凉山彝族地区鸡新城疫免疫程序试验探讨

李翠蓉

（西昌学院，四川西昌 615013）

鸡新城疫（ND）是一种由NDV（副黏液病毒）引起的鸡的一种高度接触性和高度毁灭性的急性败血性传染病，在我国饲养大环境中NDV普遍存在，典型、非典型新城疫时有发生，而由于新城疫疫苗的广泛应用，典型新城疫已较少见，但非典型新城疫却呈现上升趋势。其中一个重要原因，是免疫程序不合理，不能给鸡群提供强有力的保护。目前，机械化大型养鸡场免疫程序[1]的试验研究国内外已有较多的报告，但就凉山彝族地区因鸡种复杂，鸡龄差异大，饲养分散，敞放养方式，疫苗保藏条件差，所以在本地区免疫接种困难较大。针对上述现状，探讨、制定一个合理的免疫程序，给新城疫流行地区的鸡群提供强有力的保护是大家关注的焦点。作者于2008—2009年在西昌市周边的7个彝族聚居乡进行了本次试验。

1 材料

1.1 试验鸡群

本试验免疫鸡群来自西昌市小庙、四合、西乡、琅环、特尔果5乡6村共2 550只鸡，随机取532只用于试验检测。

1.2 生物制品

ND 疫苗：I系（批号：090411），Ⅱ系（批号：090208）均由成都天邦生物制品有限公司提供，按说明使用。

HI试验用抗原：系西昌学院动物科学学院微生物室制备的浓缩抗原，含Lasota系病毒的尿囊液经福尔马林灭活，聚乙二醇浓缩制成，其血凝价在1:7 200以上，用聚乙烯塑料管小剂量分装，置4℃冰箱保存备用。

ND强毒：系中国兽药监察所提供的F48E8强毒，对敏感鸡的最小致死量（M.L.D.）为 10-7，1 mL。由本实验室继代保存。攻毒时每只鸡肌肉注射10-3，1 mL。

ND凝集原：ND全血平板凝集原（Ag），由成都天邦生物制品有限公司提供。

1.3 稀释液

试验所用的稀释溶液均为灭菌的磷酸盐缓冲液（简称PBS）。pH7.4的 PBS 配方[2]：KH2PO40.3 g，Na2HPO42.2g，NaCl8.5g，H2O 1000mL。

1.4 RBC悬液

采健康成年鸡新鲜血液，抗凝离心（3 000 r/min）5 min后，用 20倍量pH7.4的PBS液洗涤4次，最后1次离心15 min。吸取压积红细胞（RBC），加PBS液配成1%RBC悬液备用。

1.5 器材

选用96孔V型反应板，吸头，八道移液器（0.025 mL），微型振荡器，离心机（3 000 r／min），冰箱，1 次性聚乙稀塑料采血管，注射器（2 mL）。

2 方法

2.1 免疫程序

试验按三个免疫程序组进行。每组免疫鸡800~900只。甲组为2~3年的老鸡，850只，2008年11月用I系疫苗1次肌注（1 mL/只）对本组鸡肉进行1次免疫接种。乙组为2008年8至9月孵出的雏鸡，800只（8月和9月孵化的雏鸡各分为一小组，每组400只），1~4日龄Ⅱ系疫苗滴鼻首免，15~20日龄Ⅱ系疫苗2免，再于3月龄、5月龄I系疫苗二次免疫接种，先后共免疫四次。丙组为2008年8月孵出的雏鸡900只，5~9日龄Ⅱ系疫苗滴鼻首免，再于3月龄I系疫苗肌注（1mL/只）免疫，共免疫接种2次。

2.2 HI抗体检测

应用血凝抑制（HI）试验β-微量法。各试验组鸡群随机采集血样。用三棱针刺破翅下静脉，再用1次性聚乙稀塑料采血管（内径2 mm）引流血液至8~9 cm长度后，分离血清，作为待检免疫血清（Ig），测定其鸡体ND免疫抗体水平（HI抗体）。抗体滴度效价用其倒数的对数表示，鸡群抗体水平以其抽检样品几何均值表示。

在HI试验的同时，用ND全血平板HI试验现场随机取样进行测定，快速定性。

2.3 免疫效力检验

HI抗体β-微量法抽检受试鸡只数240~360只，不少于试验鸡群总数的0.6%~0.9%。在各次免疫后于2009年8月上旬，各组鸡群随机抽样测HI抗体水平[3]，并用全血平板HI试验作快速定性。同时对每组试验鸡随机抽取10只进行攻毒试验，检验其保护率。攻毒试验设对照鸡6只，攻毒后连续观察15 d，并测定其HI抗体滴度，在观察期间内ND死亡或严重发病者均判为不保护。

3 结果

3.1 β-微量法HI抗体检测结果

甲组免疫鸡群：为西昌市四合乡共免疫鸡850只，其中在木阿莫村和阿为克子村随机抽测18户（共养鸡156只）88只，均为2~3年的老鸡。乙组免疫鸡群；西昌市琅环乡共免疫鸡800只，其中在吞斤阿莫村和坚觉八甘村随机抽测12户（共养鸡126只）58只，年龄均为2月龄新鸡。丙组免疫鸡群：为西昌市特尔果乡共免疫鸡900只，其中在尾子可拉达村和古基堡村随机抽测8户（共养鸡186只）59只，年龄均为8~12月龄的新鸡。甲乙丙三个组随机抽测鸡只血样，用β~微量法HI抗体检测结果见表1。

?

