EB病毒、巨细胞病毒与类风湿关节炎的相关性研究

刘金禄 王蕾 何晓峰 李采青 卢成 韩旭颖

类风湿关节炎(RA)是以侵犯全身关节滑膜为主的慢性自身免疫性疾病，其主要特征为滑膜细胞过度增殖、滑膜细胞激活以及大量血管翳形成，造成骨、软骨侵蚀性破坏。其原因不明，可能与遗传、感染、内分泌紊乱等有关。近年来，RA的病毒病因学受到高度重视。其中EB病毒、巨细胞病毒在RA发病中的作用一直是个有争议的问题。有人认为EB病毒、巨细胞病毒与RA的发病有关。本研究采用实时荧光定量PCR方法检测EB病毒-DNA、巨细胞病毒-DNA载量。报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2009年2月至2010年10月我院收治的类风湿关节炎患者79例，其中男24例，女55例;年龄21～78岁，平均年龄56岁。诊断均符合美国风湿病协会1987年修订的RA分类标准。以上患者均系我院住院或门诊患者。

1.2 主要试剂 荧光定量检测EB病毒、巨细胞病毒试剂盒购于中山大学达安基因有限公司。

1.3 方法 荧光实时定量PCR法检测EB病毒、巨细胞病毒DNA含量，按试剂盒说明书进行操作，罗氏LightCyclerTM全自动实时荧光定量PCR仪上机检测。

2 结果

79例RA患者中类风湿因子(RF)阳性58例，抗环瓜氨酸肽抗体(CCP)阳性28例。RF和CCP阳性患者中的32例淋巴细胞、79例血浆、3例关节液中均未检测到EBV-DNA，从RA患者中的79例血浆、3例关节液中均未检测到CMV-DNA，健康对照组也检测到EBV-DNA和CMV-DNA。

3 讨论

类风湿关节炎是以常见的慢性多关节累及为主的一种全身自身免疫性疾病。目前医学界认为其发病与遗传、免疫及环境有关。近年来有些学者认为与病毒、细菌等感染有关，原因不明。

EB病毒在人类普遍易感，曾毅等［1］报道我国正常人87～94%感染EB病毒，EB病毒感染机体后，就终生停留在B淋巴细胞中，多数时期是静止的，偶尔可以再次激活和复制。一般来讲，普通人感染EB病毒，体内血清抗VCA-IgG抗体阳性，该抗体可在机体内长期存在，检测此抗体无临床诊断意义。而VCA-IgA抗体是一种较特异的抗体，研究发现在鼻咽癌和传染性单核细胞增多症患者血清中有较高的阳性率，分别为82%和94%，正常人仅为0～6%［1］，因而认为VCA-IgA抗体具有诊断价值。我们的前期试验，也利用VCA-IgA抗体检测EB病毒与RA的临床关系，54例RF中VCA-IgA抗体阳性12例，28例有CCP抗体患者中8例VCA-IgA抗体阳性。结果表明RA患者VCA-IgA抗体阳性率与健康对照组相比较差异有统计学意义，说明EB病毒与RA有明显的相关性。

巨细胞病毒属疱疹病毒科，是新生儿巨细胞包涵体病的病原体，成人可引起单核细胞增多症，成人感染多为隐性感染，隐性感染巨细胞病毒在有害因素的刺激下，可被激活引起多系统、多脏器病变。其感染可能也与RA发病有关。1993年Tsuchiya等［2］报道，在约50%RA患者血清中存在高滴度抗人巨细胞病毒(HCMV)-65000蛋白抗体。我们前期试验58例RF阳性患者中巨细胞病毒IgM抗体阳性12例，28例CCP抗体阳性患者中CMV-IgM抗体阳性8例，正常对照组CMV-IgM抗体阳性1例。RA患者CMV-IgM抗体阳性率明显高于正常对照组人群且差异有统计学意义，说明CMV-IgM与RA有明显的相关性。

但EB病毒、巨细胞病毒与RA是否有直接因果关系，国内外研究结果结论差异很大。上述血清学检测不能直接反映EB病毒、巨细胞病毒在人体内的状况，PCR法检测该两种病毒DNA载量可以为我们分析两种病毒在RA中的作用提供帮助。实时荧光定量PCR法(RT-PCR)室检测EB病毒、巨细胞病毒DNA载量非常敏感的方法。Alvarez-Lafuente等［3］利用实时荧光定量PCR技术检测外周血中EB病毒-DNA载量明显高于对照组;Toussirot等［4］检测外周血和滑膜液中EB病毒-DNA载量明显高于对照组;国内广东尹志华等［5］荧光定量PCR技术检测外周血中EB病毒-DNA载量明显高于对照组;而Mousavi等［6］报道在滑膜中CMV-DNA与EBV-DNA的检出率与对照组无差异;但许多学者支持这样一个观点，不是EB病毒直接感染关节滑膜所致［7］。是细胞免疫异常在RA发病中发挥作用。国内张爱宏等［8］用通用引物PCR技术检测患者外周血标本CMV-DNA与EBV-DNA的检出率与健康对照组均无差异。本研究采用实时荧光定量PCR方法检测本地区患者血浆中EB病毒DNA载量，血清中的CMV-DNA载量，均未检测到此两种病毒DNA，说明本地区RA与EB病毒、巨细胞病毒感染无直接关系。

1 曾毅，Nicolas JC，Schwab G，等.Epstein-Barr病毒相关疾病的 IgG/Z抗体检测.病毒学报，1992，8:218-222.

2 Tsuchiya N，Murayama T，Yoshinoya S，et al.Antibodies to human cy-tomegalovirus 65-kilodalton Fc binding protein in rheumatoid arthritis:idio-typic mimicry hypothesis of rheumatoid factor production.Autoim-munity，1993，15:39-48.

3 Alvarez-Lafuente R，Femandez-Gutierrez B，De Miguel S，et al.Potential relationship between herpes viruses and rheumatoid arthritis:analysis with quantitative real time polymerase chain reaction.Ann Rheum Dis，2005，64:1357-1359.

4 Toussirot E，Roudier J.Pathophysiological links between rheumatoid arthritis and the Epstein-Barr virus:an update.Joint Bone Spine，2007，74:418-426.

5 尹志华，叶志中，罗秀霞，等.EB病毒与类风湿关节炎的相关性分析.现代生物医学进展，2009，9:3294-3296.

6 Mousavi JM，Bostrom L，Lovmark C，et al.Infrequenent dedection of cytomegalovirus and Epstein-Barr virus DNA in synovial membrane of patients withs rheumatoid arthritis.Rheumatol，1998，25:623-628.

7 赵建宏.类风湿关节炎关节炎研究的新进展.济南医学院学报，2002，25:80-81.

8 张爱宏，刘若英.类风湿关节炎患者外周血疱疹病毒DNA的检测及其Th亚群激活状况研究.中华风湿病学杂志，2002，6:183-185.