血管内皮细胞生长因子、核转录因子p50在多形性腺瘤中的表达及意义

张 强，李金源，王晓波

河北联合大学附属医院口腔科，河北唐山 063000

涎腺多形性腺瘤 （salivery gland pleomorphic adenoma,PA）是最常见的涎腺肿瘤，占涎腺肿瘤的60%～70%。Seifert等根据上皮细胞和基质所占的比例，将多形性腺瘤分为四种类型，后来为了简便起见，Seifert和Donath又将上述四型合并为两型，即细胞丰富型及基质丰富型。本实验拟通过研究对比血管内皮细胞生长因子（VEGF）、核转录因子（NF-κB）p50在细胞丰富型及基质丰富型涎腺多形性腺瘤及正常腮腺组织中的表达，以探讨VEGF和NF-κB p50在两型多形性腺瘤不同生物学行为之间的关系，为研究其生物学行为提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集华北煤炭医学院附属医院2004年1月～2009年9月间手术治疗的涎腺多形性腺瘤组织石蜡标本75例，按筛选标准选取其中51例，其中，男22例，女29例；年龄18～77岁，平均46.2岁。其中细胞丰富型26例（A组），基质丰富型25例（B组）。30例正常涎腺组织为随机从良性涎腺多形性腺瘤旁的正常涎腺组织中选取作为C组。

1.2 主要试剂

Rabbit anti-VEGF （Vascular Endothelial Growth Factor）6 ml ZA-0509（中杉金桥生物技术有限公司）；NF-κB p50（NLS）100 μl sc-114（Santa Cruz Biotechnology）；抗体稀释液20 ml ZLI-9028（天津市灏洋生物制品科技有限公司）。

1.3 实验方法

所有标本，石蜡包埋组织，蜡块切片，厚4 μm，然后行HE染色及NF-κB p50、VEGF的免疫组织化学检测采用SP法染色。

1.4 结果判定

VEGF以肿瘤细胞胞质内出现棕黄色颗粒为阳性表达。NF-κB p50亚单位以肿瘤细胞胞质和（或）细胞核内出现棕黄色颗粒为阳性表达。本实验采用Motic Med 6.0软件系统镜下采图，切片在光镜下按统一放大倍数（10×40）进行分析，每张切片随机摄取10个视野，输入计算机作为测定视场。应用Image-Proplus 6.0软件分析系统对其阳性细胞表达的光密度进行定量分析，选择累积光密度（IOD）（光密度定标值为255），其代表染色强度，能较准确地反映阳性产物颜色深浅的状况。

1.5 统计学处理

采用SPSS 13.0统计分析软件对结果进行数据处理。计量资料以均数±标准差（±s）表示，多组间采用方差分析，多组间的两两比较采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

VEGF阳性染色为细胞质中出现棕黄色颗粒。VEGF在各组间表达结果，经统计学分析A、B、C组间差异均有统计学意义（均 P＜0.05）。NF-κB p50 的阳性染色为细胞质和（或）细胞核中出现棕黄色颗粒，A、B、C组间表达结果比较，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。见表1。

表1 血管内皮细胞生长因子、核转录因子p50在各组间表达的平均光密度值（ ±s）

表1 血管内皮细胞生长因子、核转录因子p50在各组间表达的平均光密度值（ ±s）

注：A、B、C 组间两两比较，均 P＜0.05

A组B组C组组别 VEGF 954.65±305.79 153.13±60.81 52.46±9.76 NF-κB p50 529.79±163.81 43.40±5.56 6.83±1.90

3 讨论

多形性腺瘤组织结构复杂，其构成的主要成分为腺上皮细胞、肌上皮细胞、黏液、黏液样组织及软骨样组织。Serfert和Donath[1]将多形性腺瘤分为两型，即细胞丰富型和基质丰富型。一般而言，细胞丰富型易于发生恶变，几乎一半以上的癌在多形性腺瘤中的病例来源于细胞丰富型多形性腺瘤。相反，基质丰富型较易复发。

