川东獐牙菜中苦龙苷含量测定研究＊

(重庆理工大学药学与生物工程学院，重庆 400050)

川东獐牙菜 Swertia davidi Franch.又名水灵芝，属龙胆科獐牙菜属植物，为民间传统中草药，主要化学成分有环烯醚萜类、三萜类、黄酮类和酮类，临床用于治疗黄疸型肝炎、痢疾等[1]。徐康平等[2－3]报道了测定川东獐牙菜中多种成分含量的高效液相色谱法及其药材指纹图谱研究，笔者在此基础上建立了川东獐牙菜中苦龙苷的含量测定方法，现报道如下。

1 仪器与试药

Waters高效液相色谱仪，包括Waters 1525型二元泵，Waters 2487型紫外检测器;Breeze液相色谱工作站。苦龙苷对照品(本试验室自制，经紫外、红外、质谱和NMR光谱鉴定为苦龙苷，含量为99.75%);川东獐牙菜药材(购于重庆市桐君阁药材市场，由重庆理工大学傅善权副主任技师鉴定为龙胆科獐牙菜属植物川东獐牙菜 Swertia davidi Franch.);甲醇为色谱纯，水为三蒸水，并经 0.45 μm滤膜滤过。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验[4－5]

色谱柱:Hypersil C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:甲醇－水(50∶50);检测波长:227 nm;流速:1 mL/min;柱温:室温。在此色谱条件下，对照品溶液与供试品溶液的色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

2.2 溶液制备

精密称取一定量苦龙苷对照品，用甲醇溶解，使其质量浓度为0.33 g/L，用 0.45 μm 滤膜滤过，即得对照品溶液。称取粉碎的川东獐牙菜全草1.0 g，加10 mL甲醇，超声处理30 min，滤过，收集滤液，滤渣加8 mL甲醇，超声处理30 min，同法提取2次，收集、合并滤液，吸取滤液1 mL，用0.45 μm滤膜滤过，即得供试品溶液。

2.3 方法学考察

线性关系考察:取对照品溶液，分别进样 2，4，6，8，10，12 μL，测定峰面积。以峰面积(Y)对进样量(X)进行线性回归，得苦龙苷回归方程 Y=3×106X－320 473，r=0.999 6(n=6)。结果表明，苦龙苷进样量在0.33～3.96 μg范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:取对照品溶液10 μL，连续进样6次，测量峰面积。结果的 RSD=0.90%(n=6)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:取同一供试品溶液 10 μL，分别在 0，2，4，8，16，24 h时进样，测定苦龙苷的峰面积。结果的 RSD=0.89%(n=6)，表明供试品溶液在24 h内稳定。

重现性试验:取同一批样品，按供试品溶液制备方法配制6份溶液，分别进样 10 μL，测定苦龙苷含量。结果的 RSD=1.20%(n=6)，表明方法重现性较好。

加样回收试验:取同一样品9份，分别按高、中、低3个量级加入苦龙苷对照品，按供试品溶液制备方法制备溶液，进样10 μL测定含量，计算回收率。结果见表1。

表1 苦龙苷加样回收试验结果(n=9)

2.4 样品含量测定

取不同批号的3批川东獐牙菜药材，按供试品溶液制备方法制备溶液，分别进样10 μL(n=3)，测定峰面积，计算含量。结果批号为100105，100122，100123的3批药材中，每100 g药材分别含苦龙苷 0.324，0.341，0.332 g(n=3)。

3 讨论

取对照品溶液在190～400 nm波长范围内扫描，结果苦龙苷在227 nm波长处有一特征吸收峰，因此选择227 nm作为测定波长。试验中比较了回流、超声、冷浸3种提取方法，其中超声提取法操作方便，短时间即可获得满意效果;还考察了氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇5种溶剂，以甲醇超声提取效果为好。

[1]全国中草药汇编编写组.全国中草药汇编(下册)[M].北京:人民卫生出版社，1975:388.

[2]徐康平，李福双，谭健兵，等.高效液相色谱法测定川东獐牙菜中多种成分的含量[J].药物分析杂志，2005，25(1):14－16.

[3]徐康平，李福双，谭健兵，等.川东獐牙菜药材的HPLC指纹图谱初步研究[J]. 中南药学，2004，2(1):10.

[4]纪兰菊，保 怡，陈桂琛，等.15种獐牙菜属植物中主要药用成分的高效液相色谱测定[J].西北植物学报，2004，24(7):1 298－1 302.

[5]郑一敏，周 惠，胥秀英，等.HPLC法测定川东獐牙菜1，8－二羟基－3，7－二甲氧基酮含量[J].中国药业，2008，17(20):17－18.