3.2 全血平板HI抗体检测结果

甲组免疫鸡群为小庙乡2~3年老鸡随机抽检79只，乙组免疫鸡群为四合乡木阿莫村5~12月龄鸡随机抽检48只，丙组免疫鸡群为西乡乡12月龄鸡随机抽检170只。甲乙丙三个组随机抽测鸡只血样，用ND全血平板HI抗体检测[4]，结果见表 2。

3.3 攻毒试验结果

?

于2009年8月上旬在对各组鸡群抽测HI抗体滴度和ND全血平板HI抗体快速检测的同时，对甲乙丙三组鸡群随机各取10只（其中乙组11、12月龄鸡各取5只）免疫鸡进行攻毒试验[5]，并设对照组（未免疫鸡10只），结果见表3。

?

4 讨论

4.1 试验结果证明，2年以上的老鸡（甲组）在1年1次NDI系颈皮下注射免疫接种后9个月，其HI抗体滴度平均值为6.29log2，有的鸡只高达（8~9）log2。攻毒试验结果保护率为100%。说明2年以上的老鸡每年1次I系免疫具有良好的保护力，能够抵抗ND野毒的侵袭而免于感染。1年以内的新鸡（丙组），经9日龄Ⅱ系滴鼻和3月龄I系颈皮下注射后的9个月，其HI抗体滴度平均值为4.53log2，已接近免疫临界线（4log2）水平，攻毒试验结果保护率仅80%。这时，如果鸡群遇ND野毒侵袭，那些少数免疫水平较低的鸡就可能发病，或呈现一过型ND经过。建议，在常规Ⅱ系和I系免疫后，鸡龄11~12月再行NDI系颈皮下注射免疫接种1次，尤其对有ND流行的乡村鸡群可获得坚强的保护力。

4.2 经Ⅱ系2次滴鼻后再于3、5月龄分别I系颈皮下注射等4次免疫（乙组），并在末次接种后6~7个月，其HI抗体滴度平均值为4.86log2与丙组HI抗体滴度平均值4.53log2近似，其均数差异显著性检验结果p>0.05，表明其差异不显著。虽用I系2次免疫接种但与丙组的I系1次免疫的HI抗体滴度差异不显著，可能是由于2次I系注射间隔时间太短（仅2~3个月），因Ag与Ig中和而影响Ig产生，保护力也相应下降（攻毒保护率仅90%），故盲目增加免疫次数不一定能获得良好的免疫效果。

4.3 不同免疫程序鸡群ND微量法Ig检测结果表明，甲组HI抗体滴度平均值为6.29log2，而丙组则为4.53log2。甲组HI抗体平均水平比丙组高，其均数差异显著性检验结果p<0.01，表明其差异极显著。说明用同一种疫苗免疫不同年龄的鸡，其Ig滴度和保护率不尽相同（甲组攻毒保护率100%而丙组仅90%）。

建议广大农村特别是凉山彝族少数民族地区，在新鸡老鸡混合放养，且不具备免疫检测条件的情况下，在对鸡群进行常规免疫后，于冬季（1~2月份），对当年新鸡（9~10月龄）和老鸡（2年以上）普遍I系苗接种1次，改夏季普防为冬季普防，可使春季孵出的小鸡获得较一致的母源Ig。同时，冬季普防也有利于疫苗的保存、运输和使用。以上试验研究结果，诣指对上述地区鸡群制定一个合理的免疫程序，给新城疫流行地区的鸡群提供强有力的保护。

[1]蔡宝祥.家畜传染病学[M].北京:中国农业出版社，2002:304-308.

[2]陈宝秋，曹静.商品蛋鸡免疫程序的制定要点 [J].家禽科学，2005（1）:65-68.

[3]坤庆功.免疫增强剂在鸡疫病防治中的应用[J].动物医学进展，2005，26（10）:28-32.

[4]吴竹梅，江海涛.鸡新城疫免疫应注意的几个问题 [J].卫生防疫，2008（11）:111.

[5]索朗斯珠，查果，强巴央宗，等.藏鸡新城疫免疫程序的研究及预防对策[J].西藏科技，2005，152（12）:37-38.