高效液相色谱-二级管阵列检测器法测定美白类、祛斑类化妆品和香波中氢醌、苯酚含量

田富饶 杨兰花 王旭强

(义乌出入境检验检疫局，义乌 322000)

氢醌和苯酚具有一定的渗透力和美白功效，常被添加于美白类化妆品中。由于氢醌、苯酚对人体均有毒性，被国家明令禁止在护肤类化妆品中使用，可是现在很多美容院为了争取顾客，迎合其快速祛斑的心理需求，四处寻找一涂即白的“神奇水”、“魔力膏”，一些不法厂商为了牟取暴利，投其所好，无视国家法规，在化妆品中加入大量的违禁物质。

氢醌(对苯二酚)属于超抑制酪氨酸酶和黑色素细胞毒剂，它通常以2%～4% 的浓度作为工业生产中的脱色剂使用，后来有人把它用在治疗黄褐斑上，确实很有效。于是“氢醌霜”就盛行起来了，并一度被认为是祛斑的首选产品。但后来人们发现，长期使用“氢醌霜”会导致黑色素细胞死亡，使色素脱失，发生白斑，或引起褐黄病(oehronosis)。倘若大面积使用，还会引起全身中毒，使肝、肾功能受到严重的伤害，甚至导致死亡。因此目前美国、法国的祛斑产品中禁止使用氢醌，而且在产品包装盒的显著位置还明确标明“本品中不含氢醌”的字样。我国强制性国家标准GB 7916-1987《化妆品卫生标准》规定了化妆品中禁用及限用物质，其中对氢醌及苯酚作了明确规定：氢醌可以在染发类化妆品中作氧化着色剂，苯酚也只能在洗发类化妆品中限量使用，禁止加在其它类化妆品中。

近几年来，国内美白、祛斑产品市场发展十分迅速，这些产品在给人们带来皮肤白皙、色斑淡化、祛除色素沉着的同时，给消费者造成伤害的问题也比比皆是，如皮肤红肿、脱皮等现象时有发生。所以监测检验祛斑美白类化妆品的质量，保证消费者用到卫生、安全的化妆品已成为当前检验检疫工作的重点。

目前，氢醌、苯酚的检测方法有分光光度法、气相色谱法[1]、液相色谱法[2，3]、气质联用法[4]。笔者建立了二极管阵列检测器的高效液相色谱法，该方法具有样品前处理简单、快速、灵敏度高、成本低、测定结果准确可靠等特点，为美白类、祛斑类化妆品和香波等日用化学品中氢醌和苯酚的检测提供了一种有效的分析手段。

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

高效液相色谱仪：Agilent 1200型，附带DAD二极管阵列检测器，美国安捷伦公司；

超声波清洗器：D-78224型，德国Elma公司；

高速离心机：3-30K型，德国Sigma公司；

分析天平：AL204型，梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司；

超纯水仪：Milli-Q型，美国密理博公司；

有机性样品滤膜：0.45 μm；

甲醇：色谱纯；

氢醌标准物质：Lot 00526，纯度99.0%，德国Dr．Ehrenstorfer公司；

苯酚标准物质： Lot 80428，纯度 99.5%，德国Dr．Ehrenstorfer公司。

1.2 标准储备溶液配制

分别精密称取氢醌、苯酚标准品0.099、0.1212 g，用甲醇溶解后定容至100 mL棕色容量瓶中，分别得到0.990、1.212 mg/mL的氢醌、苯酚标准储备液，于4℃暗处保存。临用时将标准储备液用甲醇稀释成所需浓度的混合标准工作溶液。

1.3 样品前处理

准确称取试样1.00 g于具塞比色管中，必要时在水浴上馏除乙醇等挥发性有机溶剂，用甲醇定容至10 mL，充分振荡，于超声波清洗器中常温超声提取15 min，离心，取上清液过0.45 μm滤膜后备用，同时做试剂空白。

1.4 色谱条件

色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse XDB- CN (250 mm×4.6 mm, 5-Micron )；流动相：水-甲醇(体积比为75∶25),等度洗脱；流速：1.0 mL/min；柱温：25℃；进样量：10 μL；检测器：二极管阵列(DAD)检测器，检测波长为280 nm。

