针刺对局灶性脑缺血大鼠缺血脑组织及血清IL-6的影响*

郭永明，梁宪如

（1.天津中医药大学针灸学院，天津 300193；2.武警医学院附属医院，天津 300162）

白介素-6（IL-6）是由多种细胞产生的具有重要生物学活性的细胞因子，它既可诱导急性时相蛋白的产生，也是B细胞终末分化并分泌抗体的必须因子，在免疫调节中发挥着重要作用[1-2]。近年来研究报道，脑缺血后极早期脑内、血浆和脑脊液中IL-6的水平即发生变化[3]，表明IL-6可能参与了急性脑缺血时的炎症反应等病理生理过程。本实验采用热凝法造成大脑中动脉阻塞模型，动态观察了局灶性脑缺血大鼠脑组织和血清中IL-6的变化及“醒脑开窍”针法的>干预效应。

1 材料与方法

1.1 实验动物及分组 选用Wistar大鼠130只（由天津市卫生局实验动物中心提供），体质量（220±20）克，雌雄各半，随机分缺血组、针刺组各50只、假手术组25只、正常组5只。前3组又分为3、6、12、24、48 h各时段组，其中缺血组、针刺组每组各10只、假手组每组各5只。

1.2 模型的制作 缺血组及针刺组动物经3%的戊巴比妥钠（45 mg/kg）腹腔注射麻醉，侧卧位固定，于眼眶至耳的中点纵行切开皮肤约1 cm左右，分离并切去部分颞肌，暴露颞骨，做1个约3 mm的骨窗，轻抬脑，可见横过嗅束向上走行的大脑中动脉（MCA），用加热的不锈钢丝轻轻接触靠近嗅束上缘的大脑中动脉，使之快速凝闭，遇有血管破裂可用小棉球局部轻压止血，术后创面敷少许抗生素（先锋Ⅳ），缝合伤口并单笼饲养。假手术组除不凝闭MCA外，余手术步骤同缺血组。

1.3 腧穴的选取及处理 根据“大鼠穴位图谱”，针刺组选取“醒脑开窍”针法主穴人中、内关，先针刺人中，用雀啄手法10次，继刺双侧内关穴，直刺捻转提插泻法1 min。3 h针刺组，手术后1 h针刺；6、12 h针刺组，手术后1 h针刺，处死前蓄积1次；24、48 h针刺组针刺2次/d，处死前蓄积1次。正常组、假手术组及缺血各组动物同样抓取，不做其他处理。

1.4 指标检测及方法

1.4.1 标本收集 各组动物在规定的时间点摘眼球取血，分离血清，-20℃冰箱保存，待测。然后迅速断头取脑，在冰盘上分开两大脑半球，剥离大脑中动脉（MCAO）侧皮质，称质量，按 400 mg∶1 mL 的比例加生理盐水作组织匀浆，2000 r/min离心15 min，取上清，-20℃冰箱保存，待测。

1.4.2 IL-6 的测定 采用 FT-6SDF γ-晶体闪烁计数仪（天津中医药大学第一附属医院放免室提供），用放射免疫分析法测定各组动物脑组织及血清中IL-6含量，IL-6检测试剂盒由北京东亚免疫技术研究所提供，操作程序严格按照药盒说明书进行。

1.5 统计学处理 数据用表示，用SPSS 10.0统计软件处理，进行方差分析，并进行组间两两比较。

2 结果

2.1 局灶性脑缺血大鼠脑组织IL-6含量的变化及针刺的影响 见表1。结果表明局灶性脑缺血后早期脑组织中IL-6含量即明显升高，48 h基本恢复正常，“醒脑开窍”针法可在缺血早期有效降低脑组织IL-6含量，并使其恢复正常。

表1 各组动物脑组织白介素-6含量（±s）Tab.1 The expression of IL-6 in brain tissue in different groups（±s）μg/g

表1 各组动物脑组织白介素-6含量（±s）Tab.1 The expression of IL-6 in brain tissue in different groups（±s）μg/g

