茶叶对口腔常见致病菌的抑菌作用

李兰英

湖北省麻城市中医医院，湖北 麻城 438300

茶叶是人们日常生活中最常见的饮料，它对人类具有多方面的保健功能。如：茶叶可以抗炎症、防癌;茶叶还具有抗衰老、改善血循环的状态、促进消化功能、阻止亚硝酸盐在体内合成、抗尼古丁［1]等作用。同时茶叶还可杀菌，抑制致龋菌合成不溶性葡聚糖［2]有良好的防龋功能。绿茶能抑制变形链球菌的研究已做了很多，茶叶中的提取物茶多酚可抑制多种细菌已有报道［3、4]。但茶叶的产地不同，加工、炮制方法不同其内在成分也会有所变化。不同茶叶的水浸液对口腔致病菌有何影响尚未见报道。我们选用普通绿茶、龙井茶、红茶、茉莉花茶、紫阳茶、乌龙茶6种常见茶叶的水浸液对龋齿致病菌和牙周炎可疑致病菌进行研究，探讨饮用不同的茶防龋的作用及防牙周病的可能性。

1 材料和方法

1.1 材料 茶叶：普通绿茶 (杭州茶厂，一级袋装);龙井茶茶 (福州茶厂，罗星塔牌);紫阳茶 (紫阳天然富硒茶厂);乌龙茶 (福建安溪茶厂，安溪铁观音)。

细菌：牙龈卟啉单胞菌 (Porphynomonas gingivalis，P．g，47A －1); 中间 普氏 菌 (Prevatellaintermedia，P．i，ATCC25611);变形链球菌 (Streptococcus mutans，S．m，Ingbritt c型);具核梭杆菌 (Fusobacterium nucleatum，F．n，ATCC 10953)。

1.2 方法

1.2.1 茶叶水浸液制备 取4.8g茶叶浸泡于100ml蒸馏水中，搅拌，煮沸后，在无菌状态下静放1h后，过滤，进行倍比稀释为 5个浓度 (即 48mg/ml、24mg/ml、12mg/ml、6mg/ml、3g/ml)。

1.2.2 菌液制备 变链菌选用MSB固体培养基，37℃微厌氧培养48h后，取2接种环菌放入2mlMS液体培养基中，37℃微厌氧培养24h后待用;牙龈卟啉单胞菌、中间普氏菌、具核梭杆菌选用CDC固体培养基，37℃厌氧培养5天后，取2接种环菌放入2mlCDC液体培养基中，37℃厌氧培养48h后待用。

抑菌试验：将牙龈卟啉单胞菌、中间普氏菌、具核梭杆菌液均匀涂布于CDC固体培养基表面 (变链菌用MSB固体培养基)，均匀放上5个不锈钢管 (内径：6mm，外径：8mm，高：10mm)，分别加入不同浓度的茶水浸液，37℃厌氧 (变链微厌氧)培养48h后，测量不锈钢管周围的抑菌环直径大小 (阴性对照为注射用水，直径小于10mm的为阴性)，测抑菌环的最大直径和最小直径取均值，每组抑菌试验重复3次，取均值。

2 结果

各种茶叶不同浓度水浸液的抑菌结果。

3 讨论

我国是产茶大国，民间饮茶历史悠久，饮茶的优及与人体健康关系已有了多方面的研究。近年来茶叶防龋的研究发展很快，早期防龋研究认为茶叶中含有的氟元素起重要作用，可降低釉质中羟基磷灰石的溶解，改善晶体结构，使已脱钙的釉质再矿化，氟元素还可抑制致龋菌生长，抑制酶的活性，减少细菌对釉面的吸附等［5]。近年来的研究发现，茶叶中还有很多其它物质，也能防龋［6]。国内外已对茶叶的多种有效成分进行分析及纯化，并逐步深化研究茶叶的功效及作用机制。

实验选用的变形链球菌是公认的主要致龋菌，可引起牙齿任何部位的龋损;选用的牙龈卟啉单胞菌、中间普氏菌、具核梭杆菌是牙周炎的可疑致病菌，在牙周病的发病和病情进展中起重要作用;选这4种菌作为龋病、牙周病的代表菌。

