热休克蛋白60在鳞状细胞癌、鲍温丘疹病、日光性角化病中的表达

刘冬梅，蒋亦秀，张优拉，黄池清，付学峰

（浙江省金华市第五医院，金华321000）

许多基础和临床研究表明HSP60的高表达或异位表达与肿瘤的发生发展和生物学行为有密切的关系[1]，而国内外关于其在皮肤肿瘤中的表达及意义尚未见报道。我们采用免疫组化EnVision两步法，观察近年来在我科保存的鳞状细胞癌（SCC）,鲍温丘疹病（BP），日光性角化病（AK）的病理标本中HSP60的阳性率。并比较其阳性率，以探讨其在SCC、BP、AK中的临床意义。以发现HSP60在SCC、BP、AK病中的临床意义。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 随机收集2002年—2009年我科门诊病人SCC、BP、AK病各50例，其中的脱片和折片的标本被排除在外。结果SCC40例，男20例，女20例，低分化3例，中高分化37例，平均年龄70.59岁；BP 47例，其中男27例，女20例，平均年龄39.43岁；AK 47例，其中男25例，女22例，平均年龄68.23岁。肿瘤手术边缘正常组织为对照。所有病例均经病理诊断证实。标本经10%福尔马林液固定，石蜡包埋，连续切片，厚5μm，常规HE染色。

1.2 方法 采用免疫组织化学Envision两步法。切片常规脱蜡、水化；加入按1∶100稀释的一抗兔抗HSP60多克隆抗体（武汉市博士得），4℃过夜；加入二抗（福州迈新生物技术开发有限公司），室温孵育30 min；DAB显色，苏木素复染，光镜观察。用已知阳性的切片作阳性对照，PBS代替一抗作阴性对照。

1.3 结果判断 HSP60阳性结果判断：细胞浆出现棕黄色染色为阳性细胞，计数20个高倍视野的阳性细胞。根据阳性细胞百分率分为：阴性（-）为阳性细胞数<5%；阳性(+)为阳性细胞数6%～30%；中等强度阳性(++)为阳性细胞数31%～60%；强阳性(+++)为阳性细胞数>60%。以中等强度阳性和强阳性为过表达的病例。

1.4 统计学处理 把课题组成员读片的结果取平均值。由于资料不能满足正态性与方差齐性的要求，用秩和检验分析各组间的统计学差别（计算Z值），两两之间比较用秩变换分析，即先排秩后，再用方差分析中的SNK分析。统计运算在SPSS13.0 for windows软件上进行，以P<0.05为差异有统计学意义标准。

2 结果

2.1 病理组织形态 选取组织完整的标本进行观察和分析，经筛除后的标本例数详见表1。光镜下把皮肤SCC分为：高分化SCC、低分化SCC。

2.2 HSP60在SCC、BP、AK病表达强度与临床病理特征 HSP60在正常皮肤和三种皮肤肿瘤中的阳性表达产物均位于细胞质，为浅黄色至棕色均质粉状或颗粒状物质，阳性细胞呈点状、灶性以至弥漫性分布，在皮肤SCC和AK、BP中HSP60的表达从角质层到基底层成逐渐增强的趋势，基底细胞呈强阳性表达，在SCC中分化较好的细胞、靠近角珠和角质层的部分不表达HSP60，异形程度越高的细胞HSP60表达越多。见图1～4。

2.3 HSP60在SCC、BP、AK病中表达强度比较 HSP60在AK、BP、SCC，组间两两比较用秩变换分析，即排秩后用方差分析结果为AK=SCC=BP（P>0.05），即HSP60在AK组与SCC组、BP组与SCC组和AK组、BP组间比较没有统计学意义。SCC低分化和高分化组间Z值为0.929，P=0.372>0.05，因此HSP60在低分化的SCC组和高分化组的阳性表达比较没有统计学意义。见表1。

表1 HSP60在SCC、BP、AK病中表达强度

2.4 HSP60在SCC、BP、AK中表达阳性率与正常对照组比较 HSP60在AK、BP、SCC组的阳性表达率均高于正常组，其Z值分别为：-2.78，-4.549，-2.90；其 P 值分别为：0.005，0.000，0.003，P≤0.005有统计学意义。见表2。

表2 HSP60在SCC、BP、AK及其正常对照组中阳性率的比较

3 讨论

热休克蛋白（heat shoek protein，HSP），又称应激蛋白（stess protein，SP）有高度保守的氨基酸序列及其编码基因的蛋白质。在正常生理条件下，如细胞的增生和分化，胚胎的生长和发育、激素的刺激等，HPS即呈基础表达，于应激状态下在细胞内合成显著增加。已发现HSP60在癌的发生机制上起重要作用，还与肿瘤细胞的转移相关，细胞表达增强，且在癌的越早期阳性表达率越高[2，3]。本研究显示HSP60在SCC、BP、AK病表达强度均高于正常组。说明HSP60可能与此三种肿瘤的发生发展有关系。已知HSP60与恶性肿瘤的发生、转移和预后有关[3-5]，本实验也可以看出异形程度越高的细胞HSP60表达越多，而在SCC中分化较好的细胞，靠近角化珠和角质层的部分不表达HSP60，由于标本中低分化的数目比较少，没有统计学意义，因此HSP60在皮肤SCC中是否与角质形成细胞的分化程度有关还有待进一步研究。

（鸣谢：中国医学科学院皮肤病研究所病理科曾学思教授给予的帮助和指导！）

[1]王少彬，陈俊辉，陈理明.食管SCC中热休克蛋白10和60的表达及其意义[J].国际肿瘤学杂志,2006,33（2）：156.

[2]Cappello F.60kDa Chaperonin (hsp60)is overexpressed during colorectal carcinogenesis[J].Eur J Histochem,2003,47：105-109.

[3]Cappello F，Bellafiore M，Palma A，et al.Expression of 60 kd heat shock protein increases during carcinogenesis in the uterine exocervix[J].Pathobiology,2002-2003,70：83-88.

[4]Cappello F，DiStefano A，D'Anna SE,et al.Immunopositivity of heat shock protein 60 as a biomarker of bronchial carcinogenesis[J].Lancet Oncol，2005，6：816.

[5]曹智，马骏，袁文俊，等.热休克蛋白60与细胞凋亡[J].生理科学进展，2008，39(3):267-270.