四妙勇安汤对2型糖尿病大鼠血管内皮细胞功能的影响*

黄金玮,常 柏

（1.唐山工人医院分院内三科，唐山 063000；2.天津医科大学代谢病医院，天津 300070）

糖尿病大血管病变属中医的“脱疽”范畴，四妙勇安汤为治疗“脱疽”的代表方剂。笔者长期应用四妙勇安汤治疗糖尿病大血管病取得了良好的治疗效果。本研究试图以2型糖尿病大鼠为研究对象探讨四妙勇安汤治疗糖尿病大血管病变的作用机制。

1 材料与方法

1.1 T2DM大血管病变大鼠模型的制备 SPF级雄性 Wistar大鼠，50 只，体质量：（180±20）g，由中国医学科学院放射医学研究所实验动物中心提供。许可证号：SCXK津2006－0001。高脂饲料喂养3个月，在空腹6 h状态下，尾静脉快速注射链脲佐菌素30 mg/kg，1周后取尾静脉血，检测血糖＞16.7 mmol/L的大鼠作为2型糖尿病（T2DM）模型大鼠；

1.2 实验分组、给药及指标检测 选取T2DM大鼠36只，按血糖结合体质量分层随机分为3组：模型组、罗格列酮治疗组、四妙勇安汤治疗组，另取12只大鼠作为正常对照组。各组动物每日灌胃给药1次，正常对照组和T2DM模型组灌胃等剂量自来水，治疗组给予罗格列酮、四妙勇安汤，连续给药4周。实验期间除正常对照组给予普通饲料外，其余各组均给予高脂高热量饲料。用药前、2周、4周分别取尾静脉血用强生血糖仪检测血糖，4周末股动脉取血，离心血清，检测各组大鼠糖化血清蛋白；给药4周后，各组大鼠股动脉取血，取血清检测血管可溶性细胞间黏附分子（sVCAM－1），血浆检测一氧化氮（NO）、内皮素－1（ET－1）、肿瘤坏死因子－α（TNF－α）。

1.3 实验药物及试剂 四妙勇安汤饮片由天津中新药业集团有限公司提供。马来酸罗格列酮，4mg/片，葛兰素史克（天津）有限公司生产，批号：03110001。链脲佐菌素（STZ），美国Sigma公司产品。大鼠TNF－α、sVCAM－1定量EIA试剂盒，尚柏生物医学技术（北京）有限公司。大鼠ET-1放射免疫分析药盒，北京市福瑞生物工程公司提供。NO测试药盒：南京聚力生物医学工程研究所提供。

2 结果

T2DM模型大鼠血清sVCAM-1、血浆TNF-α含量明显升高；血浆ET-1较正常组上调，NO明显下调。四妙勇安汤及罗格列酮均能显著降低血清sVCAM-1、血浆TNF-α含量，显著降低血浆ET-1的含量，显著提高血浆NO含量（P＜0.01）。见表1。

3 讨论

糖尿病大血管病变属中医的“消渴”“脱疽”范畴，属于糖尿病的脉损阶段，治疗上把握“阴虚为本，燥热为标”的本虚标实的核心病机。四妙勇安汤载于清代鲍相敖《验方新编》，方能滋阴降火，和营解毒，由金银花、玄参、当归和甘草组成，为治疗“脱疽”的代表方剂，临床广泛用于下肢血管病变。笔者长期应用四妙勇安汤治疗糖尿病大血管病取得了良好的治疗效果。

表1 四妙勇安汤对T2DM大鼠血清sVCAM-1、血浆TNF-α、NO、ET-1的影响 (±sTab.1 Effects of Simao yongan decoction on serum levels of sVCAM-1,plasma TNF-α,NO,ET-1 in diabetic rats(±s

表1 四妙勇安汤对T2DM大鼠血清sVCAM-1、血浆TNF-α、NO、ET-1的影响 (±sTab.1 Effects of Simao yongan decoction on serum levels of sVCAM-1,plasma TNF-α,NO,ET-1 in diabetic rats(±s

注：与正常对照组比较，▲P<0.05，▲▲P<0.01；与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。

组别正常对照组模型组罗格列酮组四妙勇安汤组sVCAM-1（mg/L）4.06±0.326.01±0.73▲4.46±0.42*4.08±0.39*TNF-α（ng/mL）9.86±2.7646.89±12.06▲28.02±8.62*▲16.85±7.33*ET-1（ng/mL）77.58±9.21127.83±14.52▲▲87.95±8.01**93.24±9.12**NO（μmoL/L）75.85±6.9645.72±7.03▲▲63.23±8.47**67.35±7.87**

内皮功能紊乱是动脉粥样硬化的起始阶段，也是其中心环节。血管内皮功能同多种因子相关。VCAM－1是血管内皮细胞表面的黏附分子，属于免疫球蛋白超家族，表达于细胞表面的VCAM－1脱落后进入血液成为可溶性细胞间黏附分子1（sVCAM-1）。卢曙芳等[1]认为颈动脉内膜厚度（IMT）与血清sVCAM-1呈正相关，本研究提示糖尿病组血清sVCAM-1水平明显高于正常对照组，说明sVCAM-1参与了2型糖尿病大血管病变的病理过程，其水平增高可能是血管内皮激活或早期动脉硬化的分子标志，并可作为糖尿病大血管病变的血清学标志。

TNF－α 由单核/巨噬细胞活化产生，TNF－α 的高表达，刺激sVCAM－1，使其mRNA和蛋白质在血管平滑肌表达，使血管平滑肌与单核细胞，淋巴细胞黏附，引起动脉内皮细胞（VEC）损伤，导致凝血/纤溶系统失衡及促进炎性细胞对VEC黏附，导致血栓调节素在内皮表面的下降调节作用，使凝血酶催化蛋白激酶C（PKC）活性下降，在糖尿病血管并发症的形成和发展中起着重要作用[2]。内皮素（ET）和NO是血管内皮细胞（VEC）合成及释放的一对血管缩、舒因子，NO能舒张血管，抑制血小板黏附和聚集，抑制血管平滑肌细胞增殖和迁移；ET是已知最强的缩血管多肽，具有促血管收缩和平滑肌细胞增殖分裂的作用。ET可负性调节内皮NO的释放，NO浓度的增高可抑制ET的生成，两者的动态平衡维持着正常的血管内皮功能，ET的升高和NO的减少是血管内皮损伤的标志。本研究中TNF-α，ET水平在模型组明显升高，NO水平明显降低，均为糖尿病血管病变发生发展的重要因素。

罗格列酮能够改善胰岛素抵抗，并能通过PPAR-γ受体保护血管内皮功能。本研究结果显示，罗格列酮及四妙勇安汤均能显著降低糖尿病大鼠血管并发症模型血浆ET-1、TNF-α含量，升高血浆NO含量，降低PKC通路及氧化应激所介导的TNF-α诱导的sVCAM高表达，抑制单核细胞向血管内皮的黏附，且四妙勇安汤可能更优于罗格列酮，能够更有效保护血管内皮功能，阻滞或延缓糖尿病动脉粥样硬化的发展，降低糖尿病大鼠血管并发症风险。

[1]卢曙芳，沈建国，朱麒钱，等.2型糖尿病患者颈动脉内膜中层厚度与细胞间黏附分子1、c反应蛋白的相关性[J].中华内分泌代谢杂志，2006，22(4)：358-359.

[2]Therry Couffinlad,TNF-αstimulate ICAM-1(in tercellular adhesion molecule-1)expression in human vascular smooth muscle cells Atherosclerosis Thromb,2003,13(3)∶407-417.