胃乐散对急性化脓性梗阻性胆管炎大鼠肝脏的保护作用*

舒 涛,范振海,吴 芹,杨桂荷,余丽梅,兑丹华

急性梗阻性化脓性胆管炎（acute obstructive suppurative cholangitis,AOSC）是胆管感染中一种严重的疾病,具有发病急骤、病情凶险、变化快速、并发症多、病死率高等特点。尽管近年来在外科手术治疗的基础上,综合采取抗生素治疗、重症监护和营养支持等手段大大提高了该病的治疗效果,但仍有较高的病死率[1-2]。

AOSC基本发病因素为胆管梗阻和细菌感染,除引起胆管梗阻、胆汁淤积外,且有其他系统和器官的损害,病变发展至后期常伴休克和多器官功能衰竭。肝损害被认为是其中较突出的一种表现。应充分认识胆石病导致肝脏损害的危害性,及早采取外科手术解除胆管梗阻,并控制感染,减低患者的肝脏损害,可显著改善患者的预后和降低病死率[3-4]。

胃乐散（wei-le-san,WLS）在贵州省黔东南地区民间用于胃炎、胆绞痛、腹泻的治疗,治疗胃脘痛效果良好。实验研究表明,WLS对消化性溃疡具有较好的治疗作用,并可调节胃肠运动功能[5-6]。

本研究旨在观察WLS对AOSC治疗作用、减低血清胆红素水平、减轻胆管损伤的同时,进一步观察WLS对AOSC模型大鼠肝脏损伤的保护作用。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 清洁级Wistar大鼠32只,由第三军医大学实验动物中心提供,合格证书号为SCXK2002008。

1.1.2 试剂与药品 WLS主要由白芍、苍术、元胡、肉桂等中药组成,药材购于遵义医学院附属医院中药房,由遵义医学院药理教研室根据民间验方制成散剂,用时将WLS用蒸馏水配成2%和4%的混悬液,4℃储存备用。大肠杆菌Fischerichin菌株25922由微生物学教研室张德刚老师馈赠。大肠杆菌培养液（蛋白胨10g、氯化钠5g、琼脂20g、伊红美艳琼脂20g、量筒量取牛肉膏1000mL；将蛋白胨10g、氯化钠5g、牛肉浸膏溶液,于pH值7.6～7.8范围之间灭菌、分装、储存备用）。1.1.3 主要仪器设备 TDGC2J-0.5超净工作台（上海先锋电器厂）、SHA-C控温水浴振荡器（深圳天南海北实业有限公司）、全自动生化分析仪（日本Olympus,Au2700型）、电子分析天平（德国Sartarius）等。

1.2 方法

1.2.1 实验动物与分组 雄性大鼠32只,体质量（250± 20）g,适应性喂养1周后,将大鼠随机分成4组,分别为假手术组、模型组、WLS低剂量组（0.2g/kg）、WLS高剂量组（0.4g/kg）,每组8只,分笼喂养。

1.2.2 细菌溶液的制备 大肠杆菌转种于琼脂蛋白胨斜面培养基,37℃恒温培养24h后。无菌生理盐水洗涤,离心沉淀后加适量生理盐水,用Brown氏细菌数量比浊管比浊配成稀释液,含菌量为1.0×109cfu/mL。

1.2.3 AOSC大鼠模型制备 制模前禁食12h,但不禁水,以10%水合氯醛腹腔麻醉（0.35mL/100g）,仰卧位固定,参照文献[4-7]的方法,分离胆总管,经胆管插管向胆总管内注入大肠杆菌O25922稀释液0.2mL后,不完全结扎胆总管制备AOSC大鼠模型。假手术组分离胆总管,但不注射大肠杆菌,也不结扎胆总管,分层缝合腹腔、腹壁。术后当天,各组分别灌胃给予生理盐水及相应药物,每天2次。

1.2.4 血液生化检测 术后72h后,予水合氯醛麻醉大鼠,颈总动脉取血1.5mL,注入EDTA-K2抗凝管中,送遵义医学院附属医院检验科检测反应肝功能指标的亮氨酸氨基转移酶（aminoleucine transferase,ALT）,天冬氨酸氨基转移酶（aspartate transaminase,AST）和总胆红素（total bilirubin,TBIL）。

1.2.5 胆管和肝脏病理学检查 术后72h后,颈动脉放血处死大鼠,肉眼检查胆管和肝脏的大体病理学变化,并取肝组织置于10%的中性甲醛中固定过夜,常规石蜡包埋,切片,乙醇梯度脱水,HE染色,二甲苯透明,中性树胶封片,于光镜下观察肝脏组织结构的病理变化。

1.3 统计学处理 实验数据按完全随机对照设计的要求收集整理,所有数据以±s表示,全部数据采用SPSS13.0统计软件进行ONE-WAY ANOVA处理,两组间均数比较用t检验,以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 WLS对AOSC模型大鼠肝功能的影响 与假手术组相比,模型组及各给药组血清中反应肝功能的重要指标ALT和AST水平显著升高（P＜0.01）；经WLS治疗72h后,与模型组比较,WLS低剂量组血清中ALT、AST水平明显降低（P＜0.05）,高剂量组有下降的趋势,但差异无统计学意义（P＞0.05）,见表1。

