胎儿骨骼染色透明标本的设计与制作

杨小龙，王志超，何顶正，丁雪贞，刘 涵，何 康，付黎影，马玉卿

胎儿骨骼染色透明标本是在保持胎儿外形完整的情况下，利用物理和化学的方法，使软组织的折光率与透明剂相近［1］。从而在胎儿外形完整的基础上显示出胎儿整体骨骼的位置关系和形态特征。胎儿骨骼染色透明标本为医学教学提供了直观的标本，并为观察和判定胎儿各期骨骼的发育情况提供了重要的参考价值。

1 材料和方法

1.1 材料 固定液:10%的甲醛溶液;漂白液:6%的过氧化氢;脱水剂:50%、70%、90%、95%酒精;透明剂:4%的氢氧化钾、甘油;染色液:茜素红0.04 g 、氢氧化钾2 g、蒸馏水100 g;男性胎儿新鲜尸体1 具(孕育4 个月左右)，为河南科技大学第一附属医院妇产科引产胎儿。

1.2 清洗 首先用流水将胎儿表面的污垢、血迹清洗干净，然后边冲洗边轻轻挤压胎儿胸、腹腔，从口腔、肛门排出体内的内容物。不去除内脏及脑组织以保证胎儿的完整性。

1.3 排血 排血是制作此标本的重要基础。在胎儿胸骨柄处打开一个口，以找到心脏及其各大出入血管，先剪断下腔静脉进行排血，然后将升主动脉和肺动脉干起始部结扎，从升主动脉注射肝素溶液，直至从静脉端流出的为无色肝素溶液为止，胎儿变成苍白色即可。

1.4 固定 先将胎儿姿势固定好，然后将胎儿浸入10%甲醛溶液中固定5 d。

1.5 漂白 将固定后的标本用流水冲洗12 h 左右，然后将标本浸泡于6%过氧化氢溶液中3 ～4 d，以去掉胎儿组织中的色素和污物。

1.6 脱水 先将漂白过的胎儿标本用流水冲洗12 h 左右，然后将胎儿标本浸泡于各级酒精中进行脱水，其浓度依次为:50%、70%、90%、95%，每级脱水5 d。在脱水过程中可用针扎标本，这样既利于脱水又利于透明。

1.7 透明 依据标本的大小，采用4%的氢氧化钾溶液透明。每隔2 ～3 d 换溶液1 次，待组织充分透明即可。

1.8 骨骼染色 将透明的标本移入染色液中进行3～5 d 的骨骼染色。当硬骨和骨钙化点部位完全着色时，立即取出标本，以免肌肉过度染色。

1.9 软组织脱色 将标本浸泡于各级甘油中进行脱色，其浓度依次为:30%、50%、70%，每级脱色2 d，待软组织脱去浮色即可。

1.10 二次透明 将脱色后的标本置于甘油中进行二次透明，期间可用注射器在肌肉较厚的部位注入甘油，增强透明的效果。

1.11 保存 将透明完全的胎儿标本进行整理修饰，然后将标本置于冬青油中密封保存。

2 结果

制作好的胎儿骨骼染色透明标本软组织呈无色透明状，硬骨和骨钙化点被染成紫红色，且骨骼界限清晰，易于识别。能够在胎儿外形完整的情况下直接观察胎儿内部整体的骨骼位置关系和形态特征。

3 讨论

3.1 标本制作中的注意事项 ①制作透明标本的材料应力求新鲜，有利于排血和透明。假如标本放置时间过长，常因凝血阻塞血管而影响冲洗及排血效果。②透明标本的制作有两个关键步骤，即漂白和脱水［2］。在保证标本不被损坏的前提下漂白要充分，提高漂白液浓度的确会缩短漂白时间，但对组织的损伤较大，为保证胎儿良好的外形，可用低浓度的漂白剂漂白，并适当延长漂白时间。③脱水也是制作此标本的关键步骤。标本经彻底脱水后透明剂才易于渗入组织内，从而达到透明的目的。但因酒精的脱水能力强，渗透速度快，用较高浓度的酒精脱水胎儿标本会明显地收缩硬化而导致外形的改变［3］。因此我们采用多级酒精脱水法，依次将标本放入50%、70%、90%、95%的酒精中脱水各5 d，减轻了标本的收缩和外形的改变，维持了胎儿的正常形态。④机体质量越重，年龄越大，坚实程度越强，碱液渗入组织也越困难［4］。所以标本在用氢氧化钾透明时要依据标本的年龄、质量、坚实程度，选择适当浓度的氢氧化钾进行透明，以免浓度过高，腐蚀标本。⑤根据材料的大小调配染色液的浓度和染色时间。染色时要经常观察，把握染色时间和染色程度以免产生染色过度，造成脱色困难，影响透明效果。

3.2 胎儿骨骼染色透明标本的作用 随着医学形态学和医学影像学的发展，教学和临床对骨骼标本的多样性有了更高的要求。以往的教学只限于传统的解剖实验及理论讲解，缺乏机体完整状态下直接观察骨骼的标本。因此给学生的学习和理解骨的发育带来了不少困惑。透明标本的制作，为胚胎学的骨骼研究、比较解剖学的研究、医学影像学的研究，提供了直观、真实的形态学素材。在教学中通过与临床影像学资料进行对比丰富了教学的手段，提高了学生的学习兴趣。使同学们对胎儿骨骼的发育过程和各骨的位置关系有了更直接的认知，巩固了理论知识。同时，该标本可以长期保存，可作为展览所用。

［1］李忠华，王兴海.解剖学技术［M］. 第2 版. 北京:人民卫生出版社，1997:184－187.

［2］张孝珍.简谈人体透明标本的制作原理及透明剂的选配方法［J］.武汉体育学院学报，1990，2:85－86.

［3］郑辉，李云峰，徐贵清.透明标本材料的选择和处理［J］.齐齐哈尔医学院学报，2001，22:114－115.

［4］刘万胜，黄明，刘力华.新生儿骨骼透明标本的制作［J］.卫生职业教育，2004，22(14):94.