胶艾颗粒剂对正常小鼠免疫调节作用的影响

李祥华，许甲凤，杜亚明 (长江大学医学院，湖北 荆州 434000)

张家军 (长江大学附属第一医院 荆州市第一人民医院检验科，湖北 荆州 434000)

胶艾颗粒剂对正常小鼠免疫调节作用的影响

李祥华，许甲凤，杜亚明
(长江大学医学院，湖北 荆州 434000)

张家军
(长江大学附属第一医院 荆州市第一人民医院检验科，湖北 荆州 434000)

目的：探讨胶艾颗粒剂的免疫作用及其机制。方法：取健康昆明小鼠80只随机分为正常对照组、胶艾颗粒剂高、中、低剂量组，每组20只。正常对照组给予生理盐水，胶艾颗粒剂高剂量组灌胃给予试药20g/kg，中剂量组给予10g/kg，低剂量组给予5g/kg，连续15d。采用重量法称量小鼠脾脏和胸腺质量，以其质量与体质量之比作为胸腺和脾脏指数。Giemsa染色计数腹腔巨噬细胞(PMΦ)并计算吞噬百分率和吞噬指数。用比色法测定红细胞(RBC)裂解释放的空斑形成细胞(PFC)量。采用温育法计算绵羊RBC(SRBC)致敏小鼠抗体生成能力。观察Giemsa染色后淋巴细胞个数并计算母细胞转化率。结果：胶艾颗粒剂能增加小鼠脾脏和胸腺的重量(高、中剂量组均P<0.01 ，低剂量组P<0.05)；增强小鼠PMΦ的吞噬能力(高、中剂量组均P<0.01，低剂量组P<0.05)；提高小鼠溶血值，增加PFC数(高剂量组P<0.01，中、低剂量组均P<0.05)；促进SRBC致敏小鼠抗体生成(高剂量组P<0.01，中、低剂量组均P<0.05)；能提高小鼠淋巴细胞转化率(高剂量组P<0.01，中、低剂量组均P<0.05)。高剂量组作用与低剂量组比较，差异有统计学意义(P<0.05)。结论：胶艾颗粒剂的免疫增强作用可能与其能使胸腺和脾脏质量增加，PMΦ的吞噬能力增强，淋巴细胞的转化率升高及抗体能力加强等作用有关。

胶艾颗粒剂；免疫；免疫调节剂；小鼠

胶艾颗粒剂是由胶艾汤经剂型改造而成。原方是张仲景治疗妇人下血之良方，为补血止血、调经安胎之剂，是临床治疗功能性子宫出血的一个重要方剂。前期研究表明胶艾颗粒剂有止血[1]和补血健脾[2]作用。笔者探讨了胶艾颗粒剂对正常小鼠免疫功能的影响。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1 试验药物 胶艾颗粒剂，湖北省荆州市津奉药业发展有限公司，批号2006091601。

1.1.2动物 清洁级小鼠，体质量(20±2)g；雌雄各半，华中科技大学同济医学院实验动物中心提供，实验动物许可证号：SYXK(鄂)2004-0028。

1.1.3 试剂 Giemsa染液、淋巴细胞分离液，上海化学试剂厂，批号 070713；PRMI-1640、植物血凝素(PHA)，Sigma公司(美国)，批号 3305RB560；L-谷氨酰胺，上海东风化学试剂厂，批号0511143；小牛血清，杭州四季青生物工程公司，批号20070506。

1.1.4仪器 ThermoLabsystems Multisken M3 型酶标仪，芬兰；LD4-2A型低速离心机，北京离心机厂；765C型分光光度计，上海分析仪器厂；Leica DMLB2型光学显微镜，德国；PG3022型酶联免疫检测仪，华东电子管厂。

1.2方法

1.2.1 实验动物分组与处理 取小白鼠，随机分为正常对照组，胶艾颗粒剂(试药)高、 中、低剂量组，共4组，每组20只。试药组每组分别灌胃给予胶艾颗粒剂(使每ml含药液2g)，试药高剂量组20g/kg，试药中剂量组10g/kg，试药低剂量组5g/kg， 1次/d，连续15d。正常对照组给予同样量的生理盐水。

1.2.2 小鼠免疫器官指数的检测 方法计算每组动物器官指数。

1.2.3小鼠腹腔巨噬细胞(PMΦ)吞噬功能的检测 方法每鼠腹腔注射(ip)10%蛋白胨0.2ml，32 h后ip新鲜鸡RBC 0.5ml，30min后处死动物，立即剖腹，洗出腹腔液，37℃温育15min后离心，取细胞悬液涂片，甲醇固定，Giemsa染色后在油镜下计数200个PMΦ。以PMΦ吞噬鸡 RBC 的吞噬百分数和吞噬指数为指标表示药物对小鼠PMΦ吞噬功能的影响。

1.2.4小鼠空斑形成细胞(PFC)的检测 方法每鼠ip 5% SRBC 0.2ml，4d后放血致死，取脾脏，制成脾细胞悬液 ( 约5×106个/ml )。取该悬液0.5ml，加入0.2% SRBC和1∶10 小鼠血清各0.5ml，混匀。另设不加补体作为空白对照，37℃ 温育1h 后离心，取上清液比色(波长为413nm)，测定 红细胞裂解释放的PFC量 ( 以D413值表示 ) 。

1.2.5 小鼠淋巴细胞转化率试验 方法，取血0.1ml加入1.8ml灭菌的PRMI-1640(内含20%小牛血清，30.0g/L谷氨酰胺1.0ml)，再加入PHA 0.1ml，37℃温育3d后吸出血清，加8.5g/L氯化铵4ml，混匀后37℃水浴10min，离心。取沉淀物滴加于玻片上，Giemsa染色液染色，油镜下观察200个淋巴细胞，计算其母细胞转化率。

