复方中药对雏鸡免疫器官及免疫功能的影响

李叔伟， 林巍 ，刘新雷，姜丽萍，姜宇，葛铭

（1．哈药集团生物疫苗有限公司，黑龙江哈尔滨 150069；2．东北农业大学动物医学学院，黑龙江哈尔滨 150030）

长期以来，生产中多用抗生素等化学类制剂做饲料添加剂。已知抗生素可在动物体内残留，致使动物产生耐药性，引起致癌、致畸和致突变，并能通过食物链危害人类健康。中草药为天然动植物产品，一些常用中草药兼有营养与药用两种属性，富含蛋白质、氨基酸、维生素和微量元素等养分，研究表明，具有补益作用的中草药均具有增强免疫的功能,枸杞子具有提高动物细胞免疫与体液免疫的功能，中草药添加剂可显著提高鸡淋巴细胞转化率，黄芪可提高大鼠抗体产量，具有提高体液免疫的功能。本实验选用黄芪、党参、当归、白术4味中草药，旨在探讨中草药添加剂的促生长作用和增强免疫的功能，同时也为进一步研究中草药添加剂的营养与免疫功能提供依据。

一、材料与方法

1.中草药。黄芪、党参、当归、白术，购自哈尔滨中医药有限公司。按照祖国医药学传统理论，合理组方，使药物间产生协同作用。方剂：黄芪、党参、当归、白术。

2.试验动物与分组。将1日龄海兰白雏鸡100只，随机分为C和L共2组，每组50只， C组为对照组，L组为实验组。自由采食、饮水量见表1，L组雏鸡在饮水中添加方剂复方水煎剂，用量是雏鸡日饮水量的2%，C组水中不添加任何药物，在育雏期辅以保温措施，实验期为5周，2组鸡在相同条件下进行饲养管理，每天两次进行观察。分别于实验开始后的第7、14、21、28、35天随机从每组各抽取相同数量雏鸡，称重、采血、处死取脏器，进行免疫器官指数测定、巨噬细胞吞噬率检测和外周血液细胞数量的检测。

3.实验方法。

⑴体重及免疫器官指数的测定:于 7 d、14 d、21 d、28 d、35 d每组各组取7只鸡，编号并称重，然后处死，迅速取其免疫器官胸腺、脾脏、法氏囊，称其湿重。计算免疫器官的指数，即免疫器官指数=免疫器官重量/鸡体重×100%。

⑵白细胞数量测定：按常规方法计数分别于实验开始后的第7、14、21、28、35天随机从每组抽取相同数量雏鸡外周血液白细胞，用低倍镜计数四角的四个大格内的白细胞数（细胞数×10-3/mm3）。

计算：白细胞数/l=四个大格白细胞数÷4×10×20×106。

⑶淋巴细胞数量测定：分别于实验开始后的第7、14、21、28、35天随机每组抽取相同数量雏鸡翼静脉针刺取血并推制血膜片，迅速吹干，用无水甲醇固定1 min，再用pH6.8的0.067 mol/LPBS10倍稀释的姬姆萨染色液染色30 min，水洗干燥后常规分类计数。根据淋巴细胞百分率（%），计数淋巴细胞绝对数量（淋巴细胞数×10-3/mm3）。

酸性非特异性α-醋酸萘脂酶阳性T淋巴细胞（ANAE+T）数量测定：于血膜头、体、尾三部分共查计200个淋巴细胞，并用下列方法计算淋巴细胞阳性率酸性非特异性α-醋酸萘脂酶ANAE+T数=淋巴细胞数/mm3×ANAE+T 百分率（%）。

⑷巨噬细胞吞噬率的测定： 分别于7、14、21、28、35天时每组随机各取7只鸡，编号并称重。采用碳廓清方法，用生理盐水1:4稀释印度墨汁生物染色剂，按2 ml/kg体重静注，立即计时，间隔2 min(T2）、10 min（T10）分别从对侧翅静脉采血20 µl， 加 到 2 ml 0.1%Na2CO3 溶 液 中摇匀，用721型分光光度计于600 nm波长处比色，测定光密度OD值（以下分别用OD2和OD10来表示2 min和10 min所取血样的光密度，用0.1%Na2CO3溶液做空白对照。然后处死鸡，取肝脏和脾脏称重，按如下公式计算碳廓清指数K值和吞噬指数a值。

