达原颗粒质量标准研究

牛晓静,施钧瀚

(河南中医学院第一附属医院药学部,河南郑州 450000)

达原颗粒是本院院内制剂,由粉葛、柴胡、黄芩、厚朴等 8味中药组成,具有清热解表、除湿清导功效,临床被用于治疗小儿瘟疫头痛、发热恶寒、腹胀呕吐、食积化热、暑湿泄泻等。原质量标准(河南省食品药品监督管理局制剂注册批件第 2004Z01489号附质量标准)中只有其薄层鉴别。为了更好地控制该制剂的质量,笔者采用高效液相色谱法对葛根素的含量进行了测定[1],并对柴胡、黄芩、厚朴进行薄层鉴别,以期为该药的质量控制提供更有效的方法。

1 药品、试剂与仪器

达原颗粒(批号 100129,100224,100804)由医院制剂室提供,中药饮片由医院中药房提供。葛根素对照品(110752-200511)、黄芩苷对照品(110715-200815)、厚朴对照药材(121285-200301)、厚朴酚对照品(110729-200309)、和厚朴酚对照品(110730-200307)及柴胡对照药材(120992-200504),均由中国生物制品检定所提供;甲醇为色谱纯;水为纯净水;其他化学试剂均为分析纯。岛津LC-10ATVP型高效液相色谱仪,产地日本;SIL-20A自动进样器,产地日本;CLASS-VP色谱工作站,产地日本;Aglient Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6mm×250 mm,5μm),产地美国;超声波清洗器(功率250W,频率50 kHz),昆山市超声仪器有限公司产品。

2 薄层鉴别

2.1 柴胡的薄层鉴别

取本品 5 g,研细;加甲醇 20 m L,超声处理10min,滤过;滤液浓缩至约 5 m L,作为供试品溶液。同法处理缺柴胡阴性对照溶液。另取柴胡对照药材0.5 g,同法制成对照药材溶液。按照薄层色谱法(2010版《中国药典》附录VI B)进行试验。吸取上述3种溶液各5μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯-无水乙醇-水(8∶2∶1)为展开剂展开,取出,晾干,喷以 2%对二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液,在 60℃加热至斑点清晰,置日光及紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材及对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点或荧光斑点,阴性对照在相应位置上无斑点。见图1。

2.2 黄芩的薄层鉴别

按2.1项下方法制备供试品溶液及缺黄芩阴性对照溶液。另取黄芩对照药材 1 g,同法制成对照药材溶液;再取黄芩苷对照品,加甲醇制成每1 mL含1mg的溶液,作为对照品溶液。按照薄层色谱法(2010版《中国药典》附录Ⅵ B)进行试验。吸取上述3种溶液各 5μL,分别点于同一硅胶 G薄层板上,以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)为展开剂,饱和30 min,展开,取出,晾干,喷以 1%三氯化铁乙醇溶液,在日光下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;在与对照品色谱相应的位置上,显一相同的暗绿色斑点;阴性对照在相应位置上无斑点。见图 1。

2.3 厚朴的薄层鉴别

按 2.1项下方法制备供试品溶液、厚朴对照药材溶液及缺厚朴阴性对照溶液。另取厚朴酚、和厚朴酚对照品,加甲醇制成每1 m L各含1mg的混合溶液,作为对照品溶液。按照薄层色谱法(2010版《中国药典》附录ⅥB)进行试验。吸取上述两种溶液各 5μL,分别点于同一硅胶 G薄层板上,以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-甲酸(8∶2∶0.1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以 1%香草醛硫酸溶液,在 100℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点,阴性对照在相应位置上无斑点。见图 1。

图1 柴胡(A)、黄芩(B)、厚朴(C)鉴别薄层色谱图

3 含量测定

3.1 色谱条件

色谱柱为Aglient Eclipse XDB-C18柱(4.6mm× 250mm,5μm),流动相为甲醇-水(25∶75),检测波长250 nm,流速1.0 mL/m in,柱温30℃,进样量10μL。理论板数按葛根素峰计算应不低于 4 000。

