乳腺浸润性导管癌组织中磷脂酶 A2蛋白的表达*

曲蕴慧,庞 霞,赵 乐,李晟磊,陈奎生,贺付成

1)郑州大学第一附属医院检验科郑州 450052 2)郑州大学第一附属医院病理科郑州 450052 3)河南省肿瘤病理重点实验室郑州 450052

△女,1980年5月生,硕士,主管技师,研究方向:肿瘤病理,E-mail:zdqyh09@126.com

磷脂酶A2(phospholipase A2,PLA2)是具有甘油磷脂分解活性的酶类家族,广泛存在于细菌、植物及哺乳动物的多种组织、细胞和分泌物中,主要位于动物细胞膜和线粒体膜上[1]。既往研究[2]表明, PLA2可合成具有不同生物活性的物质,并在磷脂的代谢和更换中发挥关键作用;PLA 2及其代谢产物除具有炎性介质作用外,还参与调节细胞的生长增殖,与恶性肿瘤关系密切。作者采用免疫组织化学 SP法检测分泌型磷脂酶A2(sPLA2)-Ⅱa及胞浆型磷脂酶A2(cPLA2)在57例乳腺浸润性导管癌组织、15例乳腺纤维腺瘤组织及 15例正常乳腺组织中的表达情况,探讨sPLA2-Ⅱa及cPLA2在乳腺浸润性导管癌发生发展中的作用,以期寻找乳腺浸润性导管癌早期诊断和预后判断的分子指标。

1 材料与方法

1.1 标本来源 57例乳腺浸润性导管癌及15例乳腺纤维腺瘤均为郑州大学第一附属医院 2007年 3月至 2009年 2月新鲜手术切除标本,选取 15例乳腺腺病或乳腺炎手术切除标本中的正常乳腺组织作对照,所有病例术前均无化疗、放疗及免疫治疗史,均经病理学证实。患者均为女性,年龄29～87(50.3±11.3)岁。组织学分级Ⅰ级 9例,Ⅱ级 34例,Ⅲ级 14例;临床分期Ⅰ期21例,Ⅱ期23例,Ⅲ期13例;有淋巴结转移 36例,无淋巴结转移21例;肿瘤直径＜2 cm者23例, 2～5 cm者27例,＞5 cm者7例。

1.2 3种乳腺组织中sPLA 2-Ⅱa及cPLA2蛋白的检测 兔抗人sPLA2-Ⅱa及cPLA2多克隆抗体购自英国Abcam公司,SP免疫组织化学试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。采用免疫组织化学SP法,sPLA2-Ⅱa及cPLA2抗体稀释倍数为1∶200及1∶180,DAB显色,苏木素复染。染色步骤严格按说明书进行,阳性对照用已知阳性染色的胃癌组织切片,阴性对照用 PBS代替一抗孵育组织切片。sPLA2-Ⅱa及cPLA 2阳性信号呈黄色颗粒样物质,均位于细胞质内。高倍镜下随机选取 5个视野(每个视野观察细胞数不少于 200个),按阳性细胞所占百分比及着色深浅进行结果判定。结果取 2项评分之积,总分 ＜3分为阴性,≥3分为阳性[3-4]。

1.3 统计学处理 应用SPSS 13.0进行统计学分析,3种乳腺组织中及不同病理特征乳腺浸润性导管癌组织中 2种蛋白阳性表达率的比较采用 χ2检验,浸润性导管癌组织中 2种蛋白表达的关系通过计算Pearson列联系数评价,检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 3种乳腺组织中sPLA 2-Ⅱa和cPLA2蛋白的表达情况 sPLA2-Ⅱa蛋白阳性表达主要位于肿瘤细胞的胞质中,呈浅黄色至深黄色颗粒样物质;cPLA2蛋白阳性着色定位于细胞质,呈棕黄色或深黄色颗粒样物质。见图 1和表 1。

2.2 乳腺浸润性导管癌组织中sPLA 2-Ⅱa和cPLA 2蛋白表达情况与临床病理特征的关系 见表2。sPLA2-Ⅱa和cPLA2蛋白表达与乳腺浸润性导管癌组织的临床分期、组织学分级及有无淋巴结转移均有关。

2.3 乳腺浸润性导管癌组织中sPLA 2-Ⅱa与cPLA2蛋白表达的关系 结果见表3。

图1 正常乳腺(A)、乳腺纤维腺瘤(B)及乳腺浸润性导管癌(C)组织中sPLA 2-Ⅱa和cPLA 2蛋白的表达(SP,×200)1:sPLA 2-Ⅱa蛋白;2:cPLA2蛋白。

表1 3种组织中sPLA 2-Ⅱa及cPLA 2的表达 例(%)

表2 sPLA 2-Ⅱa及cPLA 2蛋白表达与乳腺浸润性导管癌临床病理特征的关系 例(%)

