基质金属蛋白酶组织抑制因子-1、2在宫颈鳞癌中的表达及意义*

南云泽 刘丽利 林贞花 金仁顺

宫颈癌是妇女最常见的恶性肿瘤之一，全球范围内宫颈癌的发病率虽有下降趋势，但仍是恶性肿瘤造成妇女死亡的第二位因素。肿瘤细胞侵袭和转移是宫颈癌患者死亡的根本原因。控制肿瘤的侵袭和转移是当前研究的重点。基质金属蛋白酶(MMPs)可降解细胞外基质和基底膜，是与肿瘤侵袭、转移关系最为密切的一类蛋白水解酶，而MMPs活性又可被基质金属蛋白水解酶组织抑制因子（tis⁃sue inhibitor of matrix metalloproteinase，TIMPs）所抑制。本文旨在应用免疫组化技术检测TIMP-1和TIMP-2在宫颈鳞癌组织中的表达情况，并探讨其与宫颈癌生物学行为的关系，从而明确其在肿瘤侵袭转移过程中的作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料 标本选自2001年7月—2009年7月我院妇产科住院手术切除的组织，其中宫颈鳞癌标本（鳞癌组）46例，年龄22～59岁，平均年龄（42.89±7.16）岁，临床分期采用国际妇产科联盟（FIGO）2000年修订的标准[1]。宫颈原位癌标本（原位癌组）34例，年龄25～64岁，平均年龄（38.97±8.09）岁。选取20例同期因子宫肌瘤行子宫切除的正常宫颈标本作为对照组，年龄25～64岁，平均年龄（40.25±8.90）岁。全部病例在术前均未接受放疗、化疗，临床及病理资料完整。3组间年龄比较差异无统计学意义（F=2.56,P＞0.05）。

1.2 主要试剂 兔抗人TIMP-1免疫组化多克隆抗体（40282Ra），兔抗人TIMP-2免疫组化多克隆抗体（40283Ra），即用型快捷免疫组化MaxvisionTM试剂盒（鼠/兔），DAB显色试剂盒，均购自福州迈新生物技术有限公司。

1.3 染色方法 所有标本均经10%中性福尔马林固定，常规石蜡包埋，4 μm厚连续切片，并行常规HE染色经病理科专家阅片复诊。免疫组织化学MaxvisionTM法严格按试剂盒说明书进行，DAB显色，苏木素复染，封片后用光学显微镜观察。同时设置阴性对照（用PBS代替一抗），阳性对照用已知阳性片。

1.4 结果判定标准 TIMP-1、TIMP-2蛋白阳性信号呈棕黄色颗粒样，位于细胞质内。观察全片，按阳性细胞所占百分比及着色程度进行结果判定[2]。按阳性细胞比例判定：阳性细胞≤10%1分，10%～50%2分，＞50%3分；按染色程度判定：阴性为0分，淡黄色1分，中度黄色2分，棕黄色3分。按阳性细胞得分×染色程度得分计总分，总分＜3为阴性，≥3为阳性。

1.5 统计学处理 采用SPSS 17.0统计软件，计数资料比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 宫颈病变组织中TIMP-1和TIMP-2蛋白的表达 TIMP-1和TIMP-2蛋白在原位癌组及鳞癌组的阳性表达率均较高，与对照组比较差异均有统计学意义（P＜0.05），但鳞癌组与原位癌组比较差异无统计学意义（P＞0.05），见表1，图1～6。

2.2 TIMP-1和TIMP-2蛋白的表达与子宫颈鳞癌临床病理特征的关系 不同临床分期和病理类型的患者TIMP-1和TIMP-2蛋白的阳性表达率差异无统计学意义（P＞0.05），有无淋巴结转移的患者TIMP-2阳性表达率差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表1 TIMP-1及TIMP-2在不同宫颈组织中的阳性表达例（%）

图1 宫颈鳞癌TIMP-1（MaxvisionTM×100）

图2 宫颈鳞癌TIMP-2(MaxvisionTM×100)

图3 宫颈原位癌TIMP-1(MaxvisionTM×100)

图4 宫颈原位癌TIMP-2(MaxvisionTM×100)

图5 正常宫颈上皮TIMP-1(MaxvisionTM×100)

图6 正常宫颈上皮TIMP-2(MaxvisionTM×100)

表2 宫颈鳞癌TIMP-1及TIMP-2的免疫组化结果

3 讨论

浸润和转移是恶性肿瘤的典型特征，是导致肿瘤患者死亡的主要原因。肿瘤的浸润与转移是一个动态的、复杂的、多步骤的过程，其中细胞外基质的降解是肿瘤浸润正常组织及开始转移的基本途径，基质金属蛋白酶为降解细胞外基质的一组最重要的酶，该过程对肿瘤细胞的浸润以及相继发生的转移较为重要。而其中与妇科恶性肿瘤关系较为密切的为MMP-2和MMP-9，同时MMPs活性又受到其抑制剂的调节，MMP-2、MMP-9的特异性组织抑制剂分别为TIMP-2和TIMP-1[3]。有研究表明，对MMPs的适当抑制和调控可以对肿瘤细胞的侵袭和转移进行控制，阻断肿瘤血管的生成，从而阻断肿瘤的生长和发展[4]。本研究表明，TIMP-1和TIMP-2蛋白在鳞癌组和原位癌组的阳性表达率均高于对照组，这表明在细胞发生癌变过程中TIMP-1、2起着重要的作用。但鳞癌组与原位癌组比较差异无统计学意义，可推测在子宫颈鳞癌的发展过程中TIMP-1、2的表达是一早期事件。

宫颈癌的转移方式主要是淋巴道转移，临床上也是以有无淋巴结的转移来判断预后和指导临床治疗。有无淋巴结转移的宫颈鳞癌患者TIMP-2阳性表达率差异有统计学意义，提示TIMP-2在宫颈鳞癌的肿瘤细胞的浸润和转移中起抑制作用。在宫颈鳞癌中TIMP-1的阳性表达率较原位癌组低，但有无淋巴结转移的宫颈鳞癌患者TIMP-1阳性表达率差异无统计学意义。据此推测，TIMP-1对于肿瘤细胞的浸润和转移是一双向调节因子。有报道，TIMP的超表达与恶性肿瘤的侵袭转移行为呈正相关[5]。也有研究表明TIMP-1对肿瘤的侵袭既有保护作用又有抑制作用，这依赖于肿瘤的TIMP-1的基因型而不是宿主本身[6]。在以后的研究中，笔者要对其进行深入研究，从而进一步确定TIMP-1是否能够作为治疗肿瘤的药物用于临床。

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