3.2 供试品溶液的制备

取本品(批号100129)适量,研细,取2.5 g,精密称定,置50 mL容量瓶中,加入30%乙醇至刻度,超声提取30min,过滤,取续滤液即得。进样前过微孔滤膜即可。

3.3 对照品溶液的制备

葛根素对照品溶液的配制:取葛根素对照品适量,精密称定,加 30%乙醇溶解,制成每1 m L含葛根素82μg的溶液,即得。

3.4 阴性对照试验

按处方比例称取除粉葛以外的其余药材,按达原颗粒制备工艺制备,按 3.2项下方法制备阴性对照溶液。将供试品溶液,阴性对照溶液以及葛根素对照品溶液,分别注入液相色谱仪,按上述色谱条件进行测定。结果,阴性无干扰,见图 2。

图2 达原颗粒高效液相色谱图

3.5 标准曲线的绘制

分别精密吸取上述葛根素对照品溶液 1,2,4, 6,8,10,12μL,按上述色谱条件测定。以进样量(μg)为横坐标、峰面积积分值为纵坐标绘制标准曲线,得回归方程分别为Y=291 250 X-15 175(γ= 0.999 9)。结果表明,葛根素进样量在 0.082～0.984μg范围内进样量与峰面积积分值呈良好的线性关系。

3.6 精密度试验

吸取同—份供试品(批号100129)溶液,连续进样 5次,按上述色谱条件测定。结果:葛根素峰面积RSD=0.14%。结果表明该方法精密度良好。

3.7 重复性试验

取同一批样品(批号100129)适量,按3.2项下方法制备 6份供试品溶液,按上述色谱条件测定。结果:葛根素含量为0.25 mg/g,RSD=0.19%。结果表明该方法重复性良好。

3.8 稳定性试验

取同一供试品(批号100129)溶液,按上述色谱条件分别于 0,2,4,6,8 h测定葛根素面积积分值。结果:葛根素RSD=0.79%。结果表明供试品溶液在8 h内稳定。

3.9 加样回收率试验

取同一样品(批号100129)6份,每份精密称取1.25 g,分别加入 82 mg/L的葛根素对照品溶液4m L,按 3.2项下方法制得供试品溶液,依法测定,计算加样回收率。结果,葛根素平均回收率为98.88%,RSD=1.19%(n=6),见表1。

3.10 样品含量测定

分别取 3个批次的样品(批号 100129,100224, 100804),按 3.2项下方法制得供试品溶液,进样测定,按外标法计算含量。结果:3批样品中葛根素含量分别为0.25,0.23,0.26mg/g。结果表明葛根素在各批次间的含量差异较小,提示达原颗粒中葛根素含量稳定。

表1 葛根素加样回收实验结果 n=6

4 讨 论

在黄芩的薄层鉴别试验中,笔者曾采用《中国药典》方法[1]282,结果黄芩苷斑点的 Rf值较小,几乎在原点附近。后又参照文献[2]将样品点于硅胶G薄层板上,以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)为展开剂,结果分离效果较好,且阴性无干扰。有关厚朴的薄层鉴别,《中国药典》以甲苯-甲醇(27∶1)作展开剂,结果厚朴酚与和厚朴酚分离度较差,且甲苯有较大毒性。笔者经多次试验,选用石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-甲酸(8∶2∶0.1)为展开剂,分离效果好,试剂毒性小,且阴性无干扰。

在进行含量测定时,笔者针对供试品溶液的制备考察了以下两种提取方法:选择用 30%乙醇提取,分别采用加热回流及超声 30 min处理,结果所得葛根素含量差别不大。因为超声提取较为方便,且重复性好,所以采用30%乙醇超声30 min处理。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典:一部[M].北京:中国医药科技出版社,2010:272,282.

[2]卞艳晶,高延甲,王建.四季三黄片质量控制方法的研究[J].齐鲁药事,2010,29(1):20-22.