淋巴细胞主动免疫治疗原因不明复发性流产的效果观察

邢志艳 谭 欣 王金旺 贾永强 高立廷

内蒙古自治区计划生育科学技术研究所(赤峰，024000)

近年来国内各大医疗及科研单位采用丈夫或男性第三者淋巴细胞皮内注射主动免疫方法治疗原因不明复发性流产(URSA)，本所采用此方法进行了治疗，并观察其临床效果。

1 对象与方法

1.1 对象与标准

1.1.1 主动免疫组 选择2006年6月 ～2011年1月来本所诊治的URSA患者62例，均经过详细询问病史及系统检查。对象平均年龄29.98(21～43)岁。2次流产31例，3次流产21例，4次流产10例。妊娠＜12周自然流产56例，妊娠≥12周流产6例。无死胎、死产及活产史。夫妻染色体正常，女性生殖道无畸型，抗人白细胞抗原I类(HLA－I)抗体检测阴性，内分泌激素指标正常，抗精子抗体、抗子宫内膜抗体、抗心磷脂酶抗体均阴性，TORCH检测均阴性，女方血型为O型查抗体效价。男女双方均无生殖道感染，男性精液正常，男方无抗精子抗体。

1.1.2 对照组 同期选择22例URSA患者作为对照组，选择标准同主动免疫组。平均年龄29.10(22～41)岁。2次流产12例，3次流产7例，4次流产3例。妊娠＜12周自然流产18例，妊娠≥12周流产4例。再次妊娠后采用传统保胎方法(肌注黄体酮+hCG)。

1.2 方法

1.2.1 淋巴细胞来源 淋巴细胞来自URSA患者丈夫或者第三者(男性)，检查人免疫缺陷病毒(HIV)、梅毒螺旋体、肝炎病毒为阴性。

1.2.2 主动免疫治疗 无菌条件下，抽取丈夫/第三者男性外周血20ml，加入肝素10ml，生理盐水10ml混匀，静置30min，经淋巴细胞分离液分离淋巴细胞(离心条件:1 800r/min)，然后吸取富含淋巴细胞的白膜层，洗涤两次(700r/min)，每次洗涤前将管内细胞轻轻摇匀以防结块，加入适量生理盐水，将淋巴细胞浓度调整为(20～40)×106/ml，混匀备用。在计划妊娠前2～3个月开始注射，即吸取淋巴细胞悬液，在患者前臂内侧注射6个点，每个点0.2ml，间隔3周1次，3次为1疗程，治疗过程中避孕。疗程结束后复查HLA－I，阴性者继续进行下一疗程，直至HLA－I阳性后，鼓励患者3个月内受孕。如获妊娠则按上述疗法追加治疗1次;如未妊娠则排除其他因素引起的不育症后，重新治疗。

1.2.3 传统保胎治疗方法 确定宫内妊娠后，自妊娠5周起，肌注黄体酮 20～60mg/d·次 +hCG 1 000U 2日1次，连用1～2周。

1.3 妊娠成功指标

妊娠超过28周，B超未见异常或分娩活婴。

2 结果

2.1 一般情况

两组对象年龄、流产次数、流产时妊娠时间差异无统计学意义(P＞0.05)。

2.2 治疗效果

主动免疫治疗组62例中有48例妊娠成功(包括足月分娩39例，早产9例)，14例失败，妊娠成功率为77.42%;而未经主动免疫治疗的对照组22例中5例妊娠成功(足月分娩)，17例失败，妊娠成功率为22.73%。两组比较差异有统计学意义(χ2=20.854，P ＜0.05)。

3 讨论

复发性自然流产(RSA)发病原因复杂，包括遗传、内分泌、解剖、感染、自身免疫因素，但仍有50%～60%以上的患者原因不明，称为URSA［1］。1981年Taylar对4例抗丈夫淋巴细胞抗体(APLA)阴性的URSA患者进行免疫治疗，有3例成功分娩，从而引起围生学界的广泛关注［2］。妊娠是一种同种异体移植，正常妊娠时，因受丈夫HLA受体致敏，妻子T、B淋巴细胞产生抗HLA受体的自身抗体，它存在于妊娠期妇女血清中，可抑制针对丈夫HLA特异性抗体的淋巴细胞毒活性，抑制异体移植的排斥，使孕妇免于流产。从近代生殖免疫学观点看来，URSA可能是由于患者对胚胎父系HLA抗原的免疫低反应性所致，即患者由于对胚胎同种异体抗原无法产生足够的封闭抗体，而使胚胎得不到免疫防护而流产［3］。采用皮内注射丈夫/第三者男性的淋巴细胞免疫治疗后，封闭抗体阳性率明显增高，再次妊娠的患者中，封闭抗体阳性者妊娠成功率明显高于阴性者，说明免疫治疗后，封闭抗体产生增加母体免疫耐受，胎儿易于存活，妊娠成功率提高。另外，免疫治疗后，部分封闭抗体阴性者妊娠也获得成功。可能是因为主动免疫治疗使这些患者诱发了由细胞免疫参与的免疫抑制，使封闭效应增强所致［4］。关于主动免疫的作用机制现在尚未研究清楚，随着生殖医学的发展，URSA的发病机制及主动免疫治疗的机制将会得到进一步阐明。

本组62例经淋巴细胞主动免疫治疗的URSA患者妊娠成功率(77.42%)，高于对照组的妊娠成功率(22.73%)，证实主动免疫方法是有效的。该方法技术简单，成功率高。应让患者了解主动免疫的意义、注意事项及方法等，取得患者的信任感，使患者以乐观的态度配合主动免疫治疗。

1 刘艳秋，仓娟，周萍.原因不明反复自然流产患者的主动免疫治疗［J］.江西医药，2009，44(2):299.

2 李带莉.30例原因不明性反复自然流产患者免疫治疗的临床分析［J］.国际医疗卫生导报，2005，11(24):39.

3 Chaichian S，Shoaes S，Sanm iA，et al.Factors influencing success Rate of leukocyte inmunization and anti－paternal antibodies in spontaneous recurrent miscarriage［J］.Am J Reprod lmmnnol，2007，57(3):169－176.

4 Komolos L，Vardimon D，Notmann J，et al.Mixed maternal－paternal lymphocyte cultures before and after immunotherapy for recurrent spontaneous abortions［J］.Am J Reprod lmmnnol，1996，35(1):30－33.