血培养中猪霍乱沙门氏菌的鉴定与药敏*

李 琳

(泰山医学院附属泰山医院感染管理科，山东 泰安 271000)

有报道猪霍乱沙门氏菌是引起龄仔猪副伤寒的主要病原。猪霍乱沙门氏菌多同时与猪瘟混合感染，可导致发病率与死亡率增高[1]。已有报道猪霍乱沙门氏菌引起的感染，可导致人发热及菌血症等全身感染症状[2]。我院在一患者血培养标本中检出猪霍乱沙门氏菌，2天后在患者腹腔囊性包块穿刺液中也培养出猪霍乱沙门氏菌。为了对血培养等非肠道中猪霍乱沙门氏菌快速进行鉴定以指导临床医师正确使用抗生素，提高患者的治愈率，现总结并报告如下。

1 材料和方法

1.1 菌株来源

1株猪霍乱沙门氏菌，来自我院2010年1月患者血培养中分离出的标本。该患者突然高热后，在高校医院用左氧氟沙星治疗2天后，效果不佳，体温达40.5℃，于2010年1月入院。该患者临床不仅表现为败血症，同时伴有血小板减少，谷草转氨酶增高，直接胆红素和间接胆红素增高，尿蛋白定性+++。B超检查发现脾下方有约10.1 cm×8.5 cm的囊性包块，包块内的液体培养出猪霍乱沙门菌，但患者并没有腹泻症状。临床初步诊断：败血症，中毒性肝炎。

1.2 试剂

ID32E鉴定条为生物梅里埃产品。血琼脂、SS琼脂、HE琼脂、M-H琼脂和药敏纸片均为英国Oxoid产品。沙门氏菌属标准血清购自中国生物技术集团公司兰州生物制品研究所，常规生化鉴定管、三糖铁琼脂、麦康凯琼脂均购自杭州天和微生物试剂有限公司。

1.3 菌落形态

标本经35℃培养18～24 h，在SS琼脂上菌落特征为无色半透明，圆形扁平，边缘光滑的较小菌落；在HE琼脂上菌落呈蓝绿色，与SS琼脂上所生长的菌落大小基本相同。在麦康凯培养基上为无色透明、光滑菌落。

1.4 生化鉴定

取可疑菌落根据文献[3]做以下生化试验，乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖、卫矛醇、吲哚试验、 MR试验、 V-P试验、枸橼酸利用、 H2S、尿素酶、硝酸盐还原、鸟氨酸、赖氨酸、苯丙氨酸脱羧酶、精氨酸双水解酶试验、明胶液化。三糖铁反应、半固体琼脂动力试验。同时用ATB细菌鉴定仪ID32E条鉴定。

1.5 血清学鉴定

取沙门氏菌O多价血清(A～F)于玻片上，加少量可疑菌进行凝集，用生理盐水作阴性对照，2 min内明显凝集为阳性，呈均匀混浊为阴性。如沙门氏菌多价血清凝集阳性，可以采用同样的方法用O单因子血清凝集，再用H因子血清第一相(特异相)凝集，最后用H因子血清第二相(非特异相)凝集。如生化反应符合沙门氏菌，但A～F多价血清不凝集，用Vi血清鉴定其Vi(表面抗原)抗原。

1.6 药敏试验和试剂

采用K-B纸片扩散法测定对氨苄西林、复方新诺明、氯霉素、萘啶酸、左氧氟沙星、头孢噻肟、头孢他啶、头孢吡肟、亚胺培南、美罗培南、头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦等12种抗菌药物的敏感性。药敏判定按照美国实验室标准化委员会(CLSI)2009年版的标准判读[4]。

2 结 果

2.1 培养结果

在SS琼脂上其菌落特征为无色半透明、圆形扁平、边缘光滑的较小菌落，培养基上的菌落未见黑色中心。在HE琼脂上菌落呈蓝绿色与SS琼脂上所生长的菌落大小基本相同，两种培养基上的菌落均未见黑色中心。麦康凯培养基上为无色透明、光滑菌落。革兰氏染色镜检为革兰氏阴性短小杆菌。三糖铁为斜面红色、底面黄色、产气、不产H2S。半固体琼脂动力试验阳性。

2.2 生化结果

猪霍乱沙门氏菌生化鉴定结果见表1。

表1 猪霍乱沙门氏菌生化鉴定结果

2.3 血清学鉴定结果

A～F群多价血清玻片凝集阳性，O因子血清O7凝集阳性，其余O因子血清均为阴性，H因子血清第一相Hc阳性，H因子血清第二相1，5阳性，其余H因子均为阴性，Vi抗原为阴性。

