复方苦参注射液对辅助化疗非小细胞肺癌患者免疫功能的影响

左占杰，辛永祥，张洪波，李 伟，王 静，王蛟龙，王建东(武警北京总队医院胸部肿瘤治疗中心，北京100027)

肺癌是一种常见的恶性肿瘤，而非小细胞肺癌的发病率占肺癌的80%，由于早期缺乏特异性症状，就诊时大多数患者已为Ⅲ～Ⅳ期，失去了手术机会，化疗就成为其主要治疗手段，而化疗具有严重消化道反应和其他不良反应，且患者免疫功能低下，化疗同时应用中西医结合的方法，可在一定程度上避免或减轻化疗的不良反应，提高患者的免疫功能。复方苦参注射液是以苦参、白茯苓为原料经科学提炼而制成的，其主要成份为苦参碱，与细胞周期非特异性抗肿瘤药联用有协同增效作用，可预防化疗药的不良反应，并能提高肿瘤患者免疫功能，起到增效减毒的功效［1］。笔者从2008年9月—2010年12月对146例肺癌患者常规化疗过程中加用复方苦参注射液治疗，用测定皮肤迟发型超敏反应的方法［旧结核菌素皮试(OT)法］、巨噬细胞吞噬功能的测定，观察治疗前后机体细胞免疫能的变化，并选取同期单纯采用常规化疗的122例患者作对照，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料

268例患者均因患非小细胞肺癌住院行辅助化疗，化疗前有明确的病理诊断及分期。分为治疗组146例，男性82例，女性64例;年龄50～74岁，中位年龄65.3岁;病程1～6.5个月，平均(3.5±2.0)个月;临床分期:Ⅱa期 30例，Ⅱb期 34例，Ⅲa期45例，Ⅲb期22例，Ⅳ期15例;病理类型:鳞癌56例，腺癌68例，腺鳞癌12例，大细胞癌6例。对照组122例，男性73例，女49例;年龄51～75岁，中位年龄63.8岁;病程1～6.0个月，平均(3.8±2.5)个月;临床分期:Ⅱa期 25例，Ⅱb期 38例，Ⅲa39期例，Ⅲb期12例，Ⅳ期8例;病理类型:鳞癌42例，腺癌56例，腺鳞癌16例，大细胞癌8例。2组患者年龄、性别、病理及化疗方案无显著性差异(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 化疗方法:2组化疗采用化疗4～6周期，方案为 GC(吉西他滨 +顺铂)、NC(长春瑞滨 +顺铂)、PC(紫杉醇 +顺铂)治疗2周期评价疗效。治疗组加用复方苦参注射液，15 mL，1日1次，随化疗药同时静脉滴注。全部病例在治疗前后测定OT皮试反应能力及巨噬细胞吞噬率。

1.2.2 OT皮试:通常在前臂掌侧，皮内注射0.1 mL不同稀释度(1∶100～1∶100000)的旧结核菌素，72 h后测定皮试点皮肤的红肿、硬结的直径大小。

1.2.3 巨噬细胞吞噬功能的测定(皮泡试验):用眼科镊子取1 cm2大小的滤纸2张，蘸上10%中药斑蝥乙醇浸出液放置在前臂屈侧皮肤上，48 h后前臂皮肤上形成1个水泡，抽取水泡渗出液1～2 mL，置入含有2片盖片的试管中，加入5%鸡红细胞悬液0.01 mL混匀，在37℃水浴作用30 min，每隔10 min摇动1次。取出双层盖片，0.9%氯化钠注射液冲洗后以两外侧面平置载玻片上，干燥后固定，姬姆萨氏染色，在油镜下观察100个巨噬细胞吞有鸡红细胞的巨噬细胞数。

1.2.4 正常标准的判断:(1)OT反应:局部微红疹，无硬结为阴性;红疹、硬结直径达5～10 mm为阳性;红疹、硬结直径＜5 mm为可疑。正常情况下，红疹、硬结直径大于 5 mm。(2)皮泡试验巨噬细胞吞噬百分比，参照正常值为(64.7±2.43)%。

1.2.5 统计学分析:采用SPSS 13.0统计软件包，计量资料采用方差分析，计数资料采用χ2检验，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 治疗前后OT皮试反应能力

观察不同稀释度1∶100～1∶100000的旧结核菌素0.1 mL皮内注射引起的迟发型皮肤变态反应。同一病例治疗前后OT皮试反应能力的对比，以阳性OT稀释度增强的倍数表示:如治疗前是1∶100，治疗后为1∶500，则表示为5倍。治疗组接受复方苦参注射液辅助治疗后皮试反应能力的增减变化:增加5倍以上11例(7.53%)，增加 ＞10倍53例(36.30%)，增加 ＞20倍56例(38.36%)，无变化20例(13.70%)，下降6例(4.11%)。对照组治疗后皮试反应能力的增减变化:增加5倍以上33例(27.05%)，增加 ＞10倍 38例(31.15%)，增加 ＞20倍14例(11.48%)，无变化 23例(18.85%)，下降 14例(11.48%)。治疗后OT皮试反应能力治疗组显著高于对照组(P ＜0.05)，见表1。

表1 2组治疗前后OT皮试反应能力比较Tab 1 Results of OT test in two groups before and after treatment