1.2.6SRBC致敏小鼠抗体生成的检测 方法，每鼠ip10% SRBC 0.2ml，停药后次日脱颈椎取血，离心取血清，56℃灭活30min，以生理盐水倍比稀释，将不同稀释度的血清分别加入血凝板内，每孔20μl，再加 0.5% SRBC20μl，混匀，37℃孵育3h，观察血凝程度，计算抗体积数。

2 结 果

2.1胶艾颗粒剂对小鼠免疫器官指数的影响实验结果显示，试药三个剂量组均可增加脾脏和胸腺指数，与正常对照组比较，高、中剂量组(P<0.01)和低剂量组 (P<0.05) 均有统计学差异，高剂量组作用优于低剂量组 (P<0.05)。结果见表1。

表1 胶艾颗粒剂对小鼠免疫器官指数的影响

注：与正常对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。

2.2胶艾颗粒剂对小鼠PMΦ吞噬功能的影响结果表明，试药三个剂量组均能提高PMΦ吞噬百分率和吞噬指数。高、中剂量组与正常组比较，差异有统计学意义(P<0.01)，试药低剂量组与正常对照组比较，也有统计学差异(P<0.05)。试药高剂量组与低剂量组比较，虽有一定差异，但无统计学意义(P>0.05)。结果见表2。

表2 胶艾颗粒剂对小鼠PMΦ吞噬功能的影响

注：与正常对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。

2.3胶艾颗粒剂对小鼠PFC的影响结果表明，试药各组均能提高小鼠溶血值，增加PFC数，与正常对照组比较，高剂量组差异明显(P<0.01)，中、低剂量组也有一定差异(P<0.05)。高剂量组与低剂量组比较，亦有统计学意义(P<0.05)。结果见表3。

2.4胶艾颗粒剂对小鼠淋巴细胞转化率的影响实验结果表明，试药不同剂量均能提高淋巴细胞转化率，与正常对照组比较，试药高剂量组差异有统计学意义(P<0.01)；试药中、低剂量组也有一定差异(P<0.05)。高剂量组与低剂量组比较也显示出统计学差异 (P<0.05)。结果见表3。

2.5胶艾颗粒剂对SRBC致敏小鼠抗体生成的影响结果显示，试药各剂量组均能增加实验动物抗体积数。但高剂量组的作用更明显，与正常对照组比较有统计学意义(P<0.01)；与低剂量组比较，亦显示一定差异(P<0.05)。中、低剂量组与正常对照组比较，有一定的差异 (P<0.05)。结果见表3。

表3 胶艾颗粒剂对小鼠PFC和淋巴细胞转化率的影响

注：与正常对照组比较，*P<0.05,**P<0.01。

3 讨 论

胸腺和脾脏为体内主要的免疫器官。胸腺为初级淋巴器官，游走的造血干细胞进入胸腺原基，在此分化增殖成T淋巴细胞，与细胞免疫有关。脾脏为次级淋巴细胞，免疫活性细胞移行于此，并在此处因受免疫过程中异体抗原刺激而进一步增殖分化和成熟。脾脏中有T淋巴细胞和B淋巴细胞，还有巨嗜细胞，与体液免疫、细胞免疫均有密切关系。一些免疫抑制剂能降低胸腺和脾脏质量，同样一些免疫增强剂能使胸腺和脾脏的质量增加。我们的前期实验结果表明，胶艾颗粒剂能显著升高血清HC50和血清K值，能增加Hb含量和RBC数量[2]。在本实验中，我们发现胶艾颗粒剂能够显著增加胸腺和脾脏的质量，能使淋巴细胞转化率升高，且与剂量呈正相关。

PMΦ在免疫应答的各个环节中起着重要作用。方中阿胶、当归、白芍、地黄、艾叶都有免疫增强作用，能调节机体免疫机制，起着扶正固本作用。结果显示，胶艾颗粒剂可明显升高PMΦ的吞噬百分率。这说明胶艾颗粒剂能增强机体的免疫应答反应。能使SRBC溶解，产生空斑，提高小鼠溶血值，增加PFC数。其作用强弱与剂量有关。

SRBC免疫小鼠后可使其淋巴细胞产生特异性抗SRBC抗体。在给予胶艾颗粒剂治疗后，各治疗组能显著增加小鼠抗体积数。

以上结果提示，胶艾颗粒剂具有调节机体的免疫功能，增强机体的免疫能力。这对于处在体质虚弱、抗病能力低下的机体，在治疗疾病的同时，胶艾颗粒剂可以起到扶正固本的作用。

[1]李祥华，张家均，杜亚明，等. 胶艾颗粒剂对虚寒失血动物出血的影响[J]. 中药药理与临床，2007：23 (3)：11-12.

[2]李祥华，张家均，许甲凤，等. 胶艾颗粒剂对动物血虚和脾虚的影响[J]. 中药药理与临床，2008：24(6)：7-8.

[3]李仪奎. 中药药理实验方法学[M]. 上海：上海科学技术出版社，1991：155.

[4]徐叔云，卞如濂，陈修. 药理实验方法学[M]. 3版. 北京：人民卫生出版社，2002：1433-1456.

[5]陈奇. 中药药理实验方法学[M]. 北京：人民卫生出版社. 1993：747-749.

[编辑] 一 凡

10.3969/j.issn.1673-1409(R).2010.03.002

R285.5

A

1673-1409(2010)03-R003-03