表1 WLS对急性化脓性梗阻性胆管炎大鼠血ALT和AST水平的影响±s,n=8）

表1 WLS对急性化脓性梗阻性胆管炎大鼠血ALT和AST水平的影响±s,n=8）

*：P＜0.05,**：P＜0.01,与模型组比较；#：P＜0.01,与假手术组比较。

组别 ALT（U/L） AST（U/L）假手术组 42.88±17.47** 118.38±29.99**模型组 1113.75±569.15 2569.12±703.85WLS低剂量组 593.00±72.73*# 1558.62±349.53*#WLS高剂量组 626.25±339.27# 2119.75±418.79#

2.2 WLS对AOSC模型大鼠TBIL水平的影响 与假手术组相比,模型组和WLS高、低剂量组TBIL水平显著升高（P＜0.01）；WLS低剂量组治疗72h后,与模型组相比,TBIL水平显著降低（P＜0.01）,而WLS高剂量组TBIL水平却无显著变化（P＞0.05）,见表2。

表2 WLS对急性化脓性梗阻性胆管炎大鼠血TBIL水平的影响（±s,n=8）

表2 WLS对急性化脓性梗阻性胆管炎大鼠血TBIL水平的影响（±s,n=8）

*：P＜0.01,与模型组比较；#：P＜0.01,与假手术组比较。

组别 TBIL（μ mol/L）假手术组 1.35±0.65*模型组 155.62±17.10WLS低剂量组 112.32±17.38*#WLS高剂量组 148.26±36.20#

2.3 WLS对AOSC模型大鼠肝脏组织形态学改变的影响模型组大鼠制模后72h剖腹,肉眼可见胆总管扩张,肝脏肿大淤血,颗粒增粗,肝脏表面有较多散在脓苔；光镜下观察可见胆总管上皮的明显破坏和组织水肿,肝细胞出现不同程度的空泡变性和坏死,有的融合成片,汇管区大量炎细胞浸润,中央静脉及肝窦充血；胆小管扩张、淤胆。而假手术组大鼠胆总管和肝脏肉眼未见明显异常,镜下见肝小叶结构正常,肝细胞排列呈索状,无坏死及变性,肝窦无扩张,血管及胆管结构正常。WLS高、低剂量组大鼠肝脏肿大程度减轻,肝脏表面脓苔减少,肝组织结构保持较好,点、片状肝细胞变性、坏死明显减少,炎细胞浸润也减少（封3图1）。

3 讨论

胆石病对肝脏的损害主要发生在原发性胆管结石病,这些损害及其并发症常构成复杂的肝外科问题。AOSC患者死亡尸解肝脓肿发生率可高达80%以上,持久的胆管梗阻可造成阻塞胆管范围的肝内胆汁淤积,肝实质细胞破坏,胆汁性肝硬化和肝叶、肝段的纤维化、A LT升高等[8]。临床和动物实验研究均已报道,随着急性胆管炎病程的发展,肝损害也随时间延长而加重,可形成肝脓肿,直接与血行途径,以及血行与直接途径相互影响,引起肝细胞损伤,降低肝功能,引起胆红素沉积,导致肝功能衰竭等[9-10]。

本实验采用胆管插管注入大肠杆菌的方法并结扎大鼠胆管建立急性化脓性胆管炎实验模型。制模72h后,模型组大鼠血清中ALT、AST、TBIL水平均显著高于假手术组,光镜下见胆总管扩张,肝、胆组织出现大量片状坏死等显著病理变化,证明在AOSC模型成功建立的基础上,由于胆管的阻塞,产生了明显的肝损害,并导致了肝功能的明显降低。值得注意的是,尽管WLS高、低剂量组之间,反应肝功能变化的大鼠血清ALT、AST水平无显著差异,但 WLS低剂量组大鼠血清ALT、AST、TBIL水平较模型组均显著降低。且肝脏的组织病理学检查进一步证实,WLS高、低剂量组大鼠肝脏肿大程度减轻,肝脏表面脓苔减少,肝小叶结构保持较好,肝细胞坏死明显减少,以WLS低剂量组改善更为明显,表明WLS对AOSC引起的肝损伤具有明显的保护作用。提示在AOSC外科解除胆管梗阻治疗前后,合理配合中药治疗[10-11],在减轻胆管损伤、保护肝脏等方面WLS可能具有良好的应用前景。

文献报道WLS组方中苍术所含的苍术挥发油具有利尿、抗炎症、镇痛等作用；苍术具有保肝,并对大肠杆菌等有较好的杀灭作用[12-13]。肉桂对大肠杆菌、痢疾杆菌等有明显抑制作用,并可促进血液循环、发挥抗炎作用等。白芍及其有效成分具有抗炎、保肝、免疫调节等作用[14-15],这些可能是WLS发挥其减轻AOSC引起肝损伤作用的基础。至于高剂量组效果不如低剂量组,可能由于随着剂量增加WLS增高上述指标的活性成分开始发挥作用,但其确切机制有待深入研究。

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