高效液相色谱法测定骨伤灵胶囊中芍药苷含量

2011-01-24韩映晨金美花

中国药业 2011年10期

关键词：骨伤芍药液相

韩映晨，金美花

(吉林省延边朝鲜族自治州食品药品检验所，吉林延吉 133000)

高效液相色谱法测定骨伤灵胶囊中芍药苷含量

韩映晨，金美花

(吉林省延边朝鲜族自治州食品药品检验所，吉林延吉 133000)

目的提高骨伤灵胶囊的质量标准。方法色谱柱为DikmaC18柱(200 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为乙腈－水(17∶83)，流速0.8 mL/min，柱温40℃。结果芍药苷质量浓度在10.24～51.20 μg范围内与峰面积线性关系良好(r=0.999 7)，平均回收率为99.11%，RSD=0.6%(n=6)。结论高效液相色谱法快速、灵敏、准确、专属，可作为骨伤灵胶囊的质量控制方法。

骨伤灵胶囊;高效液相色谱法;芍药苷

骨伤灵胶囊由当归、茯苓、熟地、白芍、山萸肉、牛膝、川断、威灵仙、伸筋草、合欢皮、泽泻、黄芪、川芎、鹿角胶组方，具有补益肝肾、舒筋活络之功能，用于各种骨折后期及外伤后期的功能恢复，肌肉萎缩，骨质增生，颈、腰椎病，腰椎间盘突出症，腱鞘炎，神经损伤等。本制剂原质量标准中无含量测定方法，为有效控制该制剂质量，笔者用高效液相色谱法测定其芍药苷含量，报道如下。

1 仪器与试剂

Younglin型高效液相色谱仪;KQ－200KDE型高功率数控超声波清洗器;Metterar 261型电子天平。芍药苷对照品(中国药品生物制品检定所);骨伤灵胶囊(吉林省敦化市中医院制剂室，批号为20090101);乙腈(色谱纯)，水(超纯水)，其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:Dikma C18柱(200 mm×4.6 mm，5 μm);流动相:乙腈－水(17 ∶83);流速:0.8 mL/min;进样量:10 μL;柱温:40℃;检测波长:230 nm。理论板数按芍药苷峰计算应不低于2 500，色谱图见图1。

2.2 溶液制备

精密称取芍药苷对照品适量，加乙醇制成每1 mL含50 μg芍药苷的对照品溶液。取样品内容物2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇50 mL，密塞，称定质量，超声处理20 min，放冷，再称定质量，用乙醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液即得供试品溶液。取不含白芍的阴性样品，同法制得阴性对照品溶液。

图1 高效液相色谱图

2.3 方法学考察

标准曲线绘制:精密吸取对照品贮备液 (0.256 g/L)0.4，0.6，0.8，1.0 1.5，2.0 mL，分别置 10 mL 量瓶中，加稀乙醇至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密吸取各对照品溶液5 μL，分别注入液相色谱仪，测定峰面积。以芍药苷进样量为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线，回归方程为 Y=0.059 6 X－0.829 8，r=0.999 7(n=6)，芍药苷进样量在 10.24 ～51.20 μg 范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:精密吸取供试品(批号为20090101)溶液10 μL和对照品溶液5 μL，分别重复进样6次。结果供试品和对照品溶液中芍药苷峰面积 RSD分别为0.8%和0.7%(n=6)，表明仪器精密度良好。

重现性试验:取同一批(批号为20090101)样品6份，分别精密称定，按供试品溶液制备方法制备溶液并测定芍药苷含量。结果芍药苷含量的 RSD=1.0%(n=6)，表明方法重现性良好。

稳定性试验:取同一(批号为20090101)供试品溶液，分别于0，2，4，6，8 h 时进样测定峰面积。结果的 RSD=0.9%(n=5)，表明供试品溶液在8 h内稳定。

加样回收试验:精密称取己知含量的样品(批号为20090101，含量为0.256 mg/粒)，准确加入一定量的芍药苷对照品，照供试品溶液制备方法制备溶液，依法测定含量，计算回收率，结果见表1。

表1 芍药苷加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

取3批样品(吉林省敦化市中医院制剂室)，依法测定含量，结果见表2。

3 讨论

参照2005年版《中国药典(一部)》方法，比较了甲醇和稀乙醇两种溶剂，以过滤时的难易程度和所得色谱峰的情况及回收率测定结果评判，结果乙醇的提取效果较好。取样品2 g，考察不同超声时间(20，30，40 min)的提取效果，结果3种时间的提取效果差别不大，故将超声提取时间定为20 min。取一定量的芍药苷对照品，用稀乙醇溶解，照紫外－可见分光光度法[1]，在200～300 nm波长范围内扫描，结果在232 nm波长处有最大吸收峰，且在该波长处其他杂质干扰少，满足含量测定的要求，故选230 nm为测定波长。选择流动相时，参考了2005年版《中国药典(一部)》中的芍药苷含量测定[1]。比较了 3 种比例(15 ∶85，16 ∶84，17 ∶83)的乙腈－水，结果采用乙腈－水(17∶83)时分离效果理想，出峰时间适宜，峰形对称。

白芍为骨伤灵胶囊的主要药材之一，其主要活性成分为芍药苷，故选芍药苷为含量测定指标。供试品溶液图谱中最高峰为芍药苷主峰，和阴性样品比较时须注意其位置的不同。

本试验结果表明，高效液相色谱法准确、快速、专属，可用于骨伤灵胶囊的含量测定和质量控制。