黄连合剂对大鼠长期毒性实验研究

张 瑜，崔志清

（天津医科大学药理学教研室，天津 300070）

黄连合剂主要成分为丹参、黄连、生地等。主治神经内分泌紊乱所致的心肌缺血症。主成份丹参的药理作用有活血祛瘀，凉血消痈，除烦安神[1-2]，用于胸腹或肢体瘀血疼痛、症瘕、痈肿疮毒、心烦失眠、冠心病、高血压等病症，生地也是一种具有强心作用的中药，但对它们毒理学方面的报道较少。为探讨黄连合剂长期服用的安全性，了解其对主要靶器官的毒性作用和无毒性反应剂量，为临床研究提供参考，笔者对其进行了长期毒性实验研究[3-6]。

1 材料与方法

1.1 药物 黄连合剂，褐色流浸膏，3.7g生药/g流浸膏，由天津市现代医药开发研究所提供。实验前用纯化水稀释成不同浓度的混悬液保存于0～4℃冰箱内备用。

1.2 动物 Wistar大鼠（SPF级）[7]，亚屏障环境，体重100～120g，雌雄各半，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证号：SCXK（京）2002—0003。

1.3 试剂 血液生化试剂盒由上海丰汇医学科技有限公司生产。目测八联试纸带，批号20050831，由广州花都高尔宝生物技术有限公司生产，粤药管械（准）字2000第2400020号（更）。

1.4 仪器 F-820血细胞记数仪（日本东亚医用电子株式会社），BECKMAN COULTER CX4PRO型全自动生化分析系统（美国贝克曼库尔特有限公司），樱花滑走式切片机、樱花PS-52伸展机、樱花RH-12EP脱水机、樱花DRS-601-A自动染色机（日本大和光机工业株式会社），日本NIKON-OPTIPHOT（X型）照相显微镜（日本尼康株式会社），TS1000单通道凝血分析仪（美德太平洋精密仪器有限公司），血清Na+、K+、Cl-测定仪（美国Medica Corporation）。

1.5 方法 健康无伤大鼠160只，雌雄各半，随机分成对照组及黄连合剂30.0、15.0、7.5g生药/kg 3个剂量组，每组40只，分别相当于成人用量的50、25、12.5倍。按10mL/kg的给药体积，每天定时灌胃给药1次，每周6d，连续给药26周，对照组给予等体积纯化水。各组大鼠于给药前开始每周称体重1次，并观察进食、排便及一般体征。在连续给药26周后，各组动物于末次给药后24h，眼眶内取血（20μL/只），用血细胞计数仪测定红细胞、血红蛋白、血小板、白细胞分类计数、网织红细胞计数等指标。末次给药24h后，乙醚麻醉后经股动脉取血5mL，离心，取血清测定白蛋白（ALB）、尿素氮（BUN）、总胆固醇（CHOL）、肌酐（CREA）、血糖（GLU）、总胆红素（TBIL）、总蛋白（TP）、碱性磷酶（ALP）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、肌酸激酶（CK）、甘油三酯（TG）、血清Na+、K+、Cl-共15项生化指标[8]。同时剖取心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、睾丸、附睾、子宫（卵巢）、脑称重，计算各脏器重量及系数。并将上述脏器与胃和食道、气管、胰腺、十二指肠、膀胱、前列腺、甲状腺、唾液腺、垂体、坐骨神经、延髓、脊髓、主动脉、肠系膜淋巴结、乳腺、胸骨等一起用10%甲醛溶液固定，石蜡包埋，常规制片，HE染色后进行病理形态学检查。实验结果用生物统计软件进行统计。

2 结果

2.1 一般状况及尿常规检查 各剂量组大鼠饮水、摄食量、尿量、排便量、体重及尿常规检查结果与对照组比较无明显差异。

2.2 血液学检查 各剂量组大鼠血液学各项检测结果与对照组比较无明显差别。结果见表1、2。

表1 黄连合剂对雌性大鼠血液学的影响（±s）Tab 1 Effects of coptis mixture on the hematology of female rats

表1 黄连合剂对雌性大鼠血液学的影响（±s）Tab 1 Effects of coptis mixture on the hematology of female rats

对照组8.44±1.477.97±0.72150.10±16.14870.00±143.3010.68±0.6517.19±4.3877.00±6.57项目白细胞(×109/L)红细胞(×1012/L)血红蛋白(g/L)血小板(×109/L)凝血酶原时间（s）网织红细胞(‰)淋巴细胞(%)给药组(生药g/kg) 7.57.71±1.838.16±0.71152.10±22.40933.10±110.1410.20±0.6214.33±3.8876.60±8.3315.07.44±2.058.07±1.04157.10±13.55830.10±114.2210.82±0.4916.92±1.9876.90±6.7230.08.30±1.497.63±0.81151.10±13.62836.20±132.1310.49±0.7214.93±4.4676.80±4.78

表2 黄连合剂对雄性大鼠血液学的影响（±s）Tab 2 Effects of coptis mixture on the hematology of male rats

表2 黄连合剂对雄性大鼠血液学的影响（±s）Tab 2 Effects of coptis mixture on the hematology of male rats

