莲芝消炎片的质量标准研究

梁远园，桂蜀华，倪 晨（广州中医药大学新药开发研究中心，广州市 510405）

莲芝消炎片由穿心莲干浸膏和山芝麻干浸膏组成，具有抗菌消炎、清热解毒、凉血消肿作用[1，2]。临床上用于治疗肺胃有热、火毒内盛引起的咳嗽气喘、痄腮、乳蛾、喉痹咽痛。原质量标准中所采用的方法烦琐，故笔者采用薄层色谱（TLC）法对莲芝消炎片中穿心莲、山芝麻进行定性鉴别，采用高效液相色谱（HPLC）法对莲芝消炎片中脱水穿心莲内酯进行含量测定。

1 仪器与试药

SUMMIT HPLC仪，包括P580Pump、ASI-100自动进样器、柱温箱、DAD检测器（德国戴安公司）；万分之一电子天平（德国赛多利斯公司）；KQDE3200医用数控超声波清洗器（功率：150 W，频率：40 kHz，江苏昆山超声设备厂）；电子数控式恒温水浴锅（北京医疗设备厂）。

莲芝消炎片（广州采芝林药业有限公司，批号：试001、试002、试003）；各鉴别项阴性样品均由广州中医药大学新药开发研究中心提供；硅胶G、GF254薄层板（青岛海洋化工厂，规格：100×100 mm）；脱水穿心莲内酯对照品（供含量测定用，批号：110854-200305）、山芝麻对照药材（批号：121088-200702）均由中国药品生物制品检定所提供；其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 穿心莲的TLC鉴别[3，4]

取本品10片，除去包衣，研细，称取2 g，加乙醇40 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加10 mL乙醇溶解，作为供试品溶液；取缺穿心莲的阴性样品适量，同法制成阴性对照溶液；另取脱水穿心莲内酯对照品，加甲醇制备成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照TLC法[5]试验，吸取上述供试品溶液5 μL，对照品和阴性对照溶液各4 μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇（4∶3∶0.4）为展开剂，展开至8 cm，取出，晾干，在紫外光灯（254 nm）下检视。结果，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；阴性对照无干扰。穿心莲的TLC见图1。

图1 穿心莲的TLC1～3.供试品；4.脱水穿心莲内酯对照品；5.阴性对照Fig 1 TLC of Andrograpnis paniculata 1～3.test samples；4.dehydroandrographolide control；5.negative control

2.2 山芝麻的TLC鉴别[6，7]

取本品，去糖衣，研细，称取粉末3 g，加甲醇30 mL回流提取30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加10%氢氧化钾溶液30 mL，回流提取30 min，放冷，用浓盐酸调pH至4～5，用氯仿萃取2次，每次30 mL，合并氯仿液，蒸干，加甲醇1 mL溶解，作为供试品溶液；取缺山芝麻的阴性样品适量，同法制成阴性对照溶液；另取山芝麻对照药材0.5 g，加60%乙醇回流提取3次，每次1 h，过滤，合并过滤液，蒸干，加水10 mL，加乙酸乙酯5 mL萃取，分取乙酸乙酯层，浓缩至1 mL，作为对照药材溶液。照TLC法[5]试验，吸取上述供试品溶液5 μL，对照药材和阴性对照溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸（7∶0.5∶1）为展开剂，展开8 cm，取出，晾干，在紫外光灯（365 nm）下检视。结果，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点；阴性对照无干扰。山芝麻的TLC见图2。

图2 山芝麻的TLC1～3.供试品；4.山芝麻对照药材；5.阴性对照Fig 2 TLC of Radix helicteris 1～3.test samples；4.R.helicteris control；5.negative control

2.3 脱水穿心莲内酯的含量测定

2.3.1 对照品溶液的制备

精密称取脱水穿心莲内酯对照品5.0 mg，置于10 mL量瓶中，用甲醇适量溶解，加甲醇至刻度，摇匀，制成每1 mL含脱水穿心莲内酯0.50 mg的溶液，作为对照品溶液。