实体肿瘤的生长与肿瘤血管生成关系密切，Folkman于20世纪70年代最早提出了肿瘤生长转移依赖血管生成的观点。对于实体肿瘤而言，生长过程大致分为以下三个阶段：第1阶段为无血管期，或称为血管前期，肿瘤完全处于静止状态，肿瘤细胞的营养供应靠细胞周围间质的弥散获得；第2阶段为血管形成期，此期肿瘤组织中开始形成新生血管，这些血管持续为肿瘤组织提供营养物质并带走其代谢产物；第3阶段为生长期，肿瘤开始旺盛生长。当实体肿瘤生长到一定阶段就开始局部侵袭及远处转移。血管前期的肿瘤，因为无血管支持，肿瘤生长缓慢，体积不能超过2 mm，只有血管化的肿瘤才能继续生长，并长成具有临床意义的大小。1996年，Hanahan等[2]又提出了肿瘤血管生成的开关学说，即肿瘤自身需打破其周围微环境中促进与抑制肿瘤血管生成因子之间的平衡，而诱导肿瘤新生血管的形成。肿瘤血管新生与多种血管生成因子刺激有关，其中VEGF是肿瘤血管形成的最主要调节因子。近年研究表明，VEGF及其受体在人类多种恶性肿瘤细胞均有较高水平表达，并以自分泌或旁分泌形式作用于肿瘤细胞，促进肿瘤细胞生长，为肿瘤的浸润和转移创造条件[3]，并影响大部分恶性肿瘤的预后，在临床上以VEGF及其受体为靶点的生物治疗已在进行。还有研究显示[4]在肿瘤组织形成之前就可产生大量VEGF，正常细胞获得血管生成能力增加，其恶变危险性也明显增加。核转录因子NF-κB是迄今为止发现的功能最多的多向性转录因子。NF-κB在细胞生长、细胞凋亡、肿瘤发生等发面发挥重要作用，NF-κB的异常活化导致细胞周期调节失控，表现为细胞无限增殖和自主分裂、肿瘤形成[5]。并且可以通过上调促细胞存活基因和抗凋亡基因表达，从而保护细胞使其免于凋亡[6]。NF-κB还可以通过调节细胞黏附分子、基质金属蛋白酶及血管生长因子受体等的表达，参与肿瘤转移进程。因此，NF-κB在肿瘤的发生、发展、转移过程中起到了重要的作用。本实验研究结果显示，NF-κBp50的表达与 VEGF的表达具有正相关性（P＜0.05），说明NF-κB p50可能是通过作用于VEGF来实现对新生血管的调控作用，进而促进肿瘤血管的生长，导致肿瘤细胞增殖活性的进一步升高。对目前国内外通过抑制血管生成抗肿瘤治疗的研究提供了一定依据，同时联合检测NF-κB与VEGF在涎腺多形性腺瘤中的表达可反映肿瘤生物学特点，对肿瘤的预后，临床制订治疗计划有一定的指导价值，深入研究两者之间的关系，可能为抗肿瘤治疗提供一个新的思路及途径。

[1]Seifert G,Donath K.Classification of the pathohistology of diseases of the salivary glands-review of 2 600 cases in the Salivary Gland Register[J].Beitrge zur Pathologie,1976,159(1)：1-32.

[2]Hanahan D,Folkman J.Patterns and emerging mechanisms of the angiogenic switch during tumorgenesis[J].Cell,1996,86：353-364.

[3]Takahashi M,Matsui A,Inao M,et al.ERK/MAPK-dependent PI3K/Aktphosph-orylation through VEGFR-1 after VEGF stimulation in activated hepatic stellate cells[J].Hepatol Res,2003,26(3)：232-236.

[4]Li J,Zhang YP,Kirsner RS.Angiogenesis in wound repair：angiogenic growth factors and the extracellular matrix [J].Microsc Res Tech,2003,60(1)：107-114.

[5]王永华,柳志文.OX-2、VEGF在口腔扁平苔鲜、口腔白斑及口腔鳞状细胞癌中的表达[J].口腔医学,2009,29(8)：419-422.

[6]Hinz M,Krappmann D,Eichten A,et al.Nuclear factor-kappa B,cancer and apoptosis[J].Mol CellBiol,2004,64(4)：2690-2698.