乙型肝炎病毒感染孕妇血液中IL-12和IL-18检测的临床意义*

焦凤萍 田兆菊 田景惠 赵兴民

(泰山医学院，山东 泰安 271016)

目前全球乙型肝炎病毒慢性感染的人数超过了3.5亿，每年由乙型肝炎病毒引起的死亡人数超过一百万[1]。中国是乙型病毒性肝炎的高发区，而形成我国众多乙型肝炎病毒携带者的重要原因是HBV宫内感染。近年来研究发现宫内感染率可达10%～44.4%，宫内感染是乙肝免疫失败的重要原因之一，阻断HBV宫内感染将是控制我国乙型肝炎流行和预防HBV相关疾病的关键，因此深入探讨HBV宫内感染的发生机制及确立有效的HBV宫内感染的实验室筛查方法就更为重要和迫切。本研究通过检测HBsAg阳性孕妇外周血清中IL-12、IL-18的水平，探讨HBV感染孕妇外周血清细胞因子IL-12、IL-18与胎儿发生HBV宫内感染的相关性。

1 材料与方法

1.1研究对象 研究组为2009～2010年在泰山医学院附属医院及泰安市中心医院分娩的HBsAg阳性孕妇39例，阴性对照组为同期分娩且无任何产科合并症和并发症的正常孕妇8例。

1.2标本采集 HBsAg阳性孕妇均在第28周产前检查时采集外周静脉血，分离血清，检测HBV-DNA含量、IL-12、IL-18。分娩时在无菌条件下采集婴儿脐静脉血，分离血清，检测其HBV-DNA含量及HBsAg。

1.3检测方法 采用实时荧光定量PCR法检测孕妇静脉血及婴儿脐静脉血的HBV-DNA含量。采用ELISA方法检测产妇静脉血IL-12 、IL-18和婴儿脐静脉血的HBsAg，按说明书操作。

1.4宫内感染判断标准 脐静脉血HBV-DNA阳性和(或)脐静脉血HBsAg阳性判断为宫内感染。

2 结 果

HBV-DNA含量为105copy/ml组IL-12、IL-18水平明显高于HBsAg阴性组，差异有统计学意义(P<0.05)。HBV-DNA含量为106copy/ml组和107copy/ml组IL-12、IL-18水平明显低于105copy/ml组，差异有统计学意义(P<0.05)。HBV-DNA含量为107copy/ml组宫内感染率明显高于106copy/ml组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 孕妇血清IL-12、IL-18、HBV-DNA含量与胎儿宫内感染的关系

注：与HBsAg阴性组比较，﹡P<0.05；与105copy/ml组比较，﹟P<0.05；与106copy/ml组比较，△P<0.05。

3 讨 论

3.1IL-12、IL-18与宫内感染的关系 正常妊娠组血清IL-18含量高，而IL-12的含量低，符合正常妊娠时的Th2型免疫应答。正常妊娠表现为一种特殊的Th2现象[2]。本研究结果显示HBsAg阳性孕妇在HBV-DNA含量为105copy/ml时,IL-12与IL-18显著升高。而在发生宫内感染率较高的孕妇中IL-12与IL-18明显减低，说明通过检测IL-12、IL-18可以预测HBsAg阳性孕妇发生宫内感染的可能性。

3.2IL-12、IL-18检测的意义 由于HBV-DNA感染与复制作用于单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞在内的抗原递呈细胞产生IL-12、IL-18，IL-12诱导新生CD4+T细胞分化为Th1细胞，而IL-18能增强IL-12的作用[3]，IL-12的大多数功能与IL-18相同，不同的是IL-18增强NK细胞和CTL的细胞毒性活性，所以IL-12与IL-18具有协同抗病毒感染作用，细胞因子IL-12、IL-18的高表达有利于病毒清除。在本研究中HBV-DNA含量105copy/ml 组，未发生宫内感染，其孕妇外周血IL-18、IL-12都有明显升高，有力地支持了上述观点。但在HBV-DNA含量>106copy/ml时，IL-12、IL-18水平明显下降，具体机制不清楚，但这也说明当HBV-DNA含量与IL-12、IL-18水平都升高时，发生宫内感染的机率很低，而当HBV-DNA含量升高，而IL-12、IL-18水平下降时，发生宫内感染的机率大。

刘海英等[4]研究了Th1/Th2型细胞因子与乙型肝炎病毒母婴垂直传播的相关性发现，孕妇Th1/Th2细胞免疫失衡可能是导致HBV宫内感染的重要因素。IL-18 是Th1型免疫反应的中枢性介质，是一种多功能的细胞因子，协同IL-12显著调节Th1/Th2平衡[5]。IL-18在无IL-12时可诱导Th2型免疫应答。研究[6]发现在体外实验中同时给予IL-12时，IL-18诱导Th1细胞分化和IFN-r的产生。但是在IL-4存在的情况下IL-18却诱导IgG1型抗体的产生和Th2细胞的分化。所以同时研究疾病过程中IL-12和IL-18的表达对预测HBV宫内感染更有意义。

新近文献[7]报告，HBV-DNA是乙型肝炎病毒感染及复制最直接和可靠的标志,并用于宫内感染的监测。但HBV-DNA含量检测不能反应孕妇机体的免疫状态。通过本研究可见，检测孕妇外周血清IL-12、IL-18可大体了解母体Th1/Th2细胞的免疫功能，并对胎儿HBV宫内感染作出预测。较高水平的IL-18、IL-12有利于孕妇清除体内HBV，对降低宫内感染有积极意义。

[1] Ganem D, Prince AM. Hepatitis B virus infection natural history and clinical consequences [J]. N Engl J Med,2004,350(11):1118-1129.

[2] 于松,臧春逸.正常妊娠及妊高征患者外周血中IL-12、IL-18的检测意义[J].中国妇幼保健,2007,22(35):5041-5042.

[3] 陈永胜,李东复，刘晓阳,等.乙型肝炎肝硬化患者HBV复制对外周血IL-12和IL-18表达水平的影响[J].吉林大学学报，2008,34(6):1038-1041.

[4] 刘海英,单瑞芹,李晓梅,等.乙型肝炎病毒母婴垂直传播与Th1/Th2型细胞因子相关性研究[J].实用妇产科杂志,2003,19(2):230-232.

[5] Mavropopoulos A, Sully G, Cope AP, et al. Stabilization of NF-r mRNA by MAPK p38 in IL-12 and IL-18 stimulated human NK cells[J]. Blood,2005,105:282-288.

[6] Wild JS, Sigounas A, Sur N, et al. NF-r-inducing factor(IL-18) increase allergic sensitization, serum IgE,Th2 cytokines, and airway eosinophilia in a mouse model of allergic asthma[J]. J Immunol, 2000,164:2701-2710.

[7] 高玉金,梅存金,刘成永,等.定量检测血清HBV标志物不同阳性组合模式与HBV-DNA定量之间的关系[J].实用肝病杂志,2005,8(3):77-79.