表3 乳腺浸润性导管癌组织中sPLA 2-Ⅱa及cPLA 2蛋白表达的关系 例

3 讨论

乳癌是最常见的恶性肿瘤之一,近年来其发病率呈逐年递增的趋势,且发病年龄也渐趋于年轻化。如何从分子水平来寻找乳腺浸润性导管癌可能的分子治疗靶点长期以来备受人们关注。该研究应用免疫组织化学技术对比了正常乳腺、乳腺纤维腺瘤及乳腺浸润性导管癌组织中cPLA2及sPLA2-Ⅱa蛋白的变化规律及其与乳腺浸润性导管癌临床生物学行为的关系。

PLA2的调节根据其存在部位、氨基酸顺序同源性和生化功能特征不同,可分为3种类型:sPLA2、cPLA2和Ca2+非依赖型磷脂酶A2(iPLA2)。sPLA2包括sPLA2-Ⅰ、Ⅱa、Ⅱb、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅸ和Ⅹ等,存在于胞质的颗粒中或在细胞受刺激后合成并释放至细胞外,对磷脂Sn-2位的脂肪酸无选择特异性;cPLA2广泛存在于体内各种组织细胞中,活化时需要 Ca2+的参与和上游激酶的磷酸化作用,并可优先选择性地水解磷脂Sn-2位释放氨基酸(AA)。sPLA2和cPLA2都表现出对Ca2+的高度敏感性;iPLA2包括iPLA2-Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ,iPLA2对AA没有优先选择性,不需Ca2+维持其催化活性。iPLA2-Ⅵ曾被认为参与细胞膜的重建,另外一些学者[5]认为 iPLA2-Ⅵ也参与细胞受刺激后的 AA释放过程。不同类型的PLA2结构、功能各有不同,但其生理生化特性却有许多相似之处。PLA2具有热稳定性,置于65℃环境中75min或90℃30min活性不变;易溶于水,但其水解聚集状态底物(如脂微团、单层和双层膜脂)的活力远远大于水解分散存在底物的活力,即其主要催化的是非均相反应;其底物分子排列方式影响酶活性。PLA 2可被许多物理、化学及生物因素激活,如机械损伤、内毒素、血管紧张素Ⅱ、泌乳素、缓激肽、凝血酶、氧自由基和抗原等。一些细胞因子,如IL-1、TNF、IFN、PAF也能激活PLA2。

sPLA 2-Ⅱa广泛地分布在哺乳动物的组织和细胞中,但酶的活性变化相当大[6]。取人组织标本提取液用放射化学法测定sPLA 2-Ⅱa的酶活性发现:消化道、软骨、腮腺和前列腺含大量sPLA2-Ⅱa,而在骨骼、骨骼肌、心、脑、肾、肝、肺、脾、胰腺、胎盘和羊膜中其活性却很低[7]。研究[8]表明,sPLA2-Ⅱa可被许多物理、化学、生物因素及一些细胞因子激活,sPLA2-Ⅱa可使膜磷脂Sn-2位的脂酰键水解后,通过环氧化酶及脂加氧酶途径,产生溶血磷脂及不饱和脂肪酸,它们既是信号转导的下游效应物,也可作为脂质炎症介质,参与机体的一系列生理病理过程。cPLA2广泛存在于人类各种组织中,其含量较sPLA 2-Ⅱa相对稳定,在肺和脑组织海马中含量略高。与sPLA2-Ⅱa一样,cPLA2的激活也受到许多物理、化学、生物因素及一些细胞因子的调节。在缺乏Ca2+升高的情况下,cPLA2也能被激活。cPLA2被激活后,水解磷脂,生成花生四烯酸等活性物质,启动炎症反应,引起机体多种疾病[9]。

该研究结果显示:sPLA2-Ⅱa和cPLA2在乳腺浸润性导管癌组织中的表达高于正常对照组织,表明sPLA2-Ⅱa和cPLA2参与了乳腺浸润性导管癌的发病过程,并可能在其中发挥重要作用。该研究结果还表明,不同组织分化程度及临床分期的乳腺浸润性导管癌中sPLA2-Ⅱa和cPLA2的表达亦不同,随组织分化程度降低,其表达增高。而肿瘤的分化程度和分期影响肿瘤的预后,提示sPLA2-Ⅱa和cPLA2与肿瘤的预后及生物学行为有关。另外淋巴结转移阳性组织sPLA2-Ⅱa和cPLA2表达高于阴性组织,说明sPLA2-Ⅱa和cPLA 2与乳腺浸润性导管癌的恶性程度有关。作者认为sPLA2-Ⅱa和cPLA2可作为影响乳腺浸润性导管癌浸润行为和预后评估的指标。但其作用的分子机制及其潜在的作用,还有待于进一步深入研究。

总之,对cPLA2及sPLA2-Ⅱa的深入研究有利于进一步了解乳腺浸润性导管癌的生物学特性,为乳腺浸润性导管癌的早期诊断和治疗提供新的发展方向。

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