碳廓清指数 K=（lgOD2～ lgOD10）/（T10～ T2）=（lgOD2～lgOD10)/8。

吞噬指数a=体重/（肝重+脾重）×K1/3。

二、实验结果

从表2可见，复方中药应用于雏鸡后，7～21 d用药组与对照组相比，体重有所提高，但差异不显著；在28～35 d天，雏鸡体重明显高于对照组（P<0.05）。

从表3可见，复方中药应用雏鸡后，脾脏指数在35 d明显高于对照组（P<0.01），法氏囊指数在28～35 d明显高于对照组（P<0.01或P<0.05），脾脏指数在28～35 d明显高于对照组（P<0.01）。

从表4可见，复方中药应用雏于鸡后，7～21 d实验组与对照组相比巨噬细胞吞噬率有所提高，差异不显著（P﹥0.05），28～35 d实验组与对照组相比巨噬细胞吞噬率显著升高（P<0.01或P<0.05）。

从表5可见，复方中药应用于雏鸡后，7～14 d实验组与对照组相比外周血液白细胞数量有所提高但差异不显著，21～35 d实验组与对照组相比外周血液白细胞数量明显升高，差异显著（P<0.05）。

从表6可见，复方中药应用于雏鸡后，7～14 d实验组与对照组相比外周血液淋巴细胞数量有所提高差异不显著，21～35 d实验组与对照组相比外周血液淋巴细胞数量明显升高，差异显著（P<0.05）。

从表7可见，复方中药应用雏鸡后，7～14 d实验组与对照组相比外周血液T淋巴细胞数量有所提高但差异不显著，21 d实验组与对照组相比外周血液T淋巴细胞数量明显升高，差异显著（P<0.05），28～35 d实验组与对照组相比外周血液T淋巴细胞数量差异极其显著（P<0.01）。

表1 不同日龄雏鸡的饮水量

表2 复方中药对雏鸡体重的变化（ ±S d，n=7）单位：g/只

表2 复方中药对雏鸡体重的变化（ ±S d，n=7）单位：g/只

注：字母不相同者差异显著，小写字母P<0.01，大写字母P<0.05，无标记或无字母者差异不显著P﹥0.05，以下各表同。

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表3 复方中药多糖对雏鸡免疫器官指数的影响（±S d，n=7）

表3 复方中药多糖对雏鸡免疫器官指数的影响（±S d，n=7）

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表4 复方中药多糖对雏鸡巨噬细胞吞噬率的影响（±S d，n=7）

表4 复方中药多糖对雏鸡巨噬细胞吞噬率的影响（±S d，n=7）

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表5 外周血液白细胞数量的动态变化（±S d，n=7） 单位：细胞数（n）×10-3/mm3

表5 外周血液白细胞数量的动态变化（±S d，n=7） 单位：细胞数（n）×10-3/mm3

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表6 外周血液淋巴细胞数量的动态变化（±S d，n=7） 单位：细胞数（n）×10-3/mm3

表6 外周血液淋巴细胞数量的动态变化（±S d，n=7） 单位：细胞数（n）×10-3/mm3

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表7 外周血液T淋巴细胞数量的动态变化（±S d，n=7）单位：细胞数（n）×10-3/mm3

表7 外周血液T淋巴细胞数量的动态变化（±S d，n=7）单位：细胞数（n）×10-3/mm3

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三、讨论

1.复方中药对雏鸡免疫器官的影响。胸腺、脾脏和法氏囊是禽类的重要免疫器官。胸腺是重要的中枢免疫器官，游走的造血干细胞进入胸腺原基，在此分化增殖成T淋巴细胞，与细胞免疫有关。脾脏是机体内最大的外周免疫器官，免疫活性细胞在此进一步增殖、分化和成熟，是产生致敏淋巴细胞和抗体的场所之一，并能清除衰老细胞和微生物等物质。脾脏有T淋巴细胞和B淋巴细胞，还有巨噬细胞，与体液免疫和细胞免疫均有密切关系。法氏囊是中枢免疫器官，是B细胞分化成熟的场所。中草药对免疫器官发育的影响主要集中在胸腺、脾脏和法氏囊，免疫器官的重量增加是生长发育快的表现，而指数的提高意味着免疫系统成熟较快。杨铁虹等报道当归多糖对小鼠免疫功能的影响，在10～100 mg/kg剂量范围内，当归多糖能增加正常小鼠脾重。程相朝等报道了日粮中添加人参、黄芪、党参，结果实验组肉仔鸡脾脏、胸腺重量和指数均高于对照组。李诺等报道了饲喂黄芪组鸡的免疫器官指数比对照组和其他各实验组均高，特别是法氏囊指数最高。

