HPLC法测定盐酸头孢他美酯颗粒的含量

马 丽，李铁健

盐酸头孢他美酯为半合成第三代口服头孢菌素类抗生素，能够有效抑制链球菌类等革兰阳性菌和大肠杆菌等革兰阴性菌，并对多种细菌产生的β-内酰胺酶稳定，具有较好的抗菌活性。临床主要用于敏感菌所致的肺炎、急性支气管炎、咽喉炎、扁桃体炎、尿路感染及妇产科、外科、耳鼻咽喉科和口腔科等感染［1-3］。根据中国药典对药品质量控制的要求，本实验对研制的新药盐酸头孢他美酯颗粒的质量标准进行了研究，建立了HPLC法测定该制剂的含量，并进行了方法学考察［4-6］。

1 仪器与试药

仪器:Agilent 1100高效液相色谱仪，包括紫外检测器、四元泵、在线脱气机、柱温箱、自动进样器、Chemstation色谱工作站。

对照品:盐酸头孢他美酯(中国药品生物制品检定所)，批号:130512-200201，含量:71.3%。头孢他美酸:自制，纯度＞99.9%。

试药:盐酸头孢他美酯颗粒(自制)，批号:091101、091102、091103。乙腈、甲醇为色谱纯(美国TEDIA公司)，水为纯净水。

2 方法与结果

2.1 试验溶液的制备

2.1.1 系统适用性溶液的制备 精密称取头孢他美酸10 mg置于100 mL量瓶中，乙腈(9→20)溶液溶解并定容。取此溶液5 mL、头孢他美酯14 mg置10 mL量瓶中，加乙腈(9→20)溶液制成含头孢他美酸 0.05mg/mL、头孢他美酯1.4 mg/mL的混合溶液，作为系统适用性溶液。

图1 盐酸头孢他美酯颗粒HPLC色谱图注:A.辅料溶液，B.系统适用性溶液，C.对照溶液，D.样品溶液。1.头孢他美酸，2.头孢他美酯

2.1.2 对照品溶液的制备 精密称取头孢他美酯对照品28 mg(约相当于头孢他美20 mg)置于100 mL量瓶中，加乙腈(9→20)溶液溶解并稀释至刻度，得含头孢他美为0.2 mg/mL的对照溶液。

2.1.3 供试品溶液的制备 取本品10袋，称重，计算平均装量，精密称取本品细粉适量(约相当于头孢他美20 mg)，置100 mL量瓶中，加乙腈(9→20)溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，0.45 μm滤膜过滤，即得。

2.1.4 辅料溶液(阴性对照)的制备 按照处方比例称取辅料适量，置100 mL量瓶中，加乙腈(9→20)溶液溶解并稀释至刻度，即得。

2.2 色谱条件与系统适用性 色谱柱:Agela XBP-C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:乙腈-甲醇-水-磷酸盐缓冲液(取无水磷酸氢二钠5.8 g与磷酸二氢钾3.5 g，加水溶解并稀释成1 000 mL)(360∶90∶500∶45)为流动相;检测波长:263 nm;流速:1.0 mL/min;进样量:20 μL。取系统适用性溶液，依法连续进样6次，要求头孢他美酯峰面积的RSD≤2%，理论塔板数按头孢他美酯色谱峰计 ＞5 000，其与头孢他美酸峰(tR=1.35 min)的分离度应＞28.0，头孢他美酯峰(tR=12.9 min)与其相对保留时间RRT约为0.9和1.1处杂质峰的分离度均应＞2.0。色谱图见图1。

2.3 线性曲线的绘制 精密称取头孢他美酯对照品(含量71.3%)28.85 mg置于50 mL量瓶中，加乙腈(9→20)溶液溶解并稀释至刻度，得含头孢他美0.411 4 mg/mL对照储备溶液，分别精密量取此溶液7.0、6.0、5.0、4.5、4.0、3.0 mL 到10 mL量瓶中，加乙腈(9→20)溶液稀释至刻度，摇匀。照含量测定项下的方法测定，以浓度C(μg/mL)对头孢他美酯峰面积(A)进行线性回归，得回归方程:Y=18.65 X-40.791，r=0.999 7。结果表明，头孢他美的浓度在123.42～287.98 μg/mL范围内线性良好。

2.4 精密度试验 取对照品溶液，按测定的色谱条件，连续进样6次，记录头孢他美酯的峰面积，计算RSD为0.77%(n=6)，表明精密度良好。

2.5 稳定性试验 取对照品溶液和样品溶液，分别在 0、2、4、6、8、12 h 进样分析，记录头孢他美酯峰面积，计算RSD分别为0.74%和0.68%(n=6)，表明在12 h内对照溶液和样品溶液基本稳定。2.6 重复性实验 精密称取同一批次药品细粉6份，按样品溶液制备方法操作，分别进样，记录头孢他美酯峰面积，计算含量，RSD为0.51%(n=6)，表明本方法重复性良好。

2.7 加样回收率试验 根据盐酸头孢他美酯颗粒的配比，在412 mg辅料中分别加入头孢他美酯对照品 22.4 mg(80%)、28 mg(100%)、33.6 mg(120%)各3份，置于100 mL量瓶中，加乙腈(9→20)溶液溶解并稀释至刻度，得回收率试验溶液。以测得量与加入量的比值作为回收率。结果3个浓度下的平均回收率为100.3%，RSD=0.50%(n=9)，表明本方法回收率较高(见表1)。

表1 加样回收率试验结果(mg，n=9)

2.8 样品测定 按上述“2.2”方法制备溶液，对3个批次(091101、091102、091103)盐酸头孢他美酯颗粒的含量进行测定，结果见表2。

表2 三批样品含量测定结果(%，n=2)

3 讨论

为了有效控制盐酸头孢他美酯颗粒的质量，通过参考相关文献［5-6］，本文决定采用HPLC法测定本品的含量。实验表明，采用本方法测定盐酸头孢他美酯颗粒的含量具有较高的准确度和精密度，主成分在该条件下能与其他杂质完全分离，可订入标准中，用于控制本品质量。

［1］ 姜佳峰.盐酸头孢他美酯的合成［J］.齐鲁药事，2008，27(8):489-491.

［2］ 李华，黄莉.盐酸头孢他美酯胶囊溶出度方法的研究［J］.山东医药工业，2001，20(4):1-3.

［3］ 马锦芳，郑劲平，江梅.盐酸头孢他美酯胶囊单独或序贯治疗急性支气管炎和肺炎的疗效观察［J］.实用医学杂志，2009，25(12):2051-2053.

［4］ 于世林.高效液相色谱方法及应用［M］.北京:化学工业出版社，2000:69.

［5］ 鲜杨，龙恩武，袁浩宇.反相高效液相色谱法测定盐酸头孢他美酯胶囊中头孢他美含量［J］.中国药业，2010，19(7):31-32.

［6］ 中国药典.2010年版(二部).北京:中国医药科技出版社，2010:667-669.