2.2 治疗前后巨噬细胞吞噬率

观察巨噬细胞吞噬率的增减变化，以治疗前后分子数增强的多少来表示。治疗组接受复方苦参注射液辅助治疗后巨噬细胞吞噬率变化:下降11例(7.5%)，无变化6例(4.1%)，增加10%48例(32.8%)，增加20%66例(45.2%)，增加 30%15例(10.2%)。对照组治疗后巨噬细胞吞噬率变化:下降13例(10.6%)，无变化 36例(29.5%)，增加 10%32例(26.2%)，增加 20%30例(24.5%)，增加 30%11例(9.0%)。治疗后巨噬细胞吞噬率治疗组显著高于对照组(P＜0.05)，见表2。

表2 2组治疗前后巨噬细胞吞噬率比较Tab 2 Macrophages’phagocytic rate of in two groups before and after treatment

2.3 治疗前后Treg细胞水平的变化

调节性 T细胞(Treg细胞、CD4+、CD25+、FoxP3+)是一类具有免疫调节功能的T细胞亚群，在维持机体免疫自稳、调控免疫应答方面起重要作用，在抗肿瘤免疫中，Treg发挥抑制效应［2］。有研究提示，肿瘤患者 Treg细胞占全 T细胞的比例上升，Treg与CD8+T细胞相互接触作用后抑制了CD8+T细胞的杀伤效应［3］。本组采用流式细胞仪检测技术检测化疗前后患者外周血单个核细胞(PBMC)中Treg细胞水平的变化，治疗组后Treg细胞表达水平显著下调，由治疗前的6.30±2.14降至4.03±1.41，而对照组无变化，分别为 6.34±2.25和6.62±1.87，差异具有统计学意义(P＜0.05)，见表3。

表3 2组治疗前后Treg细胞百分率比较(±s，%)Tab 3 Percentages of Treg cells in two groups before and after treatment(±s，%)

表3 2组治疗前后Treg细胞百分率比较(±s，%)Tab 3 Percentages of Treg cells in two groups before and after treatment(±s，%)

注:经方差分析，F=11084，与其他组相比，*P＜0.05note:via F test，F=11084，*P ＜0.05

组别 n 化疗前 化疗后治疗组 146 6.30±2.14 4.03±1.41*122 6.34±2.25 6.62±1.87对照组

3 讨论

肺癌患者多伴有体质虚弱，免疫功能低下，因此近年来临床上多采用中药辅助化疗，提高患者免疫功能，以提高其治疗效果及患者生存质量。大量的实验研究表明:苦参具有明显的止痛、抗癌、提高免疫力、止血等作用［4］。段萍等［5］对晚期非小细胞肺癌化疗中使用复方苦参注射液统计血清 IgM、IgG含量明显增高，与对照组相比有显著性差异，提示复方苦参注射液辅助非小细胞肺癌化疗可以减少不良反应，提高机体的免疫功能和改善生活质量。复方苦参注射液对B淋巴细胞和T淋巴细胞的免疫功能有增强作用，因而使机体的体液免疫和细胞免疫功能都有增强，发挥抗癌作用［6］。因此复方苦参注射液对改善晚期肺癌化疗患者细胞免疫功能有一定意义。王琳等［7］关于复方苦参注射液配合化疗治疗晚期非小细胞肺癌44例对化疗后外周血CD3+、CD4+细胞的数量及CD4+/CD8+细胞比值均较化疗前显著下降，复方苦参注射液可提高临床疗效，降低化疗不良反应，增强机体免疫功能，改善生存质量。OT皮试属迟发型皮肤过敏反应，是细胞免疫功能状态的一种表现。我国人群普遍存在抗结核菌的基础免疫力。因此，采用OT皮试测定细胞免疫功能活性是最有代表性的客观指标。巨噬细胞是细胞免疫力的重要组成部分，Treg在调控免疫应答方面起重要作用。本研究表明，经复方苦参注射液辅助治疗后，通过监测巨噬细胞吞噬率、OT皮试反应能力及Treg细胞水平的变化，均较单纯化疗患者组有显著差别，提示复方苦参注射液对提高非小细胞肺癌化疗患者细胞免疫功能有显著意义。因此，在肺癌患者的化疗过程中联合使用复方苦参注射液对肺癌患者免疫功能的恢复具有重要意义，值得临床进一步推广使用。

［1］ 韩福才，康金秀，李丽珍，等.岩舒对肺癌患者免疫功能的影响［J］.山西医药杂志，1999，28(1):74.

［2］ Fontenot JD，Gavin MA，Rudensky AY.Foxp3 programs the development and function of CD4+CD25+regulatory T cells［J］.Nat Immunol，2003，4(4):330.

［3］ Born WK，Reardon CL，O’Brien RL.The function of gammadelta T cells in innate immunity［J］.Curr Opin Immunol，2006，18(1):31.

［4］ 陈建清，唐耀华，吴晓安.复方苦参注射液治疗癌痛的疗效观察［J］.四川肿瘤防治，2002，15(4):236.

［5］ 段 萍，肖敏伟，肖 文，等.复方苦参注射液在晚期非小细胞肺癌化疗中的增效减毒作用［J］.中国新药杂志，2009，18(18):1760.

［6］ 石 彦，余佩武，曾冬竹，等.复方苦参注射液对胃癌术后化疗患者免疫功能的影响［J］.药学服务与研究，2006，6(3):183.

［7］ 王 琳，刘 华，谢贤和，等.复方苦参注射液配合化疗治疗晚期非小细胞肺癌44例［J］.陕西中医，2009，30(12):1574.