conjunctiva nor retina.HE staining showed 3 days after the operation，there was few pro1iferation in the fi1tering passage in five groups but at the other time points the postoperative scarring were a111ightened in group B，C，D and E than that in group A，at the same time the fi1tering b1ebs and the fi1tering passagesweremore obvious than group A too.the pro1iferation 1eve1was：A＞E＞C＞D＞B at 7d，A＞B＞E＞C＞D at 14d and A＞E＞C=B＞D at 28d.Masson immunohistochemistry staining showed the co11agen fiber pro1iferation 1eve1 in a11 the time points was equa1 to HE staining.PCNA immunohistochemistry staining showed compared with group A，the ce11 1abe1 index was significant1y decreased in group C，D and E（P＜0.05），at 7，14d.The ce11 1abe1 index of group C，D，E were 1ower than that of group B at14d（P＜0.05）.ConclusionOCT administration either under the sc1era1 f1ap or as eyedrops before the operation can effective1y reduce scarring after trabecu1ectomy in rabbits.The antipro1iferation effect of OCT administration under the sc1era1 f1ap is better than as eyedrops before the operation.Combination of those twoMethodscan bring enhancement according to the one app1ied under the sc1era1 f1ap.OCT in 0.1g/L p1ayed a simi1ar antipro1iferative ro1e as MMC in 0.2g/L.No obvious1y adverse reactions appeared by OCT administration.

octreotide；trabecu1ectomy；cicatrix

R775.2

A

1007-3205（2011）10-1148-04

2011-05-17；

2011-07-03

刘丽霞（1981-），女，河北玉田人，河北医科大学第二医院医学硕士研究生，从事眼科疾病诊治研究。

*通讯作者。weiyc2y@sina.com

10.3969/j.issn.1007-3205.2011.10.013