洛伐他汀胶囊质量控制的高效液相色谱方法

韩媛媛,赵燕燕,李月秋,杜光玲,白洁

(河北大学医学实验中心,河北保定 071000)

洛伐他汀胶囊质量控制的高效液相色谱方法

韩媛媛,赵燕燕,李月秋,杜光玲,白洁

(河北大学医学实验中心,河北保定 071000)

利用高效液相色谱法(HPLC)建立洛伐他汀胶囊质量控制方法.采用VP-ODS(150 mm×4.6 mm i.d)柱,流动相为V(甲醇)∶V(磷酸缓冲溶液(p H=4.0))=78∶22,流速1.0 mL/min,检测波长238 nm,进样体积10μL,柱温为室温.洛伐他汀在0.004～1.000 g/L内,峰面积与质量浓度呈良好线性关系(r=0.999 9),平均回收率99.19%(n=9),方法精密度RSD为0.32%(n=6),最小检出限3 ng.该方法简单,准确,重现性好,可应用于洛伐他汀胶囊的质量控制.

洛伐他汀胶囊;高效液相色谱法;质量控制

洛伐他汀(lovastatin)是羟甲戊二酸单酰辅酶A(HM G-CoA)还原酶抑制剂[1],属常见的降血脂药物.而且随着各方面研究开展,证实洛伐他汀除了有调脂作用外,还有许多非调脂作用[2].测定洛伐他汀的分析方法主要有紫外分光光度法(UV)[3-4]和HPLC法[5-7].HPLC方法稳定,重现性好,目前广泛应用于药物质量控制领域[8-9].本研究建立的洛伐他汀胶囊HPLC测定方法,具有流动相体系简单、分离度好、灵敏度高的特点,经2005版药典中规定的药品质量方法进行验证,结果准确可靠,可用于洛伐他汀胶囊含量和有关物质的同时测定以及质量控制.

1 实验部分

1.1 仪器与试药

LC-10A Tvp高效液相色谱仪(日本岛津公司),SPD-M 10vp检测器,Class-vp工作站;洛伐他汀对照品(中国药品生物制品检定所,批号:100600-200301,纯度为99.4%);洛伐他汀胶囊对照药品(黑龙江肇东华富药业有限责任公司,批号:040901);洛伐他汀胶囊样品(实验室自制,规格20 mg);甲醇(色谱纯,天津康科德科技有限公司);其他试剂均为分析纯.

1.2 色谱条件

色谱柱:Shim-pack VP-ODS(150 mm×4.6 mm i.d.);流动相:V(甲醇)∶V(磷酸缓冲溶液(p H=4.0))=78∶22;流速1.0 mL/min;进样体积10μL;检测波长238 nm;室温测定.

1.3 溶液的制备

精密称取洛伐他汀对照品适量,加流动相使溶解并制成每1 m L含洛伐他汀0.2 m g的溶液,作为对照品溶液;精密称取洛伐他汀胶囊内容物适量(相当于洛伐他汀20 m g),置100 m L量瓶中,加流动相约80 m L,振摇使溶解,用流动相稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液;按处方比例称取模拟空白辅料适量,置10 m L容量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,滤过,作为空白对照溶液.

有关物质测试液配制:取上述供试品溶液4 m L,在低温加热条件下,分别加入0.1 mo l/L NaOH或0.1 mo l/L HCl各1 m L放置1 h,用酸或碱中和后,用流动相稀释至原体积,作为碱破坏和酸破坏样品;量取供试品溶液4 m L,在100℃水浴中加热0.5 h近干,用流动相稀释至原体积,作为高温破坏样品;量取供试品溶液4 mL,加入质量分数为30%双氧水放置2 h后用流动相补充至原体积,作为氧化破坏样品.

1.4 标准曲线的绘制

精密称取对照品适量,用流动相制成0.004,0.04,0.1,0.2,0.6,1 g/L系列质量浓度的溶液,按“1.2”色谱条件进样测定,记录峰面积,以峰面积对进样量回归,绘制标准曲线.

2 结果与分析

2.1 检测波长的确定

分别称取3批供试样品、对照品以及按处方比例配制的模拟空白辅料适量,配制供试品溶液、对照溶液及空白辅料溶液,并在200～400 nm的波长内进行紫外扫描.3批样品均在230,238与246 nm处有紫外吸收,其中在238 nm处为最大吸收,与对照品测定结果一致.辅料在此扫描范围内没有吸收,对方法无干扰.故选取238 nm做为检测波长.

2.2 系统适用性实验

对空白辅料溶液、对照品溶液、供试品溶液,按“1.2”色谱条件进行色谱分析,HPLC谱图见图1.结果表明,辅料对洛伐他汀胶囊含量测定无干扰.

2.3 方法专属性实验

分别对碱破坏、酸破坏、高温破坏、氧化破坏有关物质测试液按“1.2”色谱条件进行色谱分析,HPLC谱图见图2.由图可知,在碱、酸、热、氧化等破坏条件下得到的降解产物在该色谱条件下均能与洛伐他汀峰得到良好分离.结果表明,本文建立的HPLC法具有良好的专属性.

图1 系统适用性实验色谱Fig.1 Chromatogram of system suitability

图2 HPLC方法专属性考察色谱Fig.2 Chromatogram sof the exclusion inspection of HPLCmethod

2.4 线性范围与检出限

按“1.4”绘制标准曲线,所得线性方程为y=3.012×107x+1.071×105,r=0.999 9.结果显示:洛伐他汀在质量浓度0.004～1.000 g/L内与峰面积呈良好线性关系.