实验结果表明，复方中药多糖能提高雏鸡脾脏、胸腺和法氏囊指数。脾脏指数在35 d有明显的提高，差异极其显著（p﹤0.01）；法氏囊指数在28日龄表现为差异显著（p﹤0.05），35日龄差异极其显著（p﹤0.01）；胸腺指数在28、35日龄表现差异极其显著（p﹤0.01）。本复方中药能促进正常雏鸡法氏囊、脾脏、胸腺的发育，其相对重量明显增加，说明复方中药多糖能够促进雏鸡免疫器官的生长发育和迅速成熟，从而使雏鸡整体免疫机能加强，抵抗各种病原微生物感染和抗各种应激的能力得到提高。

2.复方中药多糖对雏鸡非特异性免疫功能的影响。白细胞的主要功能是消灭侵入机体的外来异物，即免疫功能。白细胞是机体抵御病原微生物等异物入侵的主要防线，具有参与细胞免疫、吞噬、产生抗体、传递免疫信息等功能，白细胞的总数直接反映机体的状态。白细胞数量的变化，可以表明它的细胞免疫水平的高低。本实验结果表明，复方中药应用后，雏鸡白细胞总数在21～35日龄明显高于对照组（P<0.05），从而使雏鸡的抵抗力增强。说明复方中药具有提高雏鸡非特异性免疫功能的作用。

巨噬细胞是机体重要的免疫调节和效应细胞，参与机体众多的生理和病理反应过程。巨噬细胞的吞噬能力是衡量机体非特异免疫功能的标志之一，当细菌、异物等抗原性物质进入机体后可迅速被单核巨噬系统吞噬和清除，因而，腹腔巨噬细胞吞噬率的大小可以反映其功能的强弱。本实验利用印度墨汁作为一种异物注入雏鸡静脉，通过对炭粒廓清指数的影响，反映巨噬细胞吞噬功能的强弱。实验结果表明，免疫后28日龄复方中药组雏鸡与对照组相比吞噬细胞吞噬率提高极显著（P﹤0.01），免疫后35日龄复方中药组雏鸡与对照组相比巨噬细胞吞噬率提高显著（P﹤0.05）。本复方中药具有对单核-巨噬细胞系统的免疫促进作用，能非特异性地吞噬侵入动物体内的病原体和有害异物，而且能将抗原提呈给T、B淋巴细胞，从而参与机体的特异性免疫应答，是参与机体非特异性免疫的重要部分，并能参与机体的特异性免疫。

3.复方中药多糖对雏鸡细胞免疫功能的影响。细胞免疫是T细胞介导的机体的一种重要免疫反应。细胞免疫是机体抵抗细胞内微生物（如病毒）和宿主细胞内增生的细菌感染的防御机制，可通过促进在细胞内将微生物破坏或溶解感染的细胞来执行。淋巴细胞的多少是机体全身免疫机能强弱的一个具体表现。病理情况下，外周血液中的T、B细胞数量发生改变，其变化与免疫器官组织的形态结构和机能状态密切相关，是机体免疫水平的重要标志。

本实验中复方中药应用后，雏鸡淋巴细胞数量在21～35日龄显著高于对照组（P<0.05）。实验通过ANAE法测定T淋巴细胞百分率，结果表明，在21日龄明显高于对照组（P<0.05），28～35日龄与对照组相比，差异极其显著（P<0.01）。复方中药能显著提高T淋巴细胞百分率，说明中药复方具有增强细胞免疫功能，除能产生更多的淋巴因子提高机体免疫力外，还具有辅助体液免疫的作用。复方中药中的黄芪、党参等含有丰富的多糖、黄酮、皂甙类等生物有效成分，这些物质对提高鸡免疫功能有促进作用，可以活化抗体免疫系统和免疫器官，提高淋巴细胞功能，促进抗体生成等多种功效。

（略）