新疆维吾尔医药材黄花柳叶中总黄酮含量的测定

古丽克孜·阿日甫 李暮春 古力娜孜·热西提

新疆维吾尔自治区分析测试研究院，新疆 乌鲁木齐 830011

黄花柳 (Salix caprea L)为杨柳科柳属植物 Salicaceae salix L。主要分布于我国新疆。长期以来在新疆维吾尔医学中就作为药物使用，主要用于治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病，高血压，抗菌、抗病毒、解热、消炎、止痛、消肿、风湿性关节炎、黄疸性肝炎等［1]。有关柳属植物的化学成分研究，国内外已有些报道，但就新疆黄花柳叶药材而言，其总黄酮含量的研究尚未见报道。为了初步了解新疆维吾尔医药材黄花柳叶的药效与总黄酮含量的关系，本研究参照乙醇回流提取法，对采自新疆和田地区的药用黄花柳叶中总黄酮的最佳提取条件进行了研究，在最佳提取条件下，对黄花柳叶总黄酮含量进行了测定。其黄花柳叶中总黄酮含量为4.17%，相对标准偏差为1.41%，最佳提取条件适合该药材的提取。

1 材料与方法

1.1 材料

黄花柳叶采自新疆和田维吾尔医医院的栽培基地，由和田维吾尔医院主任医师巴克阿力木鉴定，采后自然阴干，粉粹使用。

1.2 仪器设备

HP－8452A型紫外可见见光光度计 (美国惠谱)，电子天平 (北京赛多利天平有限公司)，微型植物试样粉碎机(河北省黄华市新兴电器长)，电热恒温水浴锅 (京泰克仪器有限公司)。

1.3 试剂

芦丁 (中国药品物制品检定所)，乙醇，亚硝酸钠，硝酸铝，氢氧化钠，均为分析纯。

2 实验方法

2.1 芦丁标准溶液的配置

准确称取芦丁标准试剂20.7 mg用50%的乙醇溶解，并完全移入100mL容量瓶中，用50%的乙醇稀释至刻度，得到浓度为0.207 mg/mL的芦丁标准溶液。

2.2 最大吸收波长的选择

取上述芦丁标准溶液2.5 mL于25ml具塞试管中，用50%的乙醇至10 mL，加入5%NaNO20.6mL，摇匀，放置6min;加入10%Al(NO3)30.6mL，摇匀，放置6min后加入4%的 NaOH 4mL，摇匀，再用50%的乙醇定容至刻度，均匀，放置15min。以相应的溶液为空白，照分光光度法在430～700nm波长范围内扫描吸收度。由曲线可知，波长在503nm处为最大吸收。

2.3 芦丁标准曲线的制备

分别取上述芦丁标准溶液0，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3，3.5mL于25mL具塞试管中，用50%的乙醇至10mL，加入5%NaNO20.6mL，摇匀，放置6min;加入10%Al(NO3)30.6mL，摇匀，放置6min后加入4%的NaOH 4mL，摇匀，再用50%的乙醇定容至刻度，均匀，放置15min。以相应的溶液为空白，照分光光度法在503 nm处测定吸光度。以芦丁浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线良好线性关系 (r=0.9974)。见图1。

3 结果与分析

3.1 乙醇浓度对提取的影响

精确称取5份 (4.00g)柳树叶，分别加入体积分数为50%，60%，70%，80%，90%乙醇各为120mL，在60℃水浴中回流3小时，趁热过滤，冷却后，转移到250mL的容量瓶中稀释至刻度，取各1mL至25mL具塞试管补充10mL各自的溶剂后分别加入5%NaNO20.6mL，摇匀，放置6min;加入10%Al(NO3)30.6mL摇匀，放置6min后加入4%的NaOH 4mL，摇匀，再用各自的溶剂定容至刻度，均匀，放置15min后在503 nm波长处分别测定吸光度。吸光度 (A) 为 0.1014，0.0080，0.0322，0.0114，0.0035。从实验中可以看出：50%乙醇的吸光值最大，所以乙醇浓度确定在50%。

3.2 回流时间对提取的影响

精确称取5份 (4.00g)柳树叶，加50%120mL的乙醇，在60℃水浴中回流1，1.5，2.0，2.5，3小时，趁热过滤，冷却后，按照3.1的方法分别测定吸光度。吸光度(A) 为：0.1101，0.1037，0.0838，0.0804，0.0771。实验结果表明：当回流时间为1 h时，提取效果最好。而当时间继续延长时，总黄酮含量反而降低，这可能是回流时间太长，有部分乙醇被挥发而导致沸点逐渐增大，从而破坏某些黄酮类化合物。

3.3 回流温度对提取的影响

精确称取5份 (4.00g)柳树叶，加50%乙醇120ml分别在20℃，30℃，50℃，70℃，80℃水浴中回流1小时趁热过滤，冷却及在室温下放1个小时过滤后，按照3.1的方法进行测定，吸光度 (A)为：0.0477，0.0871，0.1221，0.1757，0.1674。结果可见，70℃的黄酮提取率高。

3.4 料液比对提取的影响

精确称取4份 (4.00g)柳树叶，加50%乙醇80 mL，120mL，160mL，200mL，料液比分别为1：20，1：30，1：40，1：50在70℃水浴中回流1小时，趁热过滤，冷却后，按照3.1的方法进行测定，吸光度 (A)为：0.1025，0.1345，0.1105，0.0969。结果表明，料液比在1∶30时的值最大值，因此选择料液比1∶30为考虑对象。

3.5 黄花柳叶中总黄酮的测定结果

精确称取5份 (4.00g)柳树叶，加50%乙醇120mL料液比分别为1：30在70℃水浴中回流1小时，趁热过滤，冷却后，按照3.1的方法进行测定，结果见表1。

表1 黄花柳叶中总黄酮的测定结果 (n=5)

4 结论

试验结果表明：影响黄酮类物质提取量的因素主次顺序为：提取温度＞乙醇浓度＞回流时间＞料液比。确定了黄花柳叶中总黄酮的最佳条件为：乙醇浓度为50%，回流时间为1小时，料液比1：30，回流温度为70℃。在最佳条件下的总黄酮得率4.17%。结果表明：新疆黄花柳叶中总黄酮的含量较高，达到4.17%，这说明黄花柳叶之所以有抗心脏病，高血压，抗菌消炎、解热、止痛、消肿、风湿性关节炎、黄疸性肝炎等作用与其中所含的黄酮类化合物具有密切关系。下一步将进一步考察黄花柳叶药材的药理活性，为开发新疆黄花柳叶的药用价值提供科学依据。

［1]古丽克孜·阿日甫，李慕春，杨飞．新疆维吾尔医药药材黄花柳叶中鞣质含量的测定［J]．中国民族民间医药，2009，10(18)：39－40．

［2]孙慧丽，艾来提·苏里坦，买吾兰·买提努尔等．黄花柳花中总黄酮含量的研究［J]．新疆农业科学，2008，45(1)：84－87．

［3]古丽克孜·阿日甫，阿依古丽·塔西．新疆维吾尔药材黄花柳中无机元素的测定［J]．药物分析杂志，2008，28(11)：1880－1882．