2.4 药敏结果

对氨苄西林(12 mm)、复方新诺明(6 mm)、氯霉素(6 mm)、萘啶酸(8 mm)耐药；对左氧氟沙星(22 mm)、头孢噻肟(34 mm)、头孢他啶(30 mm)、头孢吡肟(34 mm)、亚胺培南(31 mm)、美罗培南(31 mm)、头孢哌酮/舒巴坦(29 mm)、哌拉西林/他唑巴坦(29 mm)敏感。

3 讨 论

猪霍乱沙门氏菌正常人多寄生于胆囊，健康人极少患病，免疫低下时则成为条件致病菌[5]。有报道[6]成年人感染猪霍乱沙门氏菌及流行多为集体性食物中毒，也有报告[7]感染途径是由猪咬伤后感染者。此患者的致病原因，追问感染史未能明确此患者猪霍乱沙门氏菌感染原因。在微生物日常工作中，血培养阳性标本，如革兰染色为阴性杆菌，根据菌体形态，初步药敏试验按阴性杆菌药敏试验报告，通常不转种SS平板。血培养中如不能快速鉴定出沙门氏菌，初步药敏报告可能也不准确。血培养阳性、革兰染色阴性标本，应转种血平板、麦康凯平板和SS平板，根据氧化酶试验结果、菌落和菌体形态，并及时与临床医师沟通，如怀疑是沙门氏菌引起的败血症，先进行血清学鉴定，如沙门氏菌A～F群多价血清玻片凝集阳性，应注意初步药敏结果的报告，应先不报告第一、二代头孢类和氨基糖苷类抗生素，氟喹诺酮类抗生素的药敏结果也应根据萘啶酸药敏结果告知临床医师。

本研究报道的猪霍乱沙门氏菌，在SS平板上为无色、半透明、不产H2S的菌落。因此对于革兰染色阴性、氧化酶阴性、在SS平板上为无色透明或半透明的菌株应与临床医师及时沟通，这样能加快细菌鉴定速度，更有利于药敏结果的准确性。根据CLSI注释，对奈啶酸耐药，但对氟喹诺酮类药物敏感的沙门菌氏菌属，在用氟喹诺酮类药物治疗肠外沙门氏菌感染时，可能出现临床治疗失败或延迟反应。本例患者血和穿刺液中检出的猪霍乱沙门菌对奈啶酸耐药，但对左氧氟沙星敏感，因此应提示临床左氧氟沙星治疗可能无效。为有效控制感染，临床医师依据经验首先选用奥硝唑和氟罗沙星治疗2 d效果不佳，后根据血培养一级报告结果(一级报告结果为革兰阴性杆菌)改用亚胺培南治疗3 d，同时采用腹腔脓肿穿刺引流术引流脓液，患者体温恢复正常范围。最后根据药敏结果选用头孢哌酮/舒巴坦继续治疗，住院5 d后，尿蛋白定性试验阴性。用药10 d，患者血小板也恢复正常范围。用药15 d后患者各项检查均恢复正常，血培养及包块内的液体均未培养出细菌，感染得到有效控制，继续治疗3 d后患者痊愈出院。

综上所述，血培养中猪霍乱沙门氏菌快速、准确的鉴定与药敏结果对提高救治率至关重要。临床医师应根据患者病情，常规进行血培养等其他标本的培养，应该对细菌的耐药性进行检测，早期合理使用抗生素是决定预后的重要因素。

[1] 徐引弟，郭爱珍，贾爱卿，等. 猪霍乱沙门氏菌的快速分离鉴定[J].畜牧与兽医,2007，39(2)：8-10.

[2] Chiu CH，Chuang CH，Chiu S， et al. Salmonella enterica serotype Choleraesu is infections in pediatric patients[J]. Pediatrics， 2006，117(6)：1193-1196.

[3] Juliet PM， Lynne B， Peter FR. Analysis ofmicrobial community functional diversity using sole-carbon source utilization profiles-a cri tique[J].FEM S Microbio Ecolo， 2002，42(3): 1-14.

[4] Clinical and Laboratory Standards Institute. M100-S19 Performance standards for antimicrobial susceptibility testing；nineteenth informational supplement[J]. Wayne Pennsylvania，2009.

[5] 张志民，左 毅，曾红莲.艾滋病合并猪霍乱沙门菌败血症2例[J].四川医学, 2008，29(11)：1578.

[6] 王垂佑，颜礼芬，马瑞华. 一起猪霍乱沙门氏菌食物中毒调查报告[J].河南预防医学杂志，2000，11(3):188.

[7] 芩丹辉，黄卫.猪咬伤感染猪霍乱沙门氏菌死亡1例[J].广西预防医学,2001，7(3):170.