本研究证明普通绿茶、龙井茶、红茶、茉莉花茶、紫阳茶、乌龙茶较高浓度的水浸液 (24mg/ml)均对变链菌有抑菌作用;普通绿茶、红茶、茉莉花茶、乌龙茶的水浸液在饮用浓度 (12mg/ml)对变链菌有抑菌作用 (饮用浓度：普通袋装茶叶多为3克/包，冲泡250ml1杯的水中);只有普通绿茶水浸液在低于饮用浓度 (6mg/ml)仍对变链菌有抑菌作用。与谢小梅等［2]对绿茶水浸液抑制变链菌的结果比较，优于其实验后果，其报道最佳浓度为13.5g/L。普通绿茶和红茶水浸液在12mg/ml的浓度对具核梭杆菌有很好的抑菌效果;普通绿茶和茉莉花茶的水浸液浓度在48mg/ml对牙龈卟啉单胞菌有抑菌作用。高浓度 (48mg/ml)的普通绿茶水浸液对牙龈卟啉单胞菌、中间普氏菌、变形链球菌、具核梭杆菌均有抑菌作用;只有普通绿茶水浸液在饮用浓度即对变链菌和具核梭杆菌有抑菌作用。这说明饮茶不仅能防龋，对牙周炎的预防可能也有一定作用。

茶叶的抑菌机制与其中含的有效抑菌成分有关，茶叶中茶多酚和茶色素对口腔主要致病菌的抑菌作用的报道已很多［3、4、7]，绿茶的主要抗菌杀菌物质是绿茶多酚 (Chinese green tea polyphenois，CTP)，占茶叶干重的 25%［8、9]，其具有较强的抗菌消炎作用［1]，可抑制口腔中变形链球菌、粘性放线菌、唾液链球菌等多种细菌的生长［3、4、10]，临界抑菌浓度为0.25%～0.55%，浓度增加，抑菌效果也增强，机理为凝固蛋白质，CTP能与菌体蛋白质结合而导致细菌死亡［1]。使用0.2%的绿茶茶多酚溶液漱口刷牙还可以有效地抑制牙菌斑的形成，且几乎不产生耐药性［8]。而乌龙茶中提取的酚类化合物 (Oolong tea extract，OTE)抑菌作用更强，其活性成分为乌龙茶所独有［11]。红茶抑菌功效国外也正在研究。茶叶中含有丰富的无机矿物质元素，有报道氟元素可抑制致龋菌生长［5]，有些金属盐如：锌、铜、汞、镍对口腔致龋菌有良好的杀灭作用［12]，还有一些挥发性物质，如：烃、醇、酮、醛、醚、酸等，有中度抗菌活性，抗菌谱广，能抑制多种细菌，特别是变链菌生长，其中，橙花叔醇 (nerolidol) 抗菌力最强［9]。

茶叶的产地不同，制作工艺、炮制方法不同，茶叶中抑菌的有效成分也有所改变，普通绿茶抑菌效果高于其它茶叶，粗制的老叶绿茶抑菌作用强于精制嫩叶绿茶 (即普通绿茶优于龙井茶)，可能茶叶的成熟度与成分有所变化，有报道老茶叶氟含量高［13]，但对CTP含量有无变化尚无报道。紫阳茶也是一种绿茶，它产于陕西省紫阳县，是我国已发现的2个天然富硒产茶区之一［1]，它虽然含有丰富的硒元素，对预防心血管疾病、防癌有一定作用，但抑菌并非最佳;有报道指出其可促龋病发生［5]。

总之，目前已知茶叶中约含有600多种化学成分，有些成分的作用和机理尚不清楚，这些物质同存于茶叶中，并协同发挥抑菌作用。本研究通过实验证明茶叶水浸液可抑制口腔多种致病微生物，有可能改善口腔微生态环境。饮茶能有效地降低龋病的发生，可否预防牙周疾病还有待深入研究。