2 结果与讨论

2.1 检测波长

在190～370 nm 波长范围内进行全波长扫描，氢醌、苯酚均在222、280 nm处有特征吸收，氢醌、苯酚在222 nm 处有一最大吸收峰，在此波长下测定氢醌、苯酚具有较高的灵敏度，但实验发现，在此条件下样品中许多组分都有吸收，对测定产生干扰。为保证二者同时测定，选择280 nm作为检测波长。在此条件下氢醌、苯酚有较好的分离效果，干扰少，灵敏度高，分析速度快。

2.2 提取溶剂

根据各个物质的理化性质，选择了甲醇、甲醇-水、乙腈作为提取溶剂，结果表明，乙腈的提取效果最差且毒性大；甲醇-水系统引入了大量的水溶性杂质；甲醇对各物质的提取效果最好，是理想的提取溶剂，且毒性相对较小，操作简单。

2.3 提取时间

按照1.3样品前处理方法，分别在10、 15、 20、 25、 30 min测定提取物的峰面积，结果见表1。由表1可知，最佳提取时间为15 min。

表1 提取时间试验结果

2.4 色谱柱及流动相

选择Agilent ZORBAXEclipse XDB -Cl8( 150 mm×4.6 mm, 5-Micron )和Agilent ZORBAX Eclipse XDB- CN ( 250 mm×4.6 mm, 5-Micron )色谱柱及甲醇、不同比例的甲醇-水为流动相，分别进行试验。试验结果表明，在Agilent ZORBAX Eclipse XDB- CN柱上以甲醇-水 (体积比为25∶75)为流动相，分析时间短，峰型好，灵敏度高，符合分析要求。在此条件下，氢醌和苯酚混合标准溶液及洗发香波样品中添加标准溶液后的色谱图分别见图1、图2。

图1 氢醌和苯酚混合标准溶液色谱图

图2 洗发香波样品中添加了氢醌和苯酚混合标准溶液的色谱图

2.5 线性方程和检出限

利用氢醌和苯酚标准储备液配制成氢醌浓度依次为7.920、15.840、31.680、39.600、79.200 mg/L，苯酚浓度依次为9.696、19.392、38.784、48.480、96.960 mg/L的系列标准混合工作溶液。按照1.4的条件分别进行测定，以氢醌或苯酚的浓度(x)对相应的峰面积(y)进行线性回归，在7.920～79.200 mg/L范围内氢醌线性方程为y= 10.370 75x-1.156 02，相关系数r=0.999 99；在9.696～96.960 mg/L范围内，苯酚的线性方程为y=4.176 40x+0.172 47，相关系数r=0.999 99。以3倍信噪比计算氢醌和苯酚的检出限分别为0.049 29、0.125 8 mg/kg。

2.6 精密度试验

对氢醌浓度为7.920 mg/L和苯酚浓度为9.696 mg/L的混合标准溶液连续进样6次，测定结果见表2。

表2 精密度试验结果

2.7 回收试验

对不含氢醌和苯酚的洗发香波样品进行加标回收试验，加入3个不同浓度的混合标准溶液，每个浓度平行测定6次，按1.3方法进行样品处理，在1.4条件下进行测定，结果见表3。由表3可知，加标回收率为99.05%～100.90%。

表3 加标回收试验结果(n=6)

3 结论

建立的美白类、祛斑类化妆品和香波中氢醌和苯酚的高效液相色谱-二极管阵列检测器测定方法，样品前处理简单，操作方便，线性范围较宽，检出限低，精密度和准确度高，同时检测成本较低，可满足用户的实际需要，也为化妆品质量监督提供有力的技术支撑。

[1] 刘秋华,赵晶,贺勇,等.市售美白祛斑化妆品氢醌、苯酚含量调查[J].中国卫生检验杂志， 2003, 13(2):212.

[2] 杨红,刘秋华.化妆品中的氢醌、苯酚确认方法[J].中国卫生检验杂志, 2005, 15(5):550-553.

[3] 张玉黔,李宏志,贾薇,等.高效液相色谱法同时测定化妆品中氢醌、苯酚、抗生素和防腐剂等11种物质[J].中国卫生检验杂志，2008, 18(8):1 548-1 550.

[4] 赵同刚.化妆品卫生规范[M].北京：军事医学科学出版社，2007.