注：与同时段缺血组比较：※P<0.05，※※P<0.01；与同时段假手术组比较：★P<0.05；★P<0.01；与正常组比较：▼P<0.05，▼▼P<0.01。

组别缺血组针刺组假手术组正常组3 h 740.85±149.85▼▼★★222.16±135.23※※▼▼★★480.49±222.88467.51±159.466 h 725.16±134.64▼▼★★185.38±85.27※※▼▼★★460.49±149.04467.51±159.46组别缺血组针刺组假手术组正常组12 h 955.29±215.73▼▼★★261.18±117.93※※▼★★503.97±127.70467.51±159.4624 h 685.72 ±113.28▼▼397.65 ±187.07※※★615.836±116.99467.51±159.4648 h 400.10±98.78★537.97±181.26※577.04±172.15467.51±159.46

2.2 局灶性脑缺血大鼠血清IL-6含量的变化及针刺的影响 见表2。结果表明局灶性脑缺血后血清IL-6含量早期即出现异常升高，然后逐渐降低，至24 h基本降到正常水平，“醒脑开窍”针法可使血清IL-6含量在脑缺血后3到12 h降低，24 h之后增加。

表2 各组动物血清白介素-6含量（±s）Tab.2 The expression of IL-6 in serum in different groups（±s）μg/L

表2 各组动物血清白介素-6含量（±s）Tab.2 The expression of IL-6 in serum in different groups（±s）μg/L

注：与同时段缺血组比较：※※P<0.01;与同时段假手术组比较：★★P<0.01;与正常组比较：▼▼P<0.01。

组别缺血组针刺组假手术组正常组3 h 107.94±65.10▼▼★★63.67±33.90※※31.03±15.7031.89±13.506 h 103.34±47.78▼▼★★50.08±28.84※※25.95±13.3731.89±13.5012 h 85.73±30.78▼▼★★45.75±24.11※※22.94±10.6431.89±13.50组别缺血组针刺组假手术组正常组24 h 25.66±12.7683.34±42.58※※▼▼★★28.85±14.5231.89±13.5048 h 36.77±17.32110.76±32.11※※▼▼★★41.31±6.5231.89±13.50

3 讨论

IL-6在脑缺血急性反应期发挥了重要的抗炎作用，在中枢神经内具有神经保护作用[4]。中枢神经系统缺血损伤过程中体内IL-6水平增高，IL-6通过与其受体（IL-6R）结合，识别信号转导成分gpl30，形成具有生物活性的三元复合体，立即激活细胞内的多种激酶，导致蛋白磷酸化和基因表达，进而发挥其多元化神经营养功能而起到抗缺血损伤、促神经修复等神经保护作用。IL-6促进胶质细胞分泌神经生长因子（NGF）并增强NGF信号转导，可能是IL-6多元化神经营养作用的基础[5]。

本次实验发现局灶性脑缺血3 h脑组织中IL-6含量即明显升高，12 h达高峰，24 h开始降低，48 h降至正常范围，而血清中IL-6含量3 h即急剧升高，6、12 h逐渐降低，24到48 h降至正常范围，该结果与文献报道[6-9]基本一致。在其他实验中还观察到脑缺血后白介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、IL-8含量也发生明显改变，可以推测脑缺血后机体处于应激状态，通过神经—内分泌—免疫网络充分调动机体的抗损伤修复能力，使缺血局部及外周血中IL-6含量急剧增加，以拮抗其他炎性细胞因子的合成分泌，同时发挥IL-6其自身的神经保护作用以减轻缺血性神经损害；当发生脑缺血损害后机体可能通过多器官、多途径迅速分泌大量IL-6进入血液，到达缺血局部发挥抗损伤及修复作用，在这种应激性保护过程中局部脑组织的反应可能滞后于全身整体，所以外周血中IL-6缺血后3 h即急剧升高而脑组织中12 h才达高峰，同时这种应激反应可能是发生缺血性损害后的机体产生的一种即早反应，因此至48 h脑组织及血中的IL-6基本恢复正常水平。针刺治疗后缺血性损害减轻，同时抑制了其他炎性细胞因子的表达或合成，机体的应激反应减轻，因此针刺组早期（到12 h）脑组织及血清中IL-6含量均较缺血组明显降低，至于血清IL-6含量24 h以后出现异常升高，推测其原因可能是通过针刺多途径、多靶向的调节作用，促进机体合成分泌大量IL-6进入血液，通过血运到达缺血区脑组织发挥其抗炎、神经保护及促进受损神经元修复的作用。因此，笔者认为“醒脑开窍”针法对IL-6的这种调节作用可能是其治疗缺血性脑卒中的作用机制之一。

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