电化学发光法测定乙肝表面抗原的方法学性能评价

张建荣 席向红 郭小龙 崔 洁

(宁夏医科大学附属医院医学实验中心 宁夏银川 750004)

乙肝五项检测是检验科常见的检测项目，目前国内大多应用酶免疫(EIA)测定，然而其方法固有的缺点在一定程度上给临床诊治带来了困难[1]。随着近年来检测技术的不断发展，电化学发光免疫技术以其快速、简便、无污染、自动化程度高等特点得以广泛应用。由于乙肝表面抗原(HBsAg)属于定性检测项目，因此，我们在申报 ISO15189 认可时，参照相关文献[2，3]对Roche E－170检测系统测定HBsAg进行了批内重复性、批间重复性、临界值验证、阳性符合率、阴性符合率的性能验证及评价，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源 收集本院临床新鲜血清标本低、高两个浓度水平用于批内重复性测定，另取低、高两个浓度水平控制品用于批间重复性测定。准备临界值+20%浓度样本、临界值－20%浓度样本，用于临界值验证。选取本院患者血清标本乙肝表面抗原阳性31人份;另选取本院患者，乙肝表面抗原阴性血清标本20人份，卫生部临床检验中心的室间质量评价(EQA)回报结果，用于阳性符合率、阴性符合率验证。

1.2 试剂与仪器 德国Roche170全自动免疫分析仪(电化学发光法，ECLIA)及配套试剂盒、质控品、耗材等。

1.3 结果计算 临界值(cutoff)由阴性和阳性定标品测定光信号值(RLU)计算得出，标本结果用标本光信号值 /cutoff光信号值进行报告。结果报告≥1.00 COI(cutoffindex)为阳性，＜1.00 COI为阴性(仪器自动计算以上结果)。

1.4 方法

1.4.1 批内重复性试验。取低、高2个浓度血清标本进行评价试验，连续重复测定20次，计算变异系数(CV)，结果与厂商说明书给定的参数比较，若在给定的允许范围内，批内重复性性能符合要求。

1.4.2 批间重复性试验。取低、高2个浓度水平控制品连续重复测定20天，每天1次，计算变异系数(CV)。结果与给定的允许总误差比较，若在给定的允许范围内，批间重复性性能符合要求。

1.4.3 临界值验证。准备临界值+20%浓度样本、临界值－20%浓度样本，分别重复测定20次，计算阴、阳性率。临界值+20%浓度的标本检测结果阳性率≥95%，同时，临界值－20%浓度标本检测结果阴性率≥95%则符合要求。

1.4.4 阳性符合率、阴性符合率评价。选取HBsAg检测阳性和阴性的血清标本进行检测，检测结果与原结果进行比较，分别计算符合率，若符合率≥95%则符合要求。

1.4.5 以2010年卫生部临床检验中心的3次感染性疾病血清标志物A类室间质评为标准，对每次5个标本的HBsAg回报结果与预期结果进行符合性统计，计算符合率，若EQA结果符合率≥80%则符合要求。

2 结果

2.1 批内重复性试验 批内CV应≤厂商说明书给定的参数。检测项目的CV分别为7.3%和0.6%，均小于给定的允许范围，表明验证的检测系统批内重复性符合要求，重复性好。结果见表1。

2.2 批间重复性试验 批间CV应≤1/3允许总误差，两个水平控制品的CV分别为9.6%和4.9%，均小于给定的允许范围，表明验证的检测系统批间重复性符合要求，重复性好。结果见表1。

表1 乙肝HBsAg检测的批内重复性和批间重复性结果

2.3 临界值验证 临界值+20%浓度的标本检测结果阳性率为100%，临界值－20%浓度标本检测结果阴性率为100%，均大于判断标准(≥95%)，检测结果符合要求。说明试剂生产厂家提供的检测项目临界值基本可靠，在此区间内标本能得到稳定的检测结果。

2.4 阳性符合率、阴性符合率评价 HBsAg阳性符合率为100%，阴性符合率为100%，均大于判断标准(≥95%)，检测结果符合要求。结果见表2。

2.5 对卫生部临检中心2010年的3次质评回报结果进行统计，符合率为100%。结果见表2。

表2 乙肝HBsAg阳性符合率、阴性符合率的检测结果

3 讨论

HBsAg是乙肝病毒感染后最早出现的血清标志物之一，因此HBsAg的检测是诊断肝炎病毒感染的重要依据。诊断中最重要的就是高灵敏度与高特异性相结合，故检测系统的性能指标能否满足临床检测的要求会影响临床诊疗的效果。定性检测性能的评估主要通过重复性研究和方法间比较来评估检测方法的性能[3]。而Roche E－170检测系统具有卓越的分析灵敏、高临床灵敏度和特异性[4]。

定性检测的重复性研究能够评估检测方法的精密度，而精密度是检验项目测定中最基本的性能指标，我们检测的批内重复性和批间重复性的CV值均小于规定的允许范围，性能符合要求。

定性试验用阴、阳性符合率来评价结果的准确度，我们使用2010年卫生部临检中心的3次感染性疾病血清标志物A类室间质评回报结果进行统计，符合率为100%。同时我们对选取的HBsAg阳性(包括临界弱阳性标本)和阴性血清标本进行检测，阳性、阴性符合率均为100%，检测性能符合要求，说明该检测方法的准确性较好，能够满足临床诊疗的需求。

临界值是指实验结果处于阴、阳性分界点时的样本中分析物浓度值，低于该值判断为阴性结果，高于该值判断为阳性结果，对于定性试验，临界值是一个医学决定水平。定性试验的临界值直接决定了实验结果的检出率，因此必须对厂家提供的临界值进行验证。本实验室HBsAg±20%浓度水平的样本位于临界值95%区间内，结果说明试剂生产厂家提供的检测项目临界值基本准确。

综上所述，通过对HBsAg的批内重复性、批间重复性、临界值验证、阳性符合率、阴性符合率的评价和分析，证实该检测系统的性能卓越，具有高灵敏度和高特异性，能够满足临床检测的要求。

[1]周迎春，陈 辉，关 平，等.3种方法测定低浓度乙型肝炎病毒表面抗原效果评价[J].检验医学与临床，2007，11(4):1070 －1071

[2]魏 昊，丛玉隆.医学实验室质量管理与认可指南[M].北京:中国计量出版社，2004.59 －75

[3]杨有业，张秀明.临床检验方法学评价[M].北京:人民卫生出版社，2008.296 －312

[4]Weber B.Recent developments in the diagnosis and monitoring of HBV infection and role of genetic variability of the S gene[J].Expert Rev Mol Diagn2005，5:75