取洛伐他汀对照品适量,分别用流动相配制成系列浓度的溶液,进样,按3倍信噪比计算检测限,得到最低检出限为3 ng.

2.5 精密度实验

取按“1.3”制备的对照品溶液,照“1.2”色谱条件进行色谱分析,并记录色谱峰面积,连续进样6次,计算峰面积的RSD=0.32%,符合精密度实验要求.

2.6 重复性实验

按“1.3”方法分别配制供试品溶液6份,照色谱条件进行分析,并记录洛伐他汀峰面积,其RSD=0.99%(n=6),结果表明测定方法重现性良好.

2.7 稳定性实验

按“1.3”方法配制供试品溶液,分别在0,2,4,8,12 h进样,考察溶液的稳定性.计算峰面积的RSD=0.074%(n=6),结果表明,在12 h内供试品溶液稳定.

2.8 回收率实验

精密称取洛伐他汀对照品,按供试品溶液质量浓度(0.2 mg/m L)的80%,100%和120%分别配制低、中、高3种质量浓度的溶液各3份(A,B,C),其中每份中分别按比例加入一定量的辅料,照“1.2”色谱条件进样测定,计算回收率,结果见表1.

表1 回收率实验结果(n=9)Tab.1 Results of recovery test(n=9)

2.9 有关物质测定

精密称取洛伐他汀胶囊内容物和洛伐他汀标准品适量,分别加流动相制成每1 mL中约含洛伐他汀0.2 m g的供试品溶液和每1 m L中约含洛伐他汀2μg的对照品溶液.照“1.2”色谱条件进样20μL.供试品溶液的色谱图中最大杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的30%,各杂质峰面积的和不得大于对照溶液的主峰面积.结果见表2,表明:3批洛伐他汀胶囊的有关物质测定结果符合以上相关规定.

2.10 样品含量测定

对自制3批样品及对照药品按“1.3”方法配制供试品溶液,照“1.2”色谱条件进样分析,洛伐他汀占标示量的质量分数结果见表2.

表2 有关物质和质量分数测定结果Tab.2 Results of content and related substance determ ination

∑A杂代表各杂质峰面积的和占对照溶液的主峰面积的百分数;A最大杂质代表最大杂质峰面积占对照溶液主峰面积的百分数.

3 结论

本研究应用HPLC法测定洛伐他汀胶囊的含量和有关物质,方法简单可靠,重现性好,可作为洛伐他汀的检测方法,用于洛伐他汀胶囊的质量控制.通过对本实验室自制洛伐他汀胶囊含量和有关物质的检查,结果均符合药典相关规定,与市售对照药品含量相近,且不同批号之间无明显差异,稳定性较好,可向药厂推广应用.

[1]张印俊.降血脂药物的研究进展[J].国外医药抗生素分册,2003,24(6):241-244.

[2]孔德玲.他汀类药物非调脂现状[J].天津药学,2005,17(6):57-59.

[3]张建国,刘文华.紫外分光光度法测定洛伐他汀胶囊含量[J].中国生化药物杂志,1999,20(3):152.

[4]张惠霞,李平,禹风英,等.紫外分光光度法测定洛伐他汀片的含量[J].药物分析杂志,1999,19(1):60-61.

[5]冯建立,许振良,杨志和,等.洛伐他汀原料的质量研究[J].中国药房,2007,18(31):2450-2451.

[6]陈锡强.高效液相色谱法测定洛伐他汀胶囊的含量[J].中国药业,2006,15(17):40.

[7]郭瑞峰,郄冰冰,张西如,等.高效液相色谱法法测定洛伐他汀片剂的有关物质[J].中国实用医药,2009,4(15):12-13.

[8]刘岩,王洪宇,王英锋,等.HPLC-PDA法对中成药养心生脉颗粒丹参素含量的测定[J].河北大学学报:自然科学版,2006,26(3):266-269.

[9]戚燕,杨庆云,吴松.HPLC法测定匹诺塞林含量及有关物质[J].药物分析杂志,2009,29(8):1297-1300.

(责任编辑:梁俊红)

Quality Control of Lovastatin Capsule by HPLC

HAN Yuan-yuan,ZHAO Yan-yan,LIYue-qiu,DU Guang-ling,BAIJie
(Experimental Center of Medicine,Hebei University,Baoding 071000,China)

The quality contro l method was established by determinating the content and related substance of lovastatin capsule by HPLC.The VP-ODS(150 mm×4.6 mm i.d)co lum n was used and the mobile phase was consisted of V(methano l)∶V(p H=4.0 phosphate)=78∶22,the flow rate was 1.0 m L/min,the detective wavelength was238 nm,the injiection vo lum n was10μL,the column temperatu re w as room temperature.A good linearity(r=0.999 9)w as obtained in the concentration range of 0.004～1.000 g/L,and the average recovery of lovastatin was 99.19%(n=9).The method p recision was 0.32%(n=6),and the lowest examination limitswas3 ng.Themethod is simp le,accurate and rep roducible.It can be app lied fo r the quality control of lovastatin capsule.

lovastatin cap sule;HPLC;quality contro l

R 917

A

1000-1565(2010)06-0662-05

2010-02-20

河北省教育厅资助项目(2009315);河北省卫生厅资助项目(20090570);河北省中医药管理局资助项目(2008072);保定市科技局科学研究与发展计划项目(09ZF010)

韩媛媛(1980—),女,河北固安人,河北大学讲师,主要从事色谱分析方向的研究.

赵燕燕(1960—),女,天津人,河北大学教授,主要从事将现代分离技术用于药学、临床、环境等方面的研究工作.