项目白细胞(×109/L)红细胞(×1012/L)血红蛋白(g/L)血小板(×109/L)凝血酶原时间（s）网织红细胞(‰)淋巴细胞(%)对照组10.20±2.758.69±1.42153.80±19.80940.40±212.7310.64±0.6714.42±3.5076.50±5.74给药组(生药g/kg) 7.510.68±1.769.33±1.15162.80±18.981034.30±134.359.86±0.8717.29±7.5278.80±8.3515.010.86±1.099.39±0.98160.50±20.20946.70±107.6610.21±1.3812.96±3.9876.60±7.1530.011.04±1.649.05±1.31162.10±20.67964.00±171.5710.72±0.7716.18±6.3378.20±8.66

2.3 血液生化学检查 给药26周后，雌性大鼠中剂量组肌酐升高，雄性大鼠低剂量组甘油三酯略有升高，其他指标各给药组与对照组间无显著性差别。结果见表3、4。

表3 黄连合剂对雌性大鼠血液生化学的影响（±s）Tab 3 Effects of coptis mixture on the blood biochemistry of female rats

表3 黄连合剂对雌性大鼠血液生化学的影响（±s）Tab 3 Effects of coptis mixture on the blood biochemistry of female rats

与对照组比较 **P<0.01

项目ALB(g/L) BUN(mmol/L) CHOL(mmol/L) CREA(μmol/L) GLU(mmol/L) TBIL(μmol/L) TP(g/L) ALP(IU/L) ALT(IU/L) AST(IU/L)对照组23.20±2.047.45±1.260.83±0.1961.1±9.024.69±0.546.18±2.1272.50±7.9935.80±7.8440.00±4.81141.90±19.54给药组(生药g/kg) 7.524.00±2.408.66±0.980.88±0.1068.70±7.244.94±0.387.76±1.4678.60±5.1732.30±7.7335.80±6.73144.80±11.9815.022.00±2.008.45±0.790.76±0.2071.50±6.24** 4.58±0.616.19±1.5778.00±5.3132.20±8.6134.20±7.38143.10±9.0030.023.80±2.498.11±1.350.86±0.2166.70±6.314.79±0.976.30±1.8379.30±6.1531.20±11.7136.40±4.68129.70±32.42

表4 黄连合剂对雄性大鼠血液生化学的影响（±s）Tab 4 Effects of coptis mixture on the blood biochemistry of male rats

表4 黄连合剂对雄性大鼠血液生化学的影响（±s）Tab 4 Effects of coptis mixture on the blood biochemistry of male rats

给药组(生药g/kg)项目ALB(g/L) BUN(mmol/L) CHOL(mmol/L) CREA(μmol/L) GLU(mmol/L) TBIL(μmol/L) TP(g/L) ALP(IU/L) ALT(IU/L) AST(IU/L)对照组20.00±1.947.42±1.431.24±0.3362.90±17.655.24±0.946.16±1.9175.70±6.3173.60±37.2258.90±42.05152.90±55.947.518.30±1.577.67±0.911.44±0.4156.30±7.185.38±0.516.12±1.5770.90±4.9874.83±14.0841.60±6.43114.50±12.9315.019.50±2.127.65±1.251.20±0.3360.90±9.675.37±0.606.17±1.1877.20±4.3267.10±19.6637.50±4.20141.30±26.9330.018.80±1.328.32±1.051.15±0.2464.40±6.855.11±0.476.10±1.5273.50±4.8150.50±6.0248.10±9.77151.20±19.79

2.4 病理组织学观察 大体观察各组大鼠主要脏器未见明显病变。光镜下检查各剂量组与对照组肝、肺间质组织均可见轻度炎细胞浸润，但相比较并无显著性差别。见图1。

图1 黄连合剂对大鼠长期毒性实验病理组织学照片Fig 1 The histopathological pictures of the animals in long-term toxicity test

2.5 对脏器重量及系数的检查 各组大鼠的脏器系数及脏器重量与对照组比较无显著差别。

3 讨论

连续26周大鼠反复灌胃给予相当于人临床拟用日剂量的50、25和12.5倍的不同浓度同体积的黄连合剂混悬液后，雌、雄动物体重、尿量、排便量、饮水量、摄食量及一般体征与对照组比较均无明显差异。血液学测定中，给药26周后各项检测指标与对照组比较均无明显差异。血液生化学检查中，给药26周后，雌性动物中剂量组肌酐升高，雄性动物低剂量组甘油三酯略有升高，虽有统计学意义，但因未见剂量相关性与性别相关性，故认为不具有临床毒理学意义。其他指标与对照组比较未见明显差异。这些指标表明该药对大鼠的肝脏、肾脏、血糖无明显影响。脏器重量及脏器系数检查，各剂量组动物脏器重量和脏器系数与对照组比较无显著差别。病理组织形态学检查中，大体观察各组动物主要脏器未见明显病变。光镜下检查各剂量组与对照组肝、肺间质组织均可见轻度炎细胞浸润，但相比较并无显著性差别，所以并不具有毒理学意义。

综合以上结果，在本实验条件下对大鼠黄连合剂26周反复灌胃给药后，在其心、肝、脾、肺、肾等主要器官未见明显毒性反应。本品的无毒性反应剂量定为7.5g生药/kg。

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