2.3.2 供试品溶液的制备取本品20片，研细，本品粉末置于五氧化二磷为干燥剂的干燥器内干燥48 h以上，取本品粉末（过四号筛）约0.20 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60%乙醇25 mL，称定重量，超声30 min，放冷，再称定重量，用60%乙醇补足失重，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3.3 色谱条件色谱柱：Phenomenex luna C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-水（60∶40）；流速：1.0 mL·min-1；柱温：25℃；检测波长：250 nm。理论板数按脱水穿心莲内酯峰计算应不低于3 000，方中其他成分对测定无干扰。色谱见图3。

图3 高效液相色谱图A.供试品；B.脱水穿心莲内酯对照品；C.阴性对照Fig 3 HPLC chromatogramsA.test samples；B.dehydroandrographolide control；C.negative control

2.3.4 线性关系考察 分别精密吸取上述对照品溶液2、4、6、8、10 μL，按上述色谱条件进样测定。以峰面积积分值（Y）为纵坐标，对照品进样量（X，μg）为横坐标，进行线性回归，得回归方程为Y＝26.449 4X－1.418 9（r＝0.999 9）。结果表明，脱水穿心莲内酯进样量在0.516～5.16 μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。

2.3.5 精密度试验 精密吸取对照品溶液10 μL，在上述色谱条件下依法测定，重复进样6次。结果，RSD＝1.02%（n＝6），表明仪器精密度良好。

2.3.6 稳定性试验 取同一供试品溶液适量，分别在放置0、2、4、8、10 h时，在上述色谱条件下各进样5 µL，依法测定。结果，RSD＝1.43%（n＝6），表明供试品溶液在10 h内稳定。

2.3.7 重复性试验 用同一批样品适量（批号：试003），按“2.3.2”项下方法制备供试品溶液，连续平行操作6份，在上述色谱条件下依法测定。结果，脱水穿心莲内酯的平均含量为10.45 mg·g-1，RSD＝1.70%（n＝6），表明本方法重复性良好。

2.3.8 加样回收率试验 精密称定6份已知含量的样品（含量：20 mg·g-1），每份0.20 g，分别加入2 mg脱水穿心莲内酯对照品，按“2.3.2”项下方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下依法测定含量，并计算加样回收率。结果，平均回收率为98.46%，RSD＝0.89%（n＝6）。

2.3.9 样品含量测定 取3批样品（批号：试001、试002、试003），按上述方法进行含量测定。结果，3批样品中每片含脱水穿心莲内酯分别为2.14、2.13、2.09 mg，RSD分别为1.80%、0.96%、1.30%，n均为3，表明样品中脱水穿心莲内酯含量在2.09 mg/片～2.14 mg/片之间，建议成品每片含穿心莲以脱水穿心莲内酯（C20H28O4）计不得低于2.00 mg。

3 讨论

在提取溶媒选择的试验中，笔者分别考察用无水乙醇、60%乙醇、甲醇3种溶剂提取样品，从结果来看，60%乙醇提取得到的脱水穿心莲内酯最多，提取最完全，因此提取溶媒选用60%乙醇。在考察提取方法试验中，笔者分别采用了超声提取、回流提取。结果，超声提取30 min的提取最完全，而且方法操作简单，故选用超声提取30 min。

综上，所建质量标准可用于莲芝消炎片的质量控制。

[1] 郑虎占，董泽红.中药现代研究与应用（第4卷）[M].北京：学苑出版社，1990：3 943.

[2] 孙璐璐，张石革.五官科用药（四）－咽喉用药[J].中国药房，2003，14（1）：59.

[3] 程本利.高效液相法测定穿心莲胶囊中脱水穿心莲内酯的含量[J].安徽医药，2005，9（8）：257.

[4] 朱至明.几种中成药中脱水穿心莲内酯的薄层色谱鉴别[J].中药材，2002，25（9）：634.

[5] 国家药典委员会编.中华人民共和国药典（一部）[S].2010年版.北京：中国医药科技出版社，2010：附录34.

[6] 文东旭.山芝麻的薄层色谱鉴别研究[J].广西医药，2003，25（12）：2 434.

[7] 郭新东.中药山芝麻的化学成分研究（I）[J].中山大学学报（自然科学版），2003，42（2）：52.