中药天年饮对衰老大鼠脾PCNA表达的影响

张 雷，苏哲君，陈志宏

（承德医学院，河北承德 067000）

短篇报道

中药天年饮对衰老大鼠脾PCNA表达的影响

张 雷，苏哲君，陈志宏

（承德医学院，河北承德 067000）

衰老；脾；天年饮；PCNA

淋巴器官功能降低是免疫功能紊乱的主要原因，也与免疫功能的衰退密切相关[1]，因此，研究免疫系统的衰老变化具有重要的理论和实际意义。脾是机体重要的免疫器官，补肾、健脾是延缓衰老的主要方法。天年饮由刘河间《宣明论方》何首乌丸加味而成，能填精补髓、乌发延年。本研究采用D-半乳糖致亚急性衰老的大鼠模型，观察了中药天年饮对衰老大鼠脾形态结构和PCNA表达的影响。

1 材料与方法

1.1 实验动物的选择与分组 雄性SD大鼠30只，体重180-250g。将大鼠随机分为3组：正常组、衰老模型组和天年饮用药组，每组10只。模型组和用药组大鼠采用D-半乳糖连续腹腔注射(200mg/kg/d，40d）制作亚急性衰老的动物模型；模型组大鼠造模成功后不再做任何处理，用药组大鼠造模成功给予天年饮灌胃30d。

1.2 药品与试剂 天年饮由灸何首乌、怀牛膝、肉从蓉、淫羊藿、丹参、茯苓六味中药组成，煎制后每ml含生药1.5g，按16.2g/kg灌胃给药。PCNA免疫组化试剂盒购自武汉博士德生物工程公司。

1.3 免疫组化染色 大鼠断头处死，取脾入Bouins液固定，常规石蜡包埋，连续切片(片厚6μm）。采用SABC免疫组化染色观察大鼠脾PCNA的表达(PCNA一抗为小鼠抗，稀释浓度1：100），以细胞核出现棕黄色为阳性反应，以PBS代替一抗作为阴性对照。每只大鼠于显微镜下(10×20）任选5张切片，每张切片选取3个阳性细胞分布均匀的视野，采用MiVnt图像分析系统进行定量分析，以阳性产物面积占视野面积的比值作为PCNA的相对表达水平，取平均值。

1.4 统计分析 采用SPSS11.0统计软件，以方差分析进行统计处理，组间比较采用q检验。

2 结果

大鼠脾PCNA表达的变化：PCNA阳性产物为棕黄色，位于细胞核。正常组大鼠脾小体生发中心可见大量PCNA阳性的B淋巴细胞，但阳性程度较弱；动脉周围淋巴鞘可见PCNA阳性的T淋巴细胞；脾索可见PCNA阳性的浆细胞和网状细胞，阳性程度较强。模型组大鼠脾小体、动脉周围淋巴鞘中PCNA阳性淋巴细胞均明显减少；脾索中可见PCNA阳性的浆细胞和网状细胞。天年饮用药组大鼠脾PCNA的表达情况与模型组比较明显改善。定量分析结果：正常对照组、模型组、天年饮用药组PCNA的表达分别为(0.1167±0.0191）、（0.0533±0.0134）、（0.0922± 0.0280），模型组大鼠脾PCNA的表达明显低于正常组大鼠(P＜0.01），天年饮用药组大鼠脾PCNA的表达明显高于模型组(P＜0.01）。

3 讨论

免疫系统是机体衰老过程中的主要调节系统之一，可参与机体衰老的全过程。脾是机体内重要的免疫器官，在异种抗原的刺激下脾小体分化增殖，产生B淋巴细胞及浆细胞，动脉周围淋巴鞘显着增厚，产生T淋巴细胞，这些变化均与体液免疫和细胞免疫密切相关。另外，脾还能产生与免疫调节有关的活性物质，脾的功能在整个机体的免疫功能中占有重要地位[2]。PCNA是存在于细胞核中的酸性蛋白质，是增殖期细胞特异表达的一种核蛋白，在核酸复制和修复以及调节细胞周期中有重要作用。另外，PCNA还作为DNA聚合酶δ的一个辅助因子参与DNA的合成与复制，为DNA复制起始所必需[3]。PCNA在所有具有DNA复制的细胞中都有表达，并且它的合成及表达与细胞增殖周期密切相关，PCNA的合成在G1期开始增加，S期达到高峰，G2期开始下降[4-5]。因此，PCNA表达的强弱可直接反应细胞增殖/凋亡的程度和是否存在细胞的恶性累积增殖。本研究发现，衰老大鼠脾脏出现明显的病理变化，脾PCNA的表达明显降低；与衰老模型组比较，天年饮用药组大鼠脾脏的病理变化明显减轻，脾PCNA的表达明显提高。表明天年饮可通过减轻脾脏的病理变化和促进淋巴细胞的增殖能力来提高衰老机体的免疫功能，证实中药天年饮具有一定的延缓衰老作用。

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1004-6